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上海電轉(zhuǎn)染試劑原理

來源: 發(fā)布時間:2023-04-14

轉(zhuǎn)染48小時后,,使用尼康熒光顯微鏡GFP熒光進行成像(左側(cè)四幅圖),,A:LipoD293,;B:293fectin;C:Xfect和D:Fugene6.帶有6xHis標記的GFP熒光蛋白使用Ni-NTA親和柱技術(shù)實現(xiàn)分離,。5微升洗脫液載入SDS-PAGE凝膠電泳分離并進行Coomassie亮藍染色(右上圖E),道1為LipoD293293,、道2為標準蛋白分子,、道3為Xfect、道4為293fectin和道5為Fugene6,。這四種轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)生蛋白質(zhì)的效率被進一步定量(見右下圖F),。產(chǎn)生慢***的比較通過LipoD293?試劑(升級版)和LipofectamineLTX(LTX)試劑將三個cDNAs共轉(zhuǎn)染進293T細胞。一個GFP載體,pHR-SIN-cppt-CMVEWP被用來測定慢***的滴度,。在24孔板中每孔加入1x10^5293T細胞,,其次是分別添加不同量的慢定都上清液,1微升(上圖)和10微升(下圖),。將EntransterTM-R4000稀釋液和agomir稀釋液充分混合.上海電轉(zhuǎn)染試劑原理

確定希望輸送的運載物(如DNA,、RNA或蛋白質(zhì))根據(jù)不同實驗類型,我們可能需要將不同的運載物輸送到細胞內(nèi)部,,包括**常見的DNA,,用于基因編輯的siRNA,能夠更快表達蛋白的mRNA,,CRISPR-Cas9甚至是體內(nèi)轉(zhuǎn)染,。正確的了解您希望輸送的運載物是選擇可靠轉(zhuǎn)染產(chǎn)品的第一步。2希望轉(zhuǎn)染的細胞類型轉(zhuǎn)染的細胞類型可簡單分為兩大類,,連續(xù)細胞系和原代細胞,。連續(xù)細胞系具有無限增殖的潛能,通常要比原代或有限細胞更易處理,。但由于此類細胞經(jīng)歷過基因改變而變得具有無限增殖能力,,它們在培養(yǎng)過程中的表現(xiàn)可能無法必然地反映體內(nèi)狀態(tài)。轉(zhuǎn)染試劑多少錢各種轉(zhuǎn)染試劑成分分析.

細胞轉(zhuǎn)染實驗是生物醫(yī)學實驗室中**常規(guī)的研究手段,,目的是把外源基因,、蛋白或者小分子導入到靶細胞內(nèi)。目前主要有三種主流方法:生物轉(zhuǎn)染,,物理轉(zhuǎn)染和化學轉(zhuǎn)染,。其中生物轉(zhuǎn)染主要是利用***等微生物作為基因?qū)胼d體,以慢***,、腺***和腺相關(guān)***等**常見,,其侵染效率可以達到90%以上,但常因安全性等問題,,很多實驗室對其敬而遠之,。物理轉(zhuǎn)染主要包括顯微注射、電穿孔和基因***,,無論哪一種都需要特定的設備,,且一分錢一分貨,性能好的價格也都很性感電轉(zhuǎn)化化學轉(zhuǎn)染方法是生物醫(yī)學研究中**常用的轉(zhuǎn)染方法,,主要包括兩類:陽離子脂質(zhì)體和陽離子聚合物,。其基本原理是利用陽離子的化學分子與帶有負電荷的核酸通過正負電荷作用形成穩(wěn)定的復合物。

在難轉(zhuǎn)染細胞(原代大鼠動脈平滑肌細胞)轉(zhuǎn)染效率的比較圖片由芝加哥大學肺和重癥護理系的NickolaiDulin博士友情提供制備大鼠的動脈平滑肌原代細胞并用使用LipoD293?試劑(左圖)和Lipofecatmine2000(L2K,右圖)分別將GFP的cDNA(pEGFP-N3)按照生產(chǎn)制造商的轉(zhuǎn)染操作步轉(zhuǎn)染至該細胞,。轉(zhuǎn)染24小時后,,用尼康Eclipse2000熒光顯微鏡檢測GFP熒光,,以此來評價轉(zhuǎn)染效率。對難轉(zhuǎn)染細胞LNCap細胞轉(zhuǎn)染效率的比較圖片由羅斯威爾公園**研究所(RoswellCancerInstitute)的LynGao博士友情提供試劑可在單次靜脈注射后即可在肝臟中實現(xiàn)靶向敲低,。

LipofectamineRNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑是先進,、高效的siRNA輸送解決方案。目前尚無其他siRNA轉(zhuǎn)染試劑能夠在***的細胞系中(包括常見細胞類型,、干細胞,、原代細胞以及歷來難轉(zhuǎn)染的細胞類型)提供如此簡便、高效的siRNA輸送效果,。高效可在低siRNA濃度下獲得優(yōu)良的轉(zhuǎn)染效果相對于其他的siRNA轉(zhuǎn)染試劑,,LipofectamineRNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑可以獲得更佳的基因***效果。同在10nM和1nMp53siRNA下,,LipofectamineRNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑實現(xiàn)了更高的有效***細胞/未轉(zhuǎn)染細胞比率,,超過其他RNAi試劑。細胞培養(yǎng)系列 | 專為 293T 優(yōu)化的轉(zhuǎn)染試劑 Nano293T.上海真核細胞轉(zhuǎn)染試劑對照

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用LipoFectMax?轉(zhuǎn)染Hela細胞,,左圖轉(zhuǎn)染GFPcDNA,,右圖共轉(zhuǎn)染GFPCDNA和GFP靶向siRNA,。轉(zhuǎn)染siRNA后可以從右圖明顯看到基因沉默,。4適用于神經(jīng)細胞的轉(zhuǎn)染圖4.用LipoFectMax?和LipoFectamine®2000分別對小鼠神經(jīng)元細胞進行轉(zhuǎn)染綠色熒光白蛋白(GFP),轉(zhuǎn)染24小時后觀察轉(zhuǎn)染效果,,LipoFectMax?轉(zhuǎn)染效率(左圖)比LipoFectamine®2000(右圖)高5倍,。LipoFectMax?轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染試劑操作流程細胞毒性低圖2.LipoFectMax?,LipoFectamine®2000及LipoFectamine®3000分別對A549細胞進行轉(zhuǎn)染操作,,通過計算轉(zhuǎn)染后的細胞存活率比較細胞毒性,。上海電轉(zhuǎn)染試劑原理

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