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慢病毒轉(zhuǎn)染試劑

來源: 發(fā)布時間:2022-03-05

簡介:X-tremeGENE HP DNA轉(zhuǎn)染試劑是一種高效的無動物源成分的低毒轉(zhuǎn)染試劑,,兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基,可用于轉(zhuǎn)染各類真核細胞(包括昆蟲細胞)以及多種難轉(zhuǎn)染細胞系,。優(yōu)勢:

1.簡單易用的多組分混合試劑,,無動物源性成分,室溫穩(wěn)定,。

2.高轉(zhuǎn)染效率,,對于原代細胞和使用其它試劑難轉(zhuǎn)染的**細胞系有高轉(zhuǎn)染效率。

3.使用細胞毒性低的試劑,,結(jié)果相關(guān)性好,。

圖2. X-tremeGENE HP高效低毒的轉(zhuǎn)染性能,。通過X-tremeGENE HP和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將GFP表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至CHO-K1。A和C圖的熒光視野顯示了實驗后兩種方法均獲得了成功轉(zhuǎn)染的細胞,。但B和D圖的明亮視野表明脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法的細胞毒性遠高于X-tremeGENE HP,,導(dǎo)致存活細胞量減少(圖片來源于網(wǎng)絡(luò))。 采用Lipofectamine RNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染A549細胞時,,實現(xiàn)了比較好的基因***效果和比較低的細胞毒性,。慢病毒轉(zhuǎn)染試劑

細胞轉(zhuǎn)染過程:X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑簡介:X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑是脂質(zhì)和其它成分混合而得的一類多組份試劑,溶于80%乙醇中,,經(jīng)0.2μm濾膜過濾,,然后封裝于玻璃小瓶中,適用于細胞分析的多種實驗,。優(yōu)勢:1.具有細胞毒性極低,、轉(zhuǎn)染后細胞存活率高,生成可信任的生理學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù),。2.操作簡便,、節(jié)省時間,只需對X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑進行簡單稀釋,,再與質(zhì)粒DNA共同孵育,,即可直接向細胞添加反應(yīng)混合物(有無血清均可)。3.對于常用細胞無需進行費時費力慢病毒轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染后6h觀察細胞狀態(tài),,并更換培養(yǎng)基,,繼續(xù)培養(yǎng)24 h后收取細胞,用PBS洗滌3次以上,,以備RNA抽提,。

細胞轉(zhuǎn)染過程X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑簡介:X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑是脂質(zhì)和其它成分混合而得的一類多組份試劑,溶于80%乙醇中,,經(jīng)0.2μm濾膜過濾,,然后封裝于玻璃小瓶中,適用于細胞分析的多種實驗,。優(yōu)勢:1.具有細胞毒性極低、轉(zhuǎn)染后細胞存活率高,,生成可信任的生理學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù),。2.操作簡便、節(jié)省時間,,只需對X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑進行簡單稀釋,,再與質(zhì)粒DNA共同孵育,即可直接向細胞添加反應(yīng)混合物(有無血清均可),。3.對于常用細胞無需進行費時費力的優(yōu)化工作,。

基于磷酸鈣成分的轉(zhuǎn)染試劑,,其主要作用原理是與DNA通過沉淀反應(yīng)形成磷酸鈣-DNA復(fù)合物,粘附到細胞膜表面,,借助內(nèi)吞作用進入細胞質(zhì),。pH值,鈣離子濃度,,DNA濃度,,沉淀時間,細胞孵育時間乃至各組分加入順序都可能對結(jié)果產(chǎn)生影響,,因此實驗條件摸索和優(yōu)化時間較長,,且重復(fù)性不佳?;谥|(zhì)體的轉(zhuǎn)染試劑包括中性脂質(zhì)體和陽離子脂質(zhì)體兩種,。中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA,借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細胞膜內(nèi),。目前應(yīng)用比較***的是帶正電的陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑,,DNA并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中,而是帶負(fù)電的DNA自動結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上,,形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物,,從而吸附到帶負(fù)電的細胞膜表面,經(jīng)過內(nèi)吞被導(dǎo)入細胞,。此方法操作簡單,,重復(fù)性好,在體外轉(zhuǎn)染中有很高的效率,,但具有一定的細胞毒性,,可能會干擾細胞的代謝。且活性受血清影響,,需要去除血清,。將20μL轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入孔中的細胞懸液中,前后移動培養(yǎng)皿,,混合均勻,;

用 LipoD293? 體外 DNA 轉(zhuǎn)染試劑(Ver. II)(上圖)和受歡迎的品牌產(chǎn)品 Invitrogen 公司的 293fectin?(下圖)轉(zhuǎn)染 pEGFP-C1 質(zhì)粒到 HEK293 細胞中。轉(zhuǎn)染 24 小時后,,細胞的尼康 Eclipse 熒光顯微鏡 DIC 成像圖(左側(cè))和熒光成像圖(右側(cè)),。

對懸浮 HEK293F 產(chǎn)生蛋白質(zhì)效率的比較/

30 毫升的 293F 細胞分別使用 LipoD293?試劑、293fectin,、Xfect 和 Fugene 6 等轉(zhuǎn)染試劑按照生產(chǎn)商的標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)染步驟將 pEGFP-6xHis 質(zhì)粒導(dǎo)入細胞表達,,用量為 LipoD293? 試劑,20 微克,,所有其他三種轉(zhuǎn)染試劑均使用 30 微克質(zhì)粒 DNA,。 世界上低價的細胞轉(zhuǎn)染試劑PEI,這里有**詳細的操作步驟!上?;蜣D(zhuǎn)染試劑多少錢

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圖5.Invivofectamine3.0試劑與靶向FVII的siRNA在單次靜脈注射后可在肝臟中引起劑量反應(yīng)的敲低現(xiàn)象。Invivofectamine3.0試劑與靶向FVII的AmbioninvivosiRNA以0.02到2mg/kg的劑量進行注射,。隨后分離血清并檢測FVII蛋白的水平(Biophen顯色檢測),。持續(xù)敲低能力在單次注射后可觀察到更長的敲低時間圖6.使用三種不同濃度的靶向FactorVII(FVII)的siRNA研究劑量效應(yīng)。siRNA分子與Invivofectamine3.0試劑形成復(fù)合物后分別以1,、0.5、及0.25mg/kg的劑量進行注射,。在第2、5,、9、16,、23及30日收集血清,并使用顯色法對血清進行分析以確定FVII蛋白的敲低效果,。低毒性慢病毒轉(zhuǎn)染試劑