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北京cck8 數(shù)據(jù)要求

來源: 發(fā)布時間:2021-11-25

CCK8的優(yōu)點:方法方便,不用洗滌細胞,不需要放射性同位素和有機溶劑,;CCK-8快速檢測,;CCK-8檢測靈敏度高,細胞密度低也可以檢測;CCK-8的重復(fù)性優(yōu)于MTT法;CCK-8對細胞的毒性很小,;CCK-8細胞活性檢測試劑中是1瓶溶液,不需要現(xiàn)用現(xiàn)配,,即開即用,。CCK8的缺點:相比于與MTT法,CCK8的價格比較昂貴生成的甲瓚物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比,。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析,。用途:***篩選、細胞增殖測定,、細胞毒性測定,、**藥敏試驗。向每孔加入10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成氣泡,,它們會影響OD值的讀數(shù)),。北京cck8 數(shù)據(jù)要求

特點不同1、CellCountingKit-8:靈敏度高,,數(shù)據(jù)可靠,,重現(xiàn)性好;操作簡便,,省時省力,;水溶性,不需要換液,,尤其適合于懸浮細胞,;無需放射性同位素和有機溶劑,對細胞毒性低,;適合于高通量***篩選,。2、MTT法:特點是靈敏度高,、經(jīng)濟。三、應(yīng)用不同1,、CellCountingKit-8:主要用途為***篩選,、細胞增殖測定、細胞毒性測定,、**藥敏試驗,。2、MTT法:***用于一些生物活性因子的活性檢測,、大規(guī)模的抗*****篩選,、細胞毒性試驗以及**放射敏感性測定等。天津cck8保存CCK8雖好,這些情況下不建議用!

統(tǒng)一鋪好后,,待細胞完全沉淀下來后,,在顯微鏡下觀察各實驗組的細胞密度,如果密度不均勻,,則固定一組,,微調(diào)其他組細胞的量再次鋪板(如:發(fā)現(xiàn)NC組細胞較多,降低細胞量再次鋪板),,放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。4.從鋪板后第二天開始,每孔加入10-20μlCCK-8溶液,,如果每孔的培養(yǎng)基為100μl,,則加入10μlCCK-8溶液,如果每孔的培養(yǎng)基為200μl,,則加入20μlCCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,,它們會影響OD值的讀數(shù))。用加了相應(yīng)量細胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照,。

貼壁生長的時間我一般就直接讓它貼壁長24h了,,這個時間細胞已經(jīng)貼壁完全,而且這樣設(shè)置時間對自己安排實驗時間也方便,。沒人愿意大半夜爬起來做實驗吧,。3、加藥后的孵育時間,,我的實驗摸了3個時間,,24h,48h,,72h,。然后根據(jù)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性(RSD)、OD值的范圍(1.0左右)這些來選擇比較好的時間,。太長了就沒有必要了,,細胞呆在孔里幾天不換液結(jié)果可想而知了,。4、CCK8試劑加入量,,說明書中明確寫出建議加入量為培養(yǎng)基體積的10%,。這里有一個問題:假設(shè)我要孔內(nèi)是200微升的體系,即細胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢,,還是細胞懸液+藥液=200微升,,cck8不算在體系內(nèi)呢。關(guān)于這一點文獻報道不一致,。本人**終采用的是后者,。5、cck8試劑加入后孵育時間,,隨著時間的增加,,OD值就會增大??傊瓌t就是把OD值控制在1.0左右,。這里我考察了0.5h、1.0h,、2.0h,。加入CCK8那會空白對照組的細胞剛好長滿嗎?

五,、實驗注意事項:·若暫時不測定OD值,,可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時內(nèi)測定,,吸光度不會發(fā)生變化。·如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話,,可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基,,并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養(yǎng)基),,去掉***影響,。當然***影響比較小的情況下,可以不更換培養(yǎng)基,,直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可,。·當使用標準96孔板時,貼壁細胞的**小接種量至少為1,000個/孔(100μl培養(yǎng)基),。檢測白細胞時的靈敏度相對較低,,因此推薦接種量不低于2,500個/孔(100μl培養(yǎng)基)。靈敏度高,,數(shù)據(jù)可靠,,重現(xiàn)性好.湖北cck8成分

生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比.北京cck8 數(shù)據(jù)要求

細胞活性檢測1.在96孔板中接種細胞懸液(100ml/孔),。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)(在37℃,5%CO2的條件下),。2.向每孔加入10ml的CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,,它們會影響O.D值的讀數(shù))。3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時,。4.用酶標儀測定在450nm處的吸光度。5.如果暫時不測定O.D值,,打算以后測定的話,,可以向每孔中加入10ml0.1MHCl溶液或者1%w/vSDS溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化,。細胞增殖-毒性檢測1.在96孔板中配制100ml的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(在37℃,,5%CO2的條件下),。北京cck8 數(shù)據(jù)要求

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