培養(yǎng)基對CCK8測定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同,，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會與CCK8發(fā)生反應,，產(chǎn)生實驗誤差,，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基,。比如DMEM空白吸收為0.93,；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下,，會增加空白吸收,，但不影響測定，扣除空白吸收即可,，可見空白孔非常重要,，所以每次實驗均要設定空白對照。另外,，血清不影響測定,。有師妹在做一個HIF1a***劑實驗時，多加了這個***劑的濃度,，不同的種板數(shù)對檢測***的IC50影響大嗎,？浙江cck8 細胞活力
五、實驗注意事項：·若暫時不測定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定,，吸光度不會發(fā)生變化,。·如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基,，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉***影響。當然***影響比較小的情況下,，可以不更換培養(yǎng)基,，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可。·當使用標準96孔板時,，貼壁細胞的**小接種量至少為1,000個/孔(100μl培養(yǎng)基),。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500個/孔(100μl培養(yǎng)基),。湖北cck8細胞增殖數(shù)據(jù)分析細胞增殖與毒性檢測實驗方法及經(jīng)驗總結-CCK-8 .
制作標準曲線1.先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量,，然后接種細胞。2.按比例(例如：1/2比例)依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,，一般要做3-5個細胞濃度梯度,，每組3-6個復孔。3.接種后培養(yǎng)2-4小時使細胞貼壁,，然后加CCK-8試劑培養(yǎng)一定時間后測定O.D值,，制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標(X軸)，O.D值為縱坐標(Y軸)的標準曲線,。根據(jù)此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量(使用此標準曲線的前提條件是實驗的條件要一致,，便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時間)。
酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾,；◆細胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后,，可以在不同時間反復用酶標儀讀數(shù)從而找到比較好測定時間,。實驗二：細胞增殖-毒性檢測1、在96孔板中配置100μL的細胞懸液,。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)24小時（37℃,，5%CO2）。2,、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測物質(zhì),。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間（例如：6,、12,、24或48小時）。4,、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡,，它們會影響OD值的讀數(shù)）。5,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時,。6、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。**藥敏試驗：這個是用的比較廣的,，我見過做**的團隊,，買CCK-8都是一整箱，一整箱的買,。
實驗材料及試劑96孔板,、CO2培養(yǎng)箱、酒精燈,、移液***,、酶標儀等；細胞,、CCK8等,。實驗內(nèi)容取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期細胞，每孔按4×103個接種至96孔板中,，每組設置8個復孔,，置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細胞貼壁后轉(zhuǎn)染相應質(zhì)粒后,。繼續(xù)培養(yǎng)48h后,，棄含藥培養(yǎng)基，每孔加入新鮮配制的含10ｕL的毒性檢測液CCK8,，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h后,，用酶標儀測波長為450nm的OD值。實驗重復3次,，取實驗結果的平均值作為**終實驗結果,。按公式計算生長***率＝[(對照組OD－實驗組OD)/對照組OD]×**，以分組為橫坐標,，生長***率為縱坐標,，繪制細胞生長這個CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8.上海cck8 安全性
CCK8的實驗步驟、實驗分組及檢測方法.浙江cck8 細胞活力
二,、優(yōu)點：·使用方便,，省去了洗滌細胞，不需要放射性同位素和有機溶劑,；·CCK-8法能快速檢測,；·CCK-8法的檢測靈敏度很高，甚至可以測定較低細胞密度,；·CCK-8法的重復性優(yōu)于MTT法,，MTT實驗生成的formazan不是水溶性的，需要使用DMSO等有機溶劑溶解,；而本方法產(chǎn)生的formazan是水溶性的,，不但省去了溶解步驟,，更因此而減少了該操作步驟帶來的誤差；·CCK-8法對細胞毒性小,，可以多次測定選取比較好測定時間,，與MTT方法相比線性范圍更寬，靈敏度更高,；·CCK-8細胞活性檢測試劑中為1瓶溶液,，毋需預制，即開即用,。浙江cck8 細胞活力
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