CCK8檢測原理圖2操作步驟1,、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2,、細(xì)胞處理（不同實驗處理方式不同）,。3、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會影響OD值的讀數(shù)）,。4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時,。5,、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。6,、若暫時不測定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時內(nèi)測定,，吸光度不會發(fā)生變化。水溶性,，不需要換液,，尤其適合于懸浮細(xì)胞.浙江cck8細(xì)胞增殖實驗原理

CCK法的操作步驟（更多內(nèi)容請見說明書）：實驗一：細(xì)胞活性檢測1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）,。2、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會影響OD值的讀數(shù)）,。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時,。4,、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。5,、若暫時不測定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時內(nèi)測定,，吸光度不會發(fā)生變化。上海cck8計算該方法已被***用于一些生物活性因子的活性檢測,、大規(guī)模的抗*****篩選以及藥敏試驗等,。

在做每個東西之前,，都要搞清楚這個東西是什么。CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8,，也就是進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)的一個盒子,。那它的用途也就大致可以猜到，和細(xì)胞增殖相關(guān)的實驗都可以,。CCK-8的原理在CCK-8試劑盒中,，**主要的化學(xué)藥品是WST-8，化學(xué)名為2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽,。它的**基團(tuán)和MTT是一樣的,，是MTT的升級版本。在電子耦合試劑（也就是細(xì)胞是活的,，有呼吸,，有能量代謝）存在的情況下，可被NAD+氧化還原成為水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物(Formazan),?；罴?xì)胞越多，產(chǎn)生的Formazan就越多,，顏色也會越深（如圖1,，來自于Sigma）。

實驗材料及試劑

96 孔板,、CO2培養(yǎng)箱,、酒精燈、移液***,、酶標(biāo)儀等,；細(xì)胞,、CCK8等,。

實驗內(nèi)容取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期細(xì)胞，每孔按 4×103個接種至 96 孔板中,，每組設(shè)置8個復(fù)孔,，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁后轉(zhuǎn)染相應(yīng)質(zhì)粒后,。繼續(xù)培養(yǎng) 48h 后,，棄含藥培養(yǎng)基，每孔加入新鮮配制的含 10ｕL的毒性檢測液CCK8,，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 4h 后,，用酶標(biāo)儀測波長為450 nm的OD值。實驗重復(fù) 3 次,， 取實驗結(jié)果的平均值作為**終實驗結(jié)果,。按公式計算生長***率＝[(對照組 OD－實驗組 OD)/對照組 OD]  ×**,，以分組為橫坐標(biāo)，生長***率為縱坐標(biāo),，繪制細(xì)胞生長***率柱狀圖,。 那它的用途也就大致可以猜到，和細(xì)胞增殖,、細(xì)胞毒性相關(guān)的實驗都可以,。

CKK-8原理

CellCountingKit，CCK-8試劑含有WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）,，是近年新開發(fā)的一種更新的水溶性四唑鹽檢測,，原理與WST-1類似：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan）。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,，用酶聯(lián)免疫分析儀測定其光吸收值可間接反映活細(xì)胞數(shù)量,，在一定細(xì)胞數(shù)量范圍內(nèi)甲臜形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。

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酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾,；浙江cck8細(xì)胞增殖實驗原理

,。一般情況下，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基,，不作為測定孔用,。在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間,，測定450 nm的吸光度即為空白對照,。在做加藥實驗時，還應(yīng)考慮***的吸收,，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8,，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度作為空白對照,。金屬對CCK-8顯色有影響：當(dāng)終濃度為1mM的氯化亞鉛,、氯化鐵、硫酸銅會***5%,、15%,、90%的顯色反應(yīng)，使靈敏度降級,。如果終濃度是10 mM的話,，將會*****。懸浮細(xì)胞由于染色比較困難,，一般需要增加細(xì)胞數(shù)量和延長培養(yǎng)時間,。浙江cck8細(xì)胞增殖實驗原理