細胞增殖實驗就是對細胞生長的測定,，常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測。閱讀大量文獻發(fā)現(xiàn),，如果想證明一個***或者說是一個作用條件對細胞生長的影響,，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標準來證明作用效果。所以,，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實驗操作和注意事項,。MTT實驗操作1、在96孔板中培養(yǎng)細胞,，設(shè)置對照組（細胞+無血清培養(yǎng)基）,、實驗組和空白組（無血清培養(yǎng)基），可以采用如下圖的排版方式：2,、在對照組和實驗組中,，生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比.上海cck8檢測細胞增殖步驟

實驗材料及試劑96孔板、CO2培養(yǎng)箱,、酒精燈、移液***,、酶標儀等,；細胞、CCK8等,。實驗內(nèi)容取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期細胞,，每孔按4×103個接種至96孔板中，每組設(shè)置8個復(fù)孔,，置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，待細胞貼壁后轉(zhuǎn)染相應(yīng)質(zhì)粒后。繼續(xù)培養(yǎng)48h后,，棄含藥培養(yǎng)基,，每孔加入新鮮配制的含10ｕL的毒性檢測液CCK8，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h后,，用酶標儀測波長為450nm的OD值,。實驗重復(fù)3次，取實驗結(jié)果的平均值作為**終實驗結(jié)果,。按公式計算生長***率＝[(對照組OD－實驗組OD)/對照組OD]×**,，以分組為橫坐標,，生長***率為縱坐標，繪制細胞生長上海cck8同仁在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5% CO2）.

CCK法的操作步驟（更多內(nèi)容請見說明書）：實驗一：細胞活性檢測1,、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）,。2,、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）,。3,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。4,、用酶標儀測定在450nm處的吸光度,。5、若暫時不測定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定,，吸光度不會發(fā)生變化,。

CCK8檢測原理圖2操作步驟1、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）,。2、細胞處理（不同實驗處理方式不同）,。3,、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）,。4,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。5,、用酶標儀測定在450nm處的吸光度,。6、若暫時不測定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定,，吸光度不會發(fā)生變化,。培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)液容易揮發(fā)，為減少誤差,，建議培養(yǎng)板周圍的四邊每孔只加培養(yǎng)基,。

cck8試劑加入后孵育時間,，隨著時間的增加，OD值就會增大,?？傊瓌t就是把OD值控制在1.0左右。這里我考察了0.5h,、1.0h,、2.0h。

再說一下關(guān)于種板設(shè)置問題,。眾所周知周圍一圈孔因為邊緣效應(yīng)都是不用來做實驗的,。一般每組樣品我會設(shè)置6個復(fù)孔，得到的OD值去掉**大值與**小值,，其余取平均值,。我用的是排***，會省很多力氣,，但是也會增大組內(nèi)誤差,。這個只有通過校正移液***和選用**適***頭了。

能力有限,，表達不清的大家湊合著看看吧,。有疑問的歡迎大家留言討論，我們的目標是共同進步,，哈哈,。 加入CCK8那會空白對照組的細胞剛好長滿嗎？上海cck8和mtt哪個更好

CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8,，也就是進行細胞計數(shù)的一個盒子,。上海cck8檢測細胞增殖步驟

培養(yǎng)基對CCK8測定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量）,，會與CCK8發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生實驗誤差,，因此所用培養(yǎng)基要一致,，不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93,；1640培養(yǎng)基在0.5左右,。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會增加空白吸收,，但不影響測定,，扣除空白吸收即可，可見空白孔非常重要,，所以每次實驗均要設(shè)定空白對照,。另外,，血清不影響測定。有師妹在做一個HIF1a***劑實驗時,，多加了這個***劑的濃度,，上海cck8檢測細胞增殖步驟