摸條件包括1,、種板數(shù),；2,、種板后細(xì)胞的貼壁生長時(shí)間,；3、加藥后的孵育時(shí)間,；4,、cck8試劑加入量；5,、cck8試劑加入后細(xì)胞孵育時(shí)間,。看起來很多,，其實(shí)這就是一個(gè)實(shí)驗(yàn),。而且都是種的空白板，也就是不加藥物,，只加細(xì)胞和CCK8,。我沒有做過MTT實(shí)驗(yàn)，但其實(shí)原理及目的都是一樣的（反應(yīng)機(jī)理不一樣）,。都說CCK8簡(jiǎn)單點(diǎn)而且數(shù)據(jù)更穩(wěn)定,，所以就用了這個(gè)試劑盒。

當(dāng)然仁者見仁智者見智,，我寫的只是個(gè)人實(shí)驗(yàn)心得，但供參考,。歡迎大家拍磚共同進(jìn)步,。實(shí)驗(yàn)是簡(jiǎn)單的,，道路是曲折的，時(shí)間就是用來浪費(fèi)的,，科研就是自娛自樂使勁折騰,。

接種時(shí)注意細(xì)胞懸液一定要混勻，以避免細(xì)胞沉淀下來,，導(dǎo)致每孔中的細(xì)胞數(shù)量不一致,。湖北cck8避光

CCK-8盒子的選購還記得***次做CCK-8的實(shí)驗(yàn)時(shí)研究生二年級(jí)的時(shí)候，當(dāng)時(shí)用的***個(gè)盒子是Sigma的,，當(dāng)時(shí)的Sigma-Aldrich就是Sigma-Aldrich,，還不是現(xiàn)在的Millipore-Sigma。那個(gè)盒子給了我莫大的鼓勵(lì),，因?yàn)樵谀侵白龇肿涌寺∫恢倍疾皇呛茼樌?。這個(gè)盒子是我的碩士老板從美國帶回來的，品質(zhì)有保證,，***的結(jié)果也是很好的,。后面在做CCK-8的實(shí)驗(yàn)時(shí)，我們?cè)谟羞x擇的情況下都會(huì)買sigma,，下圖2是sigma官網(wǎng)的截圖,。其實(shí)也不貴，只是到貨時(shí)間太慢,。江蘇cck8怎么用微生物對(duì)細(xì)胞的毒性或增殖的實(shí)驗(yàn),。

制作標(biāo)準(zhǔn)曲線1.先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞,。2.按比例(例如：1/2比例)依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度,，一般要做3-5個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每組3-6個(gè)復(fù)孔,。3.接種后培養(yǎng)2-4小時(shí)使細(xì)胞貼壁,，然后加CCK-8試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定O.D值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)(X軸),，O.D值為縱坐標(biāo)(Y軸)的標(biāo)準(zhǔn)曲線,。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測(cè)定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量(使用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提條件是實(shí)驗(yàn)的條件要一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時(shí)間),。

酚紅和血清對(duì)CCK法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾,；◆細(xì)胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后,，可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到比較好測(cè)定時(shí)間,。實(shí)驗(yàn)二：細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)1、在96孔板中配置100μL的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)（37℃,，5%CO2）,。2、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測(cè)物質(zhì),。3,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6、12,、24或48小時(shí)）,。4、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡,，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）,。5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí),。6,、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度,。

CCK法的操作步驟（更多內(nèi)容請(qǐng)見說明書）：實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞活性檢測(cè)1,、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）,。2,、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）,。3,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。4,、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度,。5、若暫時(shí)不測(cè)定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定,，吸光度不會(huì)發(fā)生變化,。CCK8系列簡(jiǎn)稱終于來了.浙江cck8增殖數(shù)據(jù)結(jié)果

化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基).湖北cck8避光

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長的測(cè)定，常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測(cè),。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個(gè)***或者說是一個(gè)作用條件對(duì)細(xì)胞生長的影響,，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來證明作用效果,。所以,，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng)。MTT實(shí)驗(yàn)操作1,、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,，設(shè)置對(duì)照組（細(xì)胞+無血清培養(yǎng)基）,、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式：2、在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中,，湖北cck8避光

上海儒安生物科技有限公司一直專注于從事生物技術(shù),、物聯(lián)網(wǎng)技術(shù)、網(wǎng)絡(luò)技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā),、技術(shù)咨詢,、技術(shù)轉(zhuǎn)讓、技術(shù)服務(wù),，軟件開發(fā),，電子商務(wù)(不得從事增值電信、金融業(yè)務(wù)),，化工產(chǎn)品及原料(除危險(xiǎn)化學(xué)品,、監(jiān)控化學(xué)品、民用物品,、易制毒化學(xué)品),、實(shí)驗(yàn)窒設(shè)備的銷售。,，是一家醫(yī)藥健康的企業(yè),，擁有自己**的技術(shù)體系。一批專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì),，是實(shí)現(xiàn)企業(yè)戰(zhàn)略目標(biāo)的基礎(chǔ),，是企業(yè)持續(xù)發(fā)展的動(dòng)力。上海儒安生物科技有限公司主營業(yè)務(wù)涵蓋細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑,，ecl發(fā)光液,，cck8細(xì)胞增殖，內(nèi)參抗體,，堅(jiān)持“質(zhì)量保證,、良好服務(wù)、顧客滿意”的質(zhì)量方針,，贏得廣大客戶的支持和信賴,。一直以來公司堅(jiān)持以客戶為中心、細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑,，ecl發(fā)光液,，cck8細(xì)胞增殖，內(nèi)參抗體市場(chǎng)為導(dǎo)向，重信譽(yù),，保質(zhì)量,，想客戶之所想，急用戶之所急,，全力以赴滿足客戶的一切需要,。