LNCap細胞的培養(yǎng)和傳代嚴格由ATCC建議的操作步驟進行,,與pBabe-hygro-SSeCKs(1.5ug)和pEGFP-N3(1:1,,共1.0微克)共轉染(6孔板中每孔的量),,并用LipoD293?試劑(左圖)和FugeneHD(右圖)分別按照生產制造商的科學實驗步驟進行轉染,。轉染24小時后,用尼康Eclipse2000熒光顯微鏡檢測GFP熒光,,以此來評價轉染效率,。在血清和***的存在下,HepG2和SaoS-2細胞用pEGFP-N3和pSV-β-半乳糖苷酶DNAs分別轉染達到95%的細胞融合,。轉染48小時后,,分別通過Zeiss510激光共聚焦顯微鏡和β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測效率。MagTransf 磁轉染試劑實現(xiàn)高效轉染解析.上海病毒轉染試劑價格
胞因素用低代數(shù)的細胞293T細胞非常重要??!當然也要保證細胞狀態(tài)特別好,沒有細微污染,,鋪板均勻,。飽滿狀態(tài)好的細胞才可以產生較高滴度的***哦,!載體系統(tǒng)在實驗中**常見的慢***載體系統(tǒng)有三質粒系統(tǒng)、四質粒系統(tǒng),,當然使用三質粒系統(tǒng)的小伙伴居多,,一定要選擇成熟商業(yè)化的載體系統(tǒng)!載體構建和質粒抽提純化我們要注意是否構建時導致質粒載體重組或某個部件缺失,,或污染別的質粒、雜物?中抽純化是否污染?要養(yǎng)成同時做陰性對照的習慣:建議目的基因載體和陰性對照GFP載體是同一批,,且建議每次包裝都如此操作,,要保證目的基因的表達載體構建純化良好,質粒間比例得當,,并且對質粒進行酶切驗證,。上海病毒轉染試劑價格連續(xù)細胞系具有無限增殖的潛能,通常要比原代或有限細胞更易處理.
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在難轉染細胞(原代大鼠動脈平滑肌細胞)轉染效率的比較
圖片由芝加哥大學肺和重癥護理系的 Nickolai Dulin 博士友情提供
制備大鼠的動脈平滑肌原代細胞并用使用 LipoD293?試劑(左圖)和 Lipofecatmine 2000(L2K, 右圖)分別將 GFP 的 cDNA(pEGFP-N3)按照生產制造商的轉染操作步轉染至該細胞,。轉染 24 小時后,用尼康 Eclipse 2000 熒光顯微鏡檢測 GFP 熒光,,以此來評價轉染效率,。
對難轉染細胞 LNCap 細胞轉染效率的比較
圖片由羅斯威爾公園**研究所(Roswell Cancer Institute)的 Lyn Gao 博士友情提供
siRNA脫靶效應會導致細胞死亡,并引起分析問題,。動物轉染試劑
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