CCK法的操作步驟（更多內(nèi)容請(qǐng)見(jiàn)說(shuō)明書(shū)）：實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞活性檢測(cè)1,、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2,、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）,。3,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。4,、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度,。5、若暫時(shí)不測(cè)定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定,，吸光度不會(huì)發(fā)生變化,。主要是重復(fù)性優(yōu)于MTT；江蘇cck8吸光度小于0.1但有趨勢(shì)

細(xì)胞活性檢測(cè)1.在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100ml/孔),。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)(在37℃,，5%CO2的條件下)。2.向每孔加入10ml的CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,，它們會(huì)影響O.D值的讀數(shù)),。3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí),。4.用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。5.如果暫時(shí)不測(cè)定O.D值,，打算以后測(cè)定的話,，可以向每孔中加入10ml0.1MHCl溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化,。細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)1.在96孔板中配制100ml的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)(在37℃,，5%CO2的條件下),。北京cck8 od值統(tǒng)計(jì)方法細(xì)胞增殖測(cè)定：細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)在很多領(lǐng)域都會(huì)用到，比如**相關(guān),、損傷后修復(fù)等。

切記一定要使用無(wú)血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基,，一是可以排除血清對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,；二是血清的存在會(huì)對(duì)吸光度的測(cè)量產(chǎn)生影響。以上是MTT比色法的介紹,，MTT比色法因?yàn)樯婕暗轿雠囵B(yǎng)基溶解沉淀的操作,，所以更適用于貼壁細(xì)胞，懸浮細(xì)胞比較好選用CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖,，下面給大家介紹一下CCK8操作的注意事項(xiàng),。CCK8實(shí)驗(yàn)操作CCK8的優(yōu)勢(shì)在于對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒性，可以直接加入細(xì)胞中長(zhǎng)時(shí)間孵育,，而不用考慮試劑本身對(duì)細(xì)胞帶來(lái)的影響,。向各孔中加入10ul的CCK-8檢測(cè)溶液。如若檢測(cè)的細(xì)胞增殖或毒性試驗(yàn),，需在此之前加入作用***培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間,，例如6h/12h/24h等，然后再加入CCK8檢測(cè)液,。

CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖/毒性的方法：

1.將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞胰酶消化后,，完全培養(yǎng)基重懸成細(xì)胞懸液，并計(jì)數(shù),。

2.根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)快慢決定鋪板細(xì)胞密度（多數(shù)為1000-2000 cell/well）,，每組3-5重復(fù)，每孔100-200μl培養(yǎng)基,。根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)決定鋪板數(shù)量（如需要檢測(cè)5天,，則鋪5張96孔板），我們以1000 cell/well,，5復(fù)孔,，200μl培養(yǎng)基,，檢測(cè)5天為例，各實(shí)驗(yàn)組需要細(xì)胞數(shù)量為1000×5×5個(gè)細(xì)胞,，從計(jì)數(shù)好的細(xì)胞懸液中取出所需的細(xì)胞量和完全培養(yǎng)基混勻,，**終體積為200×5×5μl。 細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)方法及經(jīng)驗(yàn)總結(jié)-CCK-8 .

統(tǒng)一鋪好后,，待細(xì)胞完全沉淀下來(lái)后,，在顯微鏡下觀察各實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞密度，如果密度不均勻,，則固定一組,，微調(diào)其他組細(xì)胞的量再次鋪板（如：發(fā)現(xiàn)NC組細(xì)胞較多，降低細(xì)胞量再次鋪板）,，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。4.從鋪板后第二天開(kāi)始，每孔加入10-20μlCCK-8溶液,，如果每孔的培養(yǎng)基為100μl,，則加入10μlCCK-8溶液，如果每孔的培養(yǎng)基為200μl,，則加入20μlCCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。用加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但沒(méi)有加入細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照,。不同的種板數(shù)對(duì)檢測(cè)***的IC50影響大嗎,？浙江cck8 換液后繼續(xù)培養(yǎng)

使用方便，省去了洗滌細(xì)胞,，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑.江蘇cck8吸光度小于0.1但有趨勢(shì)

CKK-8原理

CellCountingKit,，CCK-8試劑含有WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽），是近年新開(kāi)發(fā)的一種更新的水溶性四唑鹽檢測(cè),，原理與WST-1類(lèi)似：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan）,。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比，用酶聯(lián)免疫分析儀測(cè)定其光吸收值可間接反映活細(xì)胞數(shù)量,，在一定細(xì)胞數(shù)量范圍內(nèi)甲臜形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比,。

江蘇cck8吸光度小于0.1但有趨勢(shì)