細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定，常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測(cè),。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個(gè)***或者說是一個(gè)作用條件對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來證明作用效果,。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng),。

MTT實(shí)驗(yàn)操作

1,、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，設(shè)置對(duì)照組（細(xì)胞+無血清培養(yǎng)基）,、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式：

2、在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中,，每孔加入細(xì)胞懸液100ul,培養(yǎng)24小時(shí),； **藥敏試驗(yàn)：這個(gè)是用的比較廣的,，我見過做**的團(tuán)隊(duì)，買CCK-8都是一整箱,，一整箱的買,。北京cck8凋亡

讀數(shù)前可在搖床上溫柔混勻，酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的吸光度,。

***率（％）= [（對(duì)照孔吸光度-實(shí)驗(yàn)孔吸光度）/（對(duì)照孔吸光度-空白孔吸光度）]×100=IC50

注意事項(xiàng)

CCK8法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況基于的原理是脫氫酶催化的反應(yīng),，如果實(shí)驗(yàn)處理?xiàng)l件中存在還原劑的影響，應(yīng)事先去除,。如果實(shí)驗(yàn)條件中存在還原物質(zhì),，需單獨(dú)測(cè)定還原物質(zhì)的空白吸光度。如果還原物質(zhì)的吸光度很小,，可以忽略不計(jì),；但如果吸光度很大，則需要去除培養(yǎng)基,，再用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞3次,，然后再加入新的 100ul培養(yǎng)基和10ul CCK-8 溶液進(jìn)行檢測(cè)。 天津共培養(yǎng)細(xì)胞cck8細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)方法及經(jīng)驗(yàn)總結(jié)-CCK-8 法.

一直都像個(gè)新手,，從未老道過,。所有新手的迷茫與無奈我**能體會(huì)?？吹綀@子里有一些同學(xué)在問有關(guān)CCK8試驗(yàn)的事情,，當(dāng)初我也和他們一樣，像個(gè)被蜘蛛絲纏住頭的迷茫蒼蠅一頭扎進(jìn)園子里,，期待能找到些解決謎團(tuán)的只言片語,。希望我寫的這些非專業(yè)文字能夠幫助那些在實(shí)驗(yàn)室里沒有前行者指點(diǎn)迷津的筒子們。當(dāng)然仁者見仁智者見智,，我寫的只是個(gè)人實(shí)驗(yàn)心得,，就供參考。歡迎大家拍磚共同進(jìn)步,。實(shí)驗(yàn)是簡(jiǎn)單的,，道路是曲折的，時(shí)間就是用來浪費(fèi)的,，科研就是自?shī)首詷肥箘耪垓v,。

CKK-8原理

CellCountingKit，CCK-8試劑含有WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）,，是近年新開發(fā)的一種更新的水溶性四唑鹽檢測(cè),，原理與WST-1類似：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan）。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,，用酶聯(lián)免疫分析儀測(cè)定其光吸收值可間接反映活細(xì)胞數(shù)量,，在一定細(xì)胞數(shù)量范圍內(nèi)甲臜形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比,。

CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8，也就是進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)的一個(gè)盒子,。

特點(diǎn)不同1,、CellCountingKit-8：靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠,，重現(xiàn)性好,；操作簡(jiǎn)便，省時(shí)省力,；水溶性,，不需要換液，尤其適合于懸浮細(xì)胞,；無需放射性同位素和有機(jī)溶劑,，對(duì)細(xì)胞毒性低,；適合于高通量***篩選,。2、MTT法：特點(diǎn)是靈敏度高,、經(jīng)濟(jì),。三、應(yīng)用不同1,、CellCountingKit-8：主要用途為***篩選,、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定,、**藥敏試驗(yàn),。2、MTT法：***用于一些生物活性因子的活性檢測(cè),、大規(guī)模的抗*****篩選,、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及**放射敏感性測(cè)定等。CCK8原理,、優(yōu)勢(shì)和步驟.天津cck8每次數(shù)據(jù)都不一樣

微生物對(duì)細(xì)胞的毒性或增殖的實(shí)驗(yàn),。北京cck8凋亡

CCK8，即Cell Counting Kit-8,，與MTT法的主要區(qū)別如下：一,、原理不同1、Cell Counting Kit-8：CCK-8 試劑盒利用了日本同仁化學(xué)研究所（Dojindo）開發(fā)的四唑鹽WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽),。2,、MTT法：其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能,。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臜,，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在570nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值,，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比,。北京cck8凋亡

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