在復蘇時，一般以很快的速度升溫,，1-2分鐘內(nèi)即恢復到常溫,，細胞內(nèi)外不會重新形成較大的冰晶，也不會暴露在高濃度的電解質(zhì)溶液中過長的時間,，從而無冰晶損傷和溶質(zhì)損傷產(chǎn)生，凍存的細胞經(jīng)復蘇后仍保持其正常的結(jié)構(gòu)和功能,。冷凍保護劑對細胞的冷凍保護效果還與冷凍速率、冷凍溫度和復溫速率有關(guān),。而且不同的冷凍保護劑其冷凍保護效果也不一樣諾為生物所提供的STEMCELLTechnologiescGMP級別,、無血清的細胞凍存液可使長期儲存的細胞保持高存活率,，可應(yīng)用于臨床細胞和特殊珍貴細胞的凍存。dmso在凍存液中的作用?廣州凍細胞凍存液如何使用

細胞復蘇佩戴眼鏡和手套,，從液氮中取出凍存的細胞管,。迅速放入38℃水浴中，并不時搖動,，在1分鐘內(nèi)使其完全融化,，然后在無菌條件下取出細胞。1200rpm/min離心5-10min,，棄去上清,，加入適量培養(yǎng)液混勻后接種于培養(yǎng)瓶中，次日更換一次培養(yǎng)液,。

細胞凍存和復蘇操作步驟：

細胞凍存和復蘇采取“慢凍快融”的原則,，慢速冷凍可使細胞內(nèi)的水份滲出細胞外,，減少細胞內(nèi)形成冰晶的機會，快融以保證細胞外結(jié)晶快速融化,，避免慢速融化水份滲入細胞內(nèi)，再次形成胞內(nèi)冰晶造成對細胞的損傷,。 上海快速細胞凍存液需要4度預(yù)冷細胞加凍存液沒有及時凍存會如何?

用以下方法凍存細胞:

4℃放置15-30分鐘

（一定不能省略該步驟,，否則凍存液無法完全滲透過細胞膜進入細胞起保護作用）

①     緩速降溫方法（以使用需異丙醇的Nalgene程序降溫盒為例,，冷凍細胞的過程中可以輔助實現(xiàn)緩慢降溫,，以達到近似于1℃/分鐘）：-80℃過夜→液氮長期保存。

（不推薦在-80℃長期保存,；異丙醇易揮發(fā)，并且容易吸收空氣中的水分,，建議使用5次后更換）

②     逐步降溫法：-20℃保存2小時,，然后-80℃中保存2小時，隨后可以在-196℃液氮中長期保存,。

3,、取待凍存的細胞用胰蛋白酶消化（方法見細胞的傳代部分）,。用含血清的培養(yǎng)基將細胞沖洗下來,，將細胞懸液吸到無菌離心管中，800r/min離心5min,，棄上清,，收集細胞沉淀。如果是懸浮生長的細胞,，則可直接離心收集細胞,。

4、在沉淀中加入適量凍存液制成細胞懸液,，細胞濃度宜大,，300萬/mL左右，一般一個中方瓶中的細胞濃縮至1mL,，凍存液中為宜,。

5、細胞懸液裝入凍存管中,。用封口膜封裹瓶口,，做好標記。

6,、凍存管在4℃下存放30min,，轉(zhuǎn)放-20℃中30min，再轉(zhuǎn)入-70℃過夜,，之后即可放入液氮中長久保存,，注意進行登記。 細胞凍存主要步驟有哪些.

細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融,，實驗證明這樣可以比較大限度的保存細胞活力,。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外,，減少細胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應(yīng)采用快速融化的方法,，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。

細胞凍存和復蘇的原則：

慢凍速融,，這樣更加有利于保持細胞的活力,。凍存細胞不加任何保護劑，會導致細胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生,，從而使細胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機械損傷,，引起細胞內(nèi)環(huán)境滲透壓，PH,，電解質(zhì)等的改變,，進而促使細胞死亡。 細胞凍存液品牌有哪些?重慶完全培養(yǎng)基和細胞凍存液配制步驟

BI細胞凍存液是什么成分?廣州凍細胞凍存液如何使用

細胞凍存常用凍存液的成分如下：

20％血清（FBS）,、10％DMSO,、70％1640培養(yǎng)液；或90％血清（FBS）,、10％DMSO，更可防止細胞內(nèi)冰晶形成,。將DMSO和FBS加入DMEM中,，各自含量占總體積的10%，然后濾膜過濾后分裝保存?zhèn)溆谩?

注意事項：

1.DMSO 不用高壓滅菌;DMEM不能高溫高壓滅菌,，可以過濾除菌,。

2.DMSO要用新的 ,而且要避光保存。

3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(體積比),。

DMSO在凍存液中的作用： DMSO在4℃時對細胞無明顯毒性,，分子量小、溶解度大,、易透過細胞膜,，降低細胞外未結(jié)冰溶液中溶質(zhì)濃度，使細胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細胞內(nèi)水分也不會過分外滲,，避免了細胞過分脫水皺縮,；DMSO與水分子結(jié)合，可使冰點下降,，減少細胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少冰晶損傷。 廣州凍細胞凍存液如何使用

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