CCK8檢測(cè)原理圖2操作步驟1,、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2,、細(xì)胞處理（不同實(shí)驗(yàn)處理方式不同）,。3、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）,。4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí),。5,、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。6,、若暫時(shí)不測(cè)定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定,，吸光度不會(huì)發(fā)生變化,。CCK-8用途：***篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定,、細(xì)胞毒性測(cè)定,、**藥敏試驗(yàn).上海cck8的r平方

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定，常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測(cè),。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個(gè)***或者說(shuō)是一個(gè)作用條件對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來(lái)證明作用效果,。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng),。MTT實(shí)驗(yàn)操作1,、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，設(shè)置對(duì)照組（細(xì)胞+無(wú)血清培養(yǎng)基）,、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無(wú)血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式：2、在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中,，每孔加入細(xì)胞懸液100ul上海cck8的r平方用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值,，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。

二,、優(yōu)點(diǎn)：·使用方便,，省去了洗滌細(xì)胞，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑,；·CCK-8法能快速檢測(cè),；·CCK-8法的檢測(cè)靈敏度很高，甚至可以測(cè)定較低細(xì)胞密度,；·CCK-8法的重復(fù)性?xún)?yōu)于MTT法,，MTT實(shí)驗(yàn)生成的formazan不是水溶性的，需要使用DMSO等有機(jī)溶劑溶解,；而本方法產(chǎn)生的formazan是水溶性的,，不但省去了溶解步驟，更因此而減少了該操作步驟帶來(lái)的誤差,；·CCK-8法對(duì)細(xì)胞毒性小,，可以多次測(cè)定選取比較好測(cè)定時(shí)間，與MTT方法相比線性范圍更寬,，靈敏度更高；·CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)試劑中為1瓶溶液,，毋需預(yù)制,，即開(kāi)即用,。

當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的**小接種量至少為1000 個(gè)/孔(100μl培養(yǎng)基),。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低,，因此推薦接種量不低于2500 個(gè)/孔(100μl培養(yǎng)基)。酚紅和血清對(duì)CCK8法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾,，可以通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光度而消去,。

注意事項(xiàng)CCK8可以檢測(cè)大腸桿菌，但不能檢測(cè)酵母細(xì)胞,。在細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每次測(cè)定的過(guò)程中需要避免細(xì)菌污染,，以免影響結(jié)果。CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個(gè)月,，在-20℃下避光可以保存1年,。當(dāng)在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)板**外一圈的孔**容易干燥揮發(fā),，由于體積不準(zhǔn)確而增加誤差,。一般情況下，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基,，不作為測(cè)定孔用,。在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間,，測(cè)定450 nm的吸光度即為空白對(duì)照,。 主要是重復(fù)性?xún)?yōu)于MTT；

沒(méi)有做過(guò)MTT實(shí)驗(yàn),，但其實(shí)原理及目的都是一樣的（反應(yīng)機(jī)理不一樣）,。都說(shuō)CCK8簡(jiǎn)單點(diǎn)而且數(shù)據(jù)更穩(wěn)定，所以就用了這個(gè)試劑盒,。CCK8的說(shuō)明書(shū)大家一定要認(rèn)真閱讀,，里面很多細(xì)節(jié)的問(wèn)題都有提到。而且說(shuō)明書(shū)里提供的一些關(guān)于各種細(xì)胞的種板數(shù)都很有參考價(jià)值,，因?yàn)槟鞘欠磸?fù)驗(yàn)證過(guò)的比較好數(shù)值,。但無(wú)論如何，做這個(gè)試驗(yàn)一定要摸條件,。你就算再懶,，這個(gè)懶不得，否則你都只是在做無(wú)用功,。以下言論全部以細(xì)胞毒性試驗(yàn)為前提,，如果你做的是促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的***的藥效實(shí)驗(yàn)?zāi)蔷土懋?dāng)別論了。那它的用途也就大致可以猜到,，和細(xì)胞增殖,、細(xì)胞毒性相關(guān)的實(shí)驗(yàn)都可以,。上海cck8的r平方

該方法已被***用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗*****篩選以及藥敏試驗(yàn)等,。上海cck8的r平方

貼壁生長(zhǎng)的時(shí)間我一般就直接讓它貼壁長(zhǎng)24h了,，這個(gè)時(shí)間細(xì)胞已經(jīng)貼壁完全，而且這樣設(shè)置時(shí)間對(duì)自己安排實(shí)驗(yàn)時(shí)間也方便,。沒(méi)人愿意大半夜爬起來(lái)做實(shí)驗(yàn)吧,。3、加藥后的孵育時(shí)間,，我的實(shí)驗(yàn)摸了3個(gè)時(shí)間,，24h，48h,，72h,。然后根據(jù)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性（RSD）、OD值的范圍（1.0左右）這些來(lái)選擇比較好的時(shí)間,。太長(zhǎng)了就沒(méi)有必要了,，細(xì)胞呆在孔里幾天不換液結(jié)果可想而知了。4,、CCK8試劑加入量,，說(shuō)明書(shū)中明確寫(xiě)出建議加入量為培養(yǎng)基體積的10%。這里有一個(gè)問(wèn)題：假設(shè)我要孔內(nèi)是200微升的體系,，即細(xì)胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢,，還是細(xì)胞懸液+藥液=200微升，cck8不算在體系內(nèi)呢,。關(guān)于這一點(diǎn)文獻(xiàn)報(bào)道不一致,。本人**終采用的是后者。上海cck8的r平方

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