轉(zhuǎn)染 48 小時(shí)后,使用尼康熒光顯微鏡 GFP 熒光進(jìn)行成像(左側(cè)四幅圖),,A:LipoD293,; B:293fectin;C:Xfect 和 D:Fugene 6. 帶有 6xHis 標(biāo)記的 GFP 熒光蛋白使用 Ni-NTA 親和柱技術(shù)實(shí)現(xiàn)分離,。5 微升洗脫液載入 SDS-PAGE 凝膠電泳分離并進(jìn)行 Coomassie 亮藍(lán)染色(右上圖 E),,道 1 為 LipoD293293、道 2 為標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子,、道 3 為 Xfect,、道 4 為 293fectin 和道 5 為 Fugene 6。這四種轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)生蛋白質(zhì)的效率被進(jìn)一步定量(見(jiàn)右下圖 F),。產(chǎn)生慢***的比較
通過(guò) LipoD293? 試劑(升級(jí)版)和 Lipofectamine LTX(LTX)試劑將三個(gè) cDNAs 共轉(zhuǎn)染進(jìn) 293T 細(xì)胞,。一個(gè) GFP 載體,pHR-SIN-cppt-CMVEWP 被用來(lái)測(cè)定慢***的滴度,。在 24 孔板中每孔加入 1x10^5 293T 細(xì)胞,,其次是分別添加不同量的慢定都上清液,1 微升(上圖)和 10 微升(下圖),。 帶你了解性價(jià)比比較高的轉(zhuǎn)染試劑-PEI轉(zhuǎn)染.上海動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑原理
細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)程:X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑簡(jiǎn)介:X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑是脂質(zhì)和其它成分混合而得的一類多組份試劑,,溶于80%乙醇中,經(jīng)0.2μm濾膜過(guò)濾,,然后封裝于玻璃小瓶中,,適用于細(xì)胞分析的多種實(shí)驗(yàn)。優(yōu)勢(shì):1.具有細(xì)胞毒性極低,、轉(zhuǎn)染后細(xì)胞存活率高,,生成可信任的生理學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù)。2.操作簡(jiǎn)便,、節(jié)省時(shí)間,,只需對(duì)X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行簡(jiǎn)單稀釋,再與質(zhì)粒DNA共同孵育,,即可直接向細(xì)胞添加反應(yīng)混合物(有無(wú)血清均可),。3.對(duì)于常用細(xì)胞無(wú)需進(jìn)行費(fèi)時(shí)費(fèi)力的優(yōu)化原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑推薦該試劑可將RNA導(dǎo)入多種細(xì)胞系,包括原代細(xì)胞和懸浮細(xì)胞.
基于陽(yáng)離子聚合物的轉(zhuǎn)染試劑,,帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用,,并通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞,。其又分為樹枝狀陽(yáng)離子聚合物和線性陽(yáng)離子聚合物兩類,前者細(xì)胞毒性相對(duì)較大,,后者細(xì)胞毒性較小,,但其轉(zhuǎn)染效率都高于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染,適用也較為廣范,。以上單一成分的轉(zhuǎn)染試劑或聚焦于提高效率或著重于降低細(xì)胞毒性,,可謂魚和熊掌不可兼得也。新一代轉(zhuǎn)染試劑,,不局限于單一成分,,混合了不同 配方的脂類(非脂質(zhì)體)、加上蛋白質(zhì)組分,、以及各種的 成分,,兼具了轉(zhuǎn)染效率高和細(xì)胞毒性小的優(yōu)勢(shì),且操作更加簡(jiǎn)單,,易于高通量,。
十全十美難,十全九美卻可以通過(guò)選擇一款好的轉(zhuǎn)染試劑來(lái)實(shí)現(xiàn),。理想的轉(zhuǎn)染試劑包括要具有較高的轉(zhuǎn)染效率,,細(xì)胞毒性低,操作簡(jiǎn)單可重復(fù),,價(jià)格還要可愛(ài)?,F(xiàn)在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室用的是脂質(zhì)體系列轉(zhuǎn)染試劑,但脂質(zhì)體對(duì)細(xì)胞毒性大,,某些細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率還很低,,看單孔的價(jià)格也很不美好。尤其是在轉(zhuǎn)染RNA方面,,脂質(zhì)體的劣勢(shì)較明顯,。QIAGEN在轉(zhuǎn)染試劑領(lǐng)域的研發(fā)思路與其核酸純化領(lǐng)域的精而專,全而深不同,。在轉(zhuǎn)染試劑的研發(fā)過(guò)程中,,另辟蹊徑,研精致思進(jìn)而做到小而美的轉(zhuǎn)染產(chǎn)品,。從市面上眾多轉(zhuǎn)染試劑的一片紅海中,,神奇的開辟出一塊藍(lán)海,為客戶烹制出了幾款高效,、快速,、低毒又親民的轉(zhuǎn)染試劑私房菜。從而造成了細(xì)胞群內(nèi)的基因型和表型接近一致的情形。
LipoFectMax?轉(zhuǎn)染試劑 LipoFectMax?轉(zhuǎn)染試劑具有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn):高轉(zhuǎn)染效率,,適用于多種細(xì)胞系對(duì)細(xì)胞毒性低適用于DNA和RNA的轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染前無(wú)需去除細(xì)胞培養(yǎng)基或血清轉(zhuǎn)染后無(wú)需清洗細(xì)胞或更換培養(yǎng)基
1轉(zhuǎn)染效率高,,適用于多種細(xì)胞系圖1. LipoFectMax?轉(zhuǎn)染試劑以綠色熒光蛋白(GFP)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染幾種常見(jiàn)細(xì)胞系,通過(guò)檢測(cè)GFP信號(hào)比較轉(zhuǎn)染效率,。
2細(xì)胞毒性低圖2.LipoFectMax? ,,LipoFectamine®2000及LipoFectamine®3000分別對(duì)A549細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作,通過(guò)計(jì)算轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞存活率比較細(xì)胞毒性,。 pei轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書是什么?原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑多少錢
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