CCK8的優(yōu)點(diǎn)：方法方便,，不用洗滌細(xì)胞,，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑,；CCK-8快速檢測(cè),；CCK-8檢測(cè)靈敏度高，細(xì)胞密度低也可以檢測(cè),；CCK-8的重復(fù)性優(yōu)于MTT法,；CCK-8對(duì)細(xì)胞的毒性很小,；CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)試劑中是1瓶溶液,，不需要現(xiàn)用現(xiàn)配，即開(kāi)即用,。CCK8的缺點(diǎn)：相比于與MTT法,，CCK8的價(jià)格比較昂貴生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析,。用途：***篩選,、細(xì)胞增殖測(cè)定,、細(xì)胞毒性測(cè)定,、**藥敏試驗(yàn)。細(xì)胞增殖測(cè)定：細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)在很多領(lǐng)域都會(huì)用到,，比如**相關(guān),、損傷后修復(fù)等。上海cck8實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

經(jīng)驗(yàn)總結(jié)及分享： 

CCK8的說(shuō)明書(shū)大家一定要認(rèn)真閱讀,，里面很多細(xì)節(jié)的問(wèn)題都有提到,。而且說(shuō)明書(shū)里提供的一些關(guān)于各種細(xì)胞的種板數(shù)都很有參考價(jià)值，因?yàn)槟鞘欠磸?fù)驗(yàn)證過(guò)的比較好數(shù)值,。但無(wú)論如何,，做這個(gè)試驗(yàn)一定要摸條件。你就算再懶,，這個(gè)懶不得,，否則你都只是在做無(wú)用功,。以下言論全部以細(xì)胞毒性試驗(yàn)為前提， 如果你做的是促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的***的藥效實(shí)驗(yàn)?zāi)蔷土懋?dāng)別論了,。

摸條件包括1,、種板數(shù)；2,、種板后細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)時(shí)間,；3、加藥后的孵育時(shí)間,；4,、cck8試劑加入量；5,、cck8試劑加入后細(xì)胞孵育時(shí)間,。看起來(lái)很多,，其實(shí)這就是一個(gè)實(shí)驗(yàn),。而且都是種的空白板，也就是不加***,，只加細(xì)胞和CCK8,。 天津cck8步驟用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。

在做每個(gè)東西之前,，都要搞清楚這個(gè)東西是什么,。CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8，也就是進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)的一個(gè)盒子,。那它的用途也就大致可以猜到,，和細(xì)胞增殖相關(guān)的實(shí)驗(yàn)都可以。CCK-8的原理在CCK-8試劑盒中,，**主要的化學(xué)藥品是WST-8,，化學(xué)名為2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽。它的**基團(tuán)和MTT是一樣的,，是MTT的升級(jí)版本,。在電子耦合試劑（也就是細(xì)胞是活的，有呼吸,，有能量代謝）存在的情況下,，可被NAD+氧化還原成為水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物(Formazan)?；罴?xì)胞越多,，產(chǎn)生的Formazan就越多，顏色也會(huì)越深（如圖1,，來(lái)自于Sigma）,。

氧化還原試劑對(duì)CCK8測(cè)定的影響：CCK8是一個(gè)氧化還原反應(yīng)實(shí)驗(yàn),，在整個(gè)操作當(dāng)中，如果有氧化還原試劑都會(huì)影響**終的結(jié)果,。當(dāng)有還原性物質(zhì)存在時(shí)會(huì)影響CCK8的測(cè)定,，增加OD值。在有氧化性物質(zhì)存在時(shí)會(huì)***測(cè)定反應(yīng)的發(fā)生,，減少OD值,。在高中化學(xué)我們就知道金屬是氧化還原反應(yīng)中的重要參與者。各個(gè)公司都會(huì)告訴你：“終濃度為1mM的氯化亞鉛,、氯化鐵,、硫酸銅會(huì)***5%、15%,、90%的顯色反應(yīng),，使靈敏度降低。如果終濃度是10mM的話,，將會(huì)*****,。”我**開(kāi)始看到這句話時(shí)很懵,，因?yàn)椴恢涝诓僮髦性鯓訒?huì)遇到這種情況,。下面就分享我能想到或者在操作中真實(shí)遇到的。cck8試劑盒原理是什么a?

培養(yǎng)基對(duì)CCK8測(cè)定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同,，（主要是氨基酸的成分及糖含量）,，會(huì)與CCK8發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)誤差,，因此所用培養(yǎng)基要一致,，不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93,；1640培養(yǎng)基在0.5左右,。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會(huì)增加空白吸收,，但不影響測(cè)定,，扣除空白吸收即可,，可見(jiàn)空白孔非常重要,，所以每次實(shí)驗(yàn)均要設(shè)定空白對(duì)照。另外,，血清不影響測(cè)定,，所以我用CCK-8來(lái)測(cè)定病毒對(duì)細(xì)胞活性的影響或者某個(gè)***對(duì)病毒復(fù)制的影響時(shí)，我都小心翼翼的測(cè)很多個(gè)時(shí)間點(diǎn),，說(shuō)實(shí)話,，效果不是很好,。所以我比較喜歡中性紅。各有千秋!CCK8之外的選擇除了MTT,還可以是LDH.湖北cck8統(tǒng)計(jì)方法小木蟲(chóng)

***篩選：在測(cè)定一個(gè)***的毒性和安全有效濃度時(shí),，經(jīng)常會(huì)用到CCK-8,。上海cck8實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定，常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測(cè),。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個(gè)***或者說(shuō)是一個(gè)作用條件對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來(lái)證明作用效果,。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng),。

MTT實(shí)驗(yàn)操作

1,、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，設(shè)置對(duì)照組（細(xì)胞+無(wú)血清培養(yǎng)基）,、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無(wú)血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式：

2、在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中,，每孔加入細(xì)胞懸液100ul,培養(yǎng)24小時(shí),； 上海cck8實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)