培養(yǎng)板對CCK8測定的影響：不同公司的培養(yǎng)板,，以及培養(yǎng)板是否經(jīng)過處理對讀數(shù)都有一定的影響,。所以前后實驗要一致。另外在培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)板**外一圈的孔容易干燥揮發(fā),，從而能導(dǎo)致培養(yǎng)基的體積不一樣，增加誤差,。如果有可能,，**外一圈的孔只加高壓滅菌的PBS或ddH2O。另外,，注意CCK-8不要貼在板壁上,。一定要注意是否是***有問題。解決的方案就是可以在測定CCK-8的讀數(shù)前,，換個細(xì)胞液,，再測定。這樣會有一定的影響,，但是影響的是所有的,，所以均一性還算比較好。酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾,；天津mts cck8

CCK-8的原理

所以粗略的可以認(rèn)為生成的甲瓚物的顏色的深淺與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,。為什么是粗略的呢，因為這里沒有考慮到細(xì)胞代謝水平的高低，有些細(xì)胞在***處理后,，可能活細(xì)胞數(shù)不變,，但是代謝率低了以后，細(xì)胞呼吸減弱,，NAD+產(chǎn)生減少,，測出的Formazan也會減少，所以此時怎么算呢（此時我就比較懷戀中性紅了）,？當(dāng)然也有解決的辦法,，下期給大家介紹。因此可利用這個原理進行細(xì)胞增殖和毒性分析,，在吸光度為450時檢測讀數(shù),。顏色也會越深 浙江cck8結(jié)果統(tǒng)計分析細(xì)胞毒性測定：這個可以和各個處理因素對細(xì)胞活性和增殖的影響，比如低氧或者什么化學(xué)物品對細(xì)胞的影響上,。

1,、種板數(shù)：這個要查文獻，看你所用細(xì)胞別人有無做過,，把范圍大致找出,。記住還要參考說明書，這個很重要,。然后稀釋一系列濃度種板,。首先你要觀察多長時間細(xì)胞可貼壁完全，一般貼壁生長24小時,。然后還有在你的實驗時間內(nèi),，不同細(xì)胞數(shù)下孔內(nèi)生長情況。比如我擬定考察4天的時間,，那么在4天內(nèi),，細(xì)胞是剛好鋪滿還是堆積生長？因為每塊板都會設(shè)置對照孔,，也就是含有細(xì)胞的培養(yǎng)基+CCK8,，這個數(shù)值是板上的比較大數(shù)值，CCK8試驗比較好OD值在1.0附近,，所以這個比較大數(shù)值比較好能控制在1.0左右,。我的實驗經(jīng)驗是不要讓細(xì)胞長滿，一旦長滿了很難去判斷是否堆積生長了,，對***能否順利進入細(xì)胞有影響此為其一,，其二生長不均勻易導(dǎo)致孔間OD值數(shù)據(jù)偏差大，而且OD值也很大,。

CCK-8的用途1.細(xì)胞增殖測定：細(xì)胞增殖實驗在很多領(lǐng)域都會用到,，比如**相關(guān),、損傷后修復(fù)等,。2.***篩選：在測定一個***的毒性和安全有效濃度時,，經(jīng)常會用到CCK-8。3.細(xì)胞毒性測定：這個可以和各個處理因素對細(xì)胞活性和增殖的影響,，比如在UV,、低氧或者什么化學(xué)物品對細(xì)胞的影響上。4.**藥敏試驗：這個是用的比較廣的,，我見過做**的團隊,，買CCK-8都是一整箱，一整箱的買,，比如果子老師所在的團隊,，哈哈哈。5.微生物對細(xì)胞的毒性或增殖的實驗用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度,。

CCK法的操作步驟（更多內(nèi)容請見說明書）：實驗一：細(xì)胞活性檢測1,、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）,。2,、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）,。3,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。4,、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度,。5、若暫時不測定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定,，吸光度不會發(fā)生變化,。將她培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。湖北cck8 空白組

使用方便,，省去了洗滌細(xì)胞,，不需要放射性同位素和有機溶劑.天津mts cck8

實驗材料及試劑

96 孔板、CO2培養(yǎng)箱,、酒精燈,、移液***、酶標(biāo)儀等,；細(xì)胞,、CCK8等。

實驗內(nèi)容取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期細(xì)胞，每孔按 4×103個接種至 96 孔板中,，每組設(shè)置8個復(fù)孔,，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁后轉(zhuǎn)染相應(yīng)質(zhì)粒后,。繼續(xù)培養(yǎng) 48h 后,，棄含藥培養(yǎng)基，每孔加入新鮮配制的含 10ｕL的毒性檢測液CCK8,，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 4h 后,，用酶標(biāo)儀測波長為450 nm的OD值。實驗重復(fù) 3 次,， 取實驗結(jié)果的平均值作為**終實驗結(jié)果,。按公式計算生長***率＝[(對照組 OD－實驗組 OD)/對照組 OD]  ×**，以分組為橫坐標(biāo),，生長***率為縱坐標(biāo),，繪制細(xì)胞生長***率柱狀圖。 天津mts cck8

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