細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定，常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測(cè),。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),，如果想證明一個(gè)***或者說(shuō)是一個(gè)作用條件對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來(lái)證明作用效果,。所以,，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng)。

MTT實(shí)驗(yàn)操作

1,、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,，設(shè)置對(duì)照組（細(xì)胞+無(wú)血清培養(yǎng)基）、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無(wú)血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式：

2,、在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中，每孔加入細(xì)胞懸液100ul,培養(yǎng)24小時(shí),； **藥敏試驗(yàn)：這個(gè)是用的比較廣的,，我見(jiàn)過(guò)做**的團(tuán)隊(duì)，買(mǎi)CCK-8都是一整箱,，一整箱的買(mǎi),。浙江cck8實(shí)驗(yàn)

注意事項(xiàng)1、細(xì)胞密度：MTT要檢測(cè)的只是細(xì)胞的增殖能力,，所以不用保證孔內(nèi)細(xì)胞鋪板一定要均勻,，只要保證孔與孔之間的細(xì)胞數(shù)量大致相同就可,，也因此細(xì)胞重懸很重要。每孔加入之前,，都需要吹打混勻細(xì)胞,，但即便如此也很難保證每個(gè)孔的細(xì)胞數(shù)量大致一致。所以我們?cè)O(shè)置了6組實(shí)驗(yàn)組,，以便計(jì)算結(jié)果時(shí)可以有所取舍。2,、對(duì)于MTT而言,，預(yù)實(shí)驗(yàn)很重要。預(yù)實(shí)驗(yàn)要摸清楚兩點(diǎn)：a)細(xì)胞該如何稀釋?zhuān)籦)***濃度,。網(wǎng)上很多人建議將細(xì)胞數(shù)稀釋到某個(gè)數(shù)值才是**合適的,，但我認(rèn)為只要保證每個(gè)孔內(nèi)的細(xì)胞數(shù)在70%左右，且各個(gè)孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量大致相同就可,，不需要強(qiáng)求一定要達(dá)到某個(gè)數(shù)值,，現(xiàn)實(shí)中，這一步需要多次摸索,。湖北cck8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)原理在電子耦合試劑（也就是細(xì)胞是活的,，有呼吸，有能量代謝）.

CellCountingKit-8（簡(jiǎn)稱(chēng)CCK-8）試劑可用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析,。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】,。它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析,。

。一般情況下,，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基,，不作為測(cè)定孔用。在培養(yǎng)基中加入CCK8,，培養(yǎng)一定的時(shí)間,，測(cè)定450 nm的吸光度即為空白對(duì)照。在做加藥實(shí)驗(yàn)時(shí),，還應(yīng)考慮***的吸收,，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間,，測(cè)定450 nm的吸光度作為空白對(duì)照,。金屬對(duì)CCK-8顯色有影響：當(dāng)終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵,、硫酸銅會(huì)***5%,、15%,、90%的顯色反應(yīng)，使靈敏度降級(jí),。如果終濃度是10 mM的話(huà),，將會(huì)*****。懸浮細(xì)胞由于染色比較困難,，一般需要增加細(xì)胞數(shù)量和延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間,。酚紅和血清對(duì)CCK法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾；

一直都像個(gè)新手,，從未老道過(guò),。所有新手的迷茫與無(wú)奈我**能體會(huì)?？吹綀@子里有一些同學(xué)在問(wèn)有關(guān)CCK8試驗(yàn)的事情,，當(dāng)初我也和他們一樣，像個(gè)被蜘蛛絲纏住頭的迷茫蒼蠅一頭扎進(jìn)園子里,，期待能找到些解決謎團(tuán)的只言片語(yǔ),。希望我寫(xiě)的這些非專(zhuān)業(yè)文字能夠幫助那些在實(shí)驗(yàn)室里沒(méi)有前行者指點(diǎn)迷津的筒子們。當(dāng)然仁者見(jiàn)仁智者見(jiàn)智,，我寫(xiě)的只是個(gè)人實(shí)驗(yàn)心得,，就供參考。歡迎大家拍磚共同進(jìn)步,。實(shí)驗(yàn)是簡(jiǎn)單的,，道路是曲折的，時(shí)間就是用來(lái)浪費(fèi)的,，科研就是自?shī)首詷?lè)使勁折騰,。CCK8原理、優(yōu)勢(shì)和步驟.天津cck8

靈敏度高,，數(shù)據(jù)可靠,，重現(xiàn)性好.浙江cck8實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定，常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測(cè),。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個(gè)***或者說(shuō)是一個(gè)作用條件對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來(lái)證明作用效果,。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng),。MTT實(shí)驗(yàn)操作1,、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，設(shè)置對(duì)照組（細(xì)胞+無(wú)血清培養(yǎng)基）,、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無(wú)血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式：2,、在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中，每孔加入細(xì)胞懸液100ul浙江cck8實(shí)驗(yàn)