CCK8檢測細(xì)胞增殖和毒性實(shí)驗(yàn)佰歐晶生物專注于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)及藥學(xué)科研咨詢和技術(shù)服務(wù)，致力于疾病關(guān)鍵基因功能研究,，中藥功能及機(jī)理研究,，納米靶向***研究，**研究整體方案服務(wù)。CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑用于簡便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）,。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析,。接種時(shí)注意細(xì)胞懸液一定要混勻,，以避免細(xì)胞沉淀下來，導(dǎo)致每孔中的細(xì)胞數(shù)量不一致,。浙江cck8視頻

CKK-8原理

CellCountingKit,，CCK-8試劑含有WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽），是近年新開發(fā)的一種更新的水溶性四唑鹽檢測,，原理與WST-1類似：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan）,。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比，用酶聯(lián)免疫分析儀測定其光吸收值可間接反映活細(xì)胞數(shù)量,，在一定細(xì)胞數(shù)量范圍內(nèi)甲臜形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比,。

天津cck8標(biāo)準(zhǔn)曲線CCK8細(xì)胞增值檢測實(shí)驗(yàn)簡介.

CCK8的優(yōu)點(diǎn)：方法方便，不用洗滌細(xì)胞,，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑,；CCK-8快速檢測；CCK-8檢測靈敏度高,，細(xì)胞密度低也可以檢測,；CCK-8的重復(fù)性優(yōu)于MTT法,；CCK-8對(duì)細(xì)胞的毒性很?。籆CK-8細(xì)胞活性檢測試劑中是1瓶溶液，不需要現(xiàn)用現(xiàn)配,，即開即用,。CCK8的缺點(diǎn)：相比于與MTT法，CCK8的價(jià)格比較昂貴生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析,。用途：***篩選、細(xì)胞增殖測定,、細(xì)胞毒性測定,、**藥敏試驗(yàn)。

五,、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：·若暫時(shí)不測定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時(shí)內(nèi)測定,，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。·如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話,，可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基,，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基）,，去掉***影響,。當(dāng)然***影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基,，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可,。·當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的**小接種量至少為1,000個(gè)/孔(100μl培養(yǎng)基),。檢測白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低,，因此推薦接種量不低于2,500個(gè)/孔(100μl培養(yǎng)基)。**藥敏試驗(yàn)：這個(gè)是用的比較廣的,，我見過做**的團(tuán)隊(duì),，買CCK-8都是一整箱，一整箱的買,。

CCK8實(shí)驗(yàn)操作CCK8的優(yōu)勢在于對(duì)細(xì)胞沒有毒性,，可以直接加入細(xì)胞中長時(shí)間孵育，而不用考慮試劑本身對(duì)細(xì)胞帶來的影響,。1,、向96孔板中每孔加入細(xì)胞100ul，置于培養(yǎng)箱中孵育24小時(shí),，96孔板的排版情況和上述MTT相同,，在這里不重復(fù)介紹了。2、向各孔中加入10ul的CCK-8檢測溶液,。如若檢測的細(xì)胞增殖或毒性試驗(yàn),，需在此之前加入作用***培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間，例如6h/12h/24h等,，然后再加入CCK8檢測液,。3、培養(yǎng)箱中孵育1～4小時(shí),，比較好反應(yīng)時(shí)間以細(xì)胞具體顯色程度為準(zhǔn),。CCK8試驗(yàn)的總體實(shí)驗(yàn)心得.北京cck8接種細(xì)胞密度

CCK8的實(shí)驗(yàn)步驟、實(shí)驗(yàn)分組及檢測方法.浙江cck8視頻

酚紅和血清對(duì)CCK法的檢測不會(huì)造成干擾,；◆細(xì)胞毒性非常低,，因此加入WST-8顯色后，可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到比較好測定時(shí)間,。實(shí)驗(yàn)二：細(xì)胞增殖-毒性檢測1,、在96孔板中配置100μL的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)（37℃,，5%CO2）,。2、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測物質(zhì),。3,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6、12,、24或48小時(shí)）,。4、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡,，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）,。5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí),。6,、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。浙江cck8視頻