7、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化,。注意：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉***影響,。當然***影響比較小的情況下,，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可?；盍τ嬎悖罕４鏃l件：4℃避光保存一年有效,，-20℃避光保存兩年有效。在電子耦合試劑（也就是細胞是活的,，有呼吸,，有能量代謝）.上海cck8法

CCK-8的原理

所以粗略的可以認為生成的甲瓚物的顏色的深淺與活細胞的數(shù)量成正比。為什么是粗略的呢,，因為這里沒有考慮到細胞代謝水平的高低,，有些細胞在***處理后，可能活細胞數(shù)不變,，但是代謝率低了以后,，細胞呼吸減弱，NAD+產(chǎn)生減少,，測出的Formazan也會減少,，所以此時怎么算呢（此時我就比較懷戀中性紅了）？當然也有解決的辦法,，下期給大家介紹,。因此可利用這個原理進行細胞增殖和毒性分析，在吸光度為450時檢測讀數(shù),。用途及常用的公 江蘇cck8 cc用酶標儀測定在450nm處的吸光度,。

在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育1-4小時，對于大多數(shù)情況孵育2小時左右就可以了,。6.用酶標儀測定在450nm處的吸光度（使用酶標儀之前要提前開啟10min預熱）測定完成后,，保存數(shù)據(jù)。7.連續(xù)五天檢測,，每天保持一樣的時間點加入CCK-8溶液,，在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育時間相同。注：若暫時不測定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定,，吸光度不會發(fā)生變化,。如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基,，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉***影響,。當然***影響比較小的情況下,，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可。

CCK-8的用途1.細胞增殖測定：細胞增殖實驗在很多領域都會用到,，比如**相關,、損傷后修復等。

2.***篩選：在測定一個***的毒性和安全有效濃度時,，經(jīng)常會用到CCK-8,。

3.細胞毒性測定：這個可以和各個處理因素對細胞活性和增殖的影響，比如在UV,、低氧或者什么化學物品對細胞的影響上,。

4.**藥敏試驗：這個是用的比較廣的，我見過做**的團隊,，買CCK-8都是一整箱,，一整箱的買，比如果子老師所在的團隊,，哈哈哈,。

5.微生物對細胞的毒性或增殖的實驗。 在CCK-8試劑盒中,，**主要的化學藥品是WST-8.

貼壁生長的時間我一般就直接讓它貼壁長24h了,，這個時間細胞已經(jīng)貼壁完全，而且這樣設置時間對自己安排實驗時間也方便,。沒人愿意大半夜爬起來做實驗吧,。3、加藥后的孵育時間,，我的實驗摸了3個時間,，24h，48h,，72h,。然后根據(jù)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性（RSD）、OD值的范圍（1.0左右）這些來選擇比較好的時間,。太長了就沒有必要了,，細胞呆在孔里幾天不換液結(jié)果可想而知了。4,、CCK8試劑加入量，說明書中明確寫出建議加入量為培養(yǎng)基體積的10%,。這里有一個問題：假設我要孔內(nèi)是200微升的體系,，即細胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢，還是細胞懸液+藥液=200微升,，cck8不算在體系內(nèi)呢,。關于這一點文獻報道不一致。本人**終采用的是后者。5,、cck8試劑加入后孵育時間,，隨著時間的增加，OD值就會增大,?？傊瓌t就是把OD值控制在1.0左右。這里我考察了0.5h,、1.0h,、2.0h。細胞毒性測定：這個可以和各個處理因素對細胞活性和增殖的影響,，比如低氧或者什么化學物品對細胞的影響上,。天津thp1細胞 cck8

這個CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8.上海cck8法

二、優(yōu)點：·使用方便,，省去了洗滌細胞,，不需要放射性同位素和有機溶劑；·CCK-8法能快速檢測,；·CCK-8法的檢測靈敏度很高,，甚至可以測定較低細胞密度；·CCK-8法的重復性優(yōu)于MTT法,，MTT實驗生成的formazan不是水溶性的,，需要使用DMSO等有機溶劑溶解；而本方法產(chǎn)生的formazan是水溶性的,，不但省去了溶解步驟,，更因此而減少了該操作步驟帶來的誤差；·CCK-8法對細胞毒性小,，可以多次測定選取比較好測定時間,，與MTT方法相比線性范圍更寬，靈敏度更高,；·CCK-8細胞活性檢測試劑中為1瓶溶液,，毋需預制，即開即用,。上海cck8法

上海儒安生物科技有限公司是一家生產(chǎn)型類企業(yè),，積極探索行業(yè)發(fā)展，努力實現(xiàn)產(chǎn)品創(chuàng)新,。上海儒安生物科技是一家有限責任公司企業(yè),，一直“以人為本，服務于社會”的經(jīng)營理念;“誠守信譽,，持續(xù)發(fā)展”的質(zhì)量方針,。公司擁有專業(yè)的技術團隊,，具有細胞轉(zhuǎn)染試劑，ecl發(fā)光液,，cck8細胞增殖,，內(nèi)參抗體等多項業(yè)務。上海儒安生物科技自成立以來,，一直堅持走正規(guī)化,、專業(yè)化路線，得到了廣大客戶及社會各界的普遍認可與大力支持,。