培養(yǎng)板對CCK8測定的影響：不同公司的培養(yǎng)板,，以及培養(yǎng)板是否經(jīng)過處理對讀數(shù)都有一定的影響,。所以前后實(shí)驗(yàn)要一致,。另外在培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)板**外一圈的孔容易干燥揮發(fā),，從而能導(dǎo)致培養(yǎng)基的體積不一樣,，增加誤差。如果有可能,，**外一圈的孔只加高壓滅菌的PBS或ddH2O,。另外，注意CCK-8不要貼在板壁上,。一定要注意是否是***有問題,。解決的方案就是可以在測定CCK-8的讀數(shù)前，換個(gè)細(xì)胞液,，再測定。這樣會(huì)有一定的影響,，但是影響的是所有的,，所以均一性還算比較好。CCK8雖好,這些情況下不建議用!湖北細(xì)胞增殖cck8

CKK-8原理

CellCountingKit，CCK-8試劑含有WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）,，是近年新開發(fā)的一種更新的水溶性四唑鹽檢測,，原理與WST-1類似：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan）。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,，用酶聯(lián)免疫分析儀測定其光吸收值可間接反映活細(xì)胞數(shù)量,，在一定細(xì)胞數(shù)量范圍內(nèi)甲臜形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。

江蘇同仁cck8說明書**藥敏試驗(yàn)：這個(gè)是用的比較廣的,，我見過做**的團(tuán)隊(duì),，買CCK-8都是一整箱，一整箱的買,。

讀數(shù)前可在搖床上溫柔混勻,，酶標(biāo)儀在 450nm 波長處檢測每孔的吸光度。

***率（％）= [（對照孔吸光度-實(shí)驗(yàn)孔吸光度）/（對照孔吸光度-空白孔吸光度）]×100=IC50

注意事項(xiàng)

CCK8法檢測細(xì)胞生長情況基于的原理是脫氫酶催化的反應(yīng),，如果實(shí)驗(yàn)處理?xiàng)l件中存在還原劑的影響,，應(yīng)事先去除。如果實(shí)驗(yàn)條件中存在還原物質(zhì),，需單獨(dú)測定還原物質(zhì)的空白吸光度,。如果還原物質(zhì)的吸光度很小，可以忽略不計(jì),；但如果吸光度很大,，則需要去除培養(yǎng)基，再用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞3次,，然后再加入新的 100ul培養(yǎng)基和10ul CCK-8 溶液進(jìn)行檢測,。

實(shí)驗(yàn)材料及試劑

96 孔板、CO2培養(yǎng)箱,、酒精燈,、移液***、酶標(biāo)儀等,；細(xì)胞,、CCK8等。

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期細(xì)胞,，每孔按 4×103個(gè)接種至 96 孔板中,，每組設(shè)置8個(gè)復(fù)孔，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，待細(xì)胞貼壁后轉(zhuǎn)染相應(yīng)質(zhì)粒后,。繼續(xù)培養(yǎng) 48h 后，棄含藥培養(yǎng)基,，每孔加入新鮮配制的含 10ｕL的毒性檢測液CCK8,，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 4h 后,，用酶標(biāo)儀測波長為450 nm的OD值。實(shí)驗(yàn)重復(fù) 3 次,， 取實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值作為**終實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。按公式計(jì)算生長***率＝[(對照組 OD－實(shí)驗(yàn)組 OD)/對照組 OD]  ×**，以分組為橫坐標(biāo),，生長***率為縱坐標(biāo),，繪制細(xì)胞生長***率柱狀圖。 化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基).

實(shí)驗(yàn)材料及試劑96孔板,、CO2培養(yǎng)箱,、酒精燈、移液***,、酶標(biāo)儀等,；細(xì)胞、CCK8等,。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期細(xì)胞,，每孔按4×103個(gè)接種至96孔板中，每組設(shè)置8個(gè)復(fù)孔,，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，待細(xì)胞貼壁后轉(zhuǎn)染相應(yīng)質(zhì)粒后。繼續(xù)培養(yǎng)48h后,，棄含藥培養(yǎng)基,，每孔加入新鮮配制的含10ｕL的毒性檢測液CCK8，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h后,，用酶標(biāo)儀測波長為450nm的OD值,。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值作為**終實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。按公式計(jì)算生長***率＝[(對照組OD－實(shí)驗(yàn)組OD)/對照組OD]×**,，以分組為橫坐標(biāo)，生長***率為縱坐標(biāo),，繪制細(xì)胞生長細(xì)胞增殖測定：細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)在很多領(lǐng)域都會(huì)用到,，比如**相關(guān)、損傷后修復(fù)等,。江蘇cck8測od值數(shù)據(jù)結(jié)果

胞毒性非常低,，因此加入WST-8顯色后，可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到比較好測定時(shí)間,。湖北細(xì)胞增殖cck8

酚紅和血清對CCK法的檢測不會(huì)造成干擾,；◆細(xì)胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后,，可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到比較好測定時(shí)間,。實(shí)驗(yàn)二：細(xì)胞增殖-毒性檢測1,、在96孔板中配置100μL的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)（37℃,，5%CO2）。2,、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測物質(zhì),。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6,、12,、24或48小時(shí)）。4,、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡,，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。5,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí),。6、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度,。湖北細(xì)胞增殖cck8

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