CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖和毒性實(shí)驗(yàn)佰歐晶生物專注于生命科學(xué),、醫(yī)學(xué)及藥學(xué)科研咨詢和技術(shù)服務(wù),，致力于疾病關(guān)鍵基因功能研究,，中藥功能及機(jī)理研究，納米靶向***研究,，**研究整體方案服務(wù),。CellCountingKit-8（簡(jiǎn)稱CCK-8）試劑用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析,。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）,。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8,，也就是進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)的一個(gè)盒子,。上海dojindo cck8 說明書

CCK-8的原理

所以粗略的可以認(rèn)為生成的甲瓚物的顏色的深淺與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。為什么是粗略的呢,，因?yàn)檫@里沒有考慮到細(xì)胞代謝水平的高低,，有些細(xì)胞在***處理后，可能活細(xì)胞數(shù)不變,，但是代謝率低了以后,，細(xì)胞呼吸減弱，NAD+產(chǎn)生減少,，測(cè)出的Formazan也會(huì)減少,，所以此時(shí)怎么算呢（此時(shí)我就比較懷戀中性紅了）？當(dāng)然也有解決的辦法,，下期給大家介紹,。因此可利用這個(gè)原理進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析，在吸光度為450時(shí)檢測(cè)讀數(shù),。顏色也會(huì)越深 天津cck8結(jié)果怎么算CCK-8用途：***篩選,、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定,、**藥敏試驗(yàn).

培養(yǎng)基對(duì)CCK8測(cè)定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同,，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會(huì)與CCK8發(fā)生反應(yīng),，產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)誤差,，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基,。比如DMEM空白吸收為0.93,；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下,，會(huì)增加空白吸收,，但不影響測(cè)定，扣除空白吸收即可,，可見空白孔非常重要，所以每次實(shí)驗(yàn)均要設(shè)定空白對(duì)照,。另外,，血清不影響測(cè)定，所以我用CCK-8來測(cè)定病毒對(duì)細(xì)胞活性的影響或者某個(gè)***對(duì)病毒復(fù)制的影響時(shí)，我都小心翼翼的測(cè)很多個(gè)時(shí)間點(diǎn),，說實(shí)話,，效果不是很好。所以我比較喜歡中性紅,。

CellCountingKit-8（簡(jiǎn)稱CCK-8）試劑可用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析,。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】。它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）,。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。換液的意思是將cck8加在培養(yǎng)基中以換液的形式加在孔板中避免氣泡產(chǎn)生,。

CCK8的優(yōu)點(diǎn)：方法方便,，不用洗滌細(xì)胞，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑,；CCK-8快速檢測(cè),；CCK-8檢測(cè)靈敏度高，細(xì)胞密度低也可以檢測(cè),；CCK-8的重復(fù)性優(yōu)于MTT法,；CCK-8對(duì)細(xì)胞的毒性很小,；CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)試劑中是1瓶溶液,，不需要現(xiàn)用現(xiàn)配，即開即用,。CCK8的缺點(diǎn)：相比于與MTT法,，CCK8的價(jià)格比較昂貴生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析,。用途：***篩選,、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定,、**藥敏試驗(yàn),。化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基).浙江cck8軟件

用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值,，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量,。上海dojindo cck8 說明書

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定，常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測(cè),。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個(gè)***或者說是一個(gè)作用條件對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來證明作用效果,。所以,，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng)。MTT實(shí)驗(yàn)操作1,、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,，設(shè)置對(duì)照組（細(xì)胞+無血清培養(yǎng)基）、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式：2,、在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中，每孔加入細(xì)胞懸液100ul上海dojindo cck8 說明書