CCK8檢測細(xì)胞增殖和毒性實驗佰歐晶生物專注于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)及藥學(xué)科研咨詢和技術(shù)服務(wù),，致力于疾病關(guān)鍵基因功能研究,，中藥功能及機(jī)理研究,，納米靶向***研究,，**研究整體方案服務(wù)。CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑用于簡便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析,。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】,，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析,。該方法已被***用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗*****篩選以及藥敏試驗等,。天津cck8孵育時間

培養(yǎng)基對CCK8測定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同,，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會與CCK8發(fā)生反應(yīng),，產(chǎn)生實驗誤差,，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基,。比如DMEM空白吸收為0.93,；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下,，會增加空白吸收,，但不影響測定，扣除空白吸收即可,，可見空白孔非常重要,，所以每次實驗均要設(shè)定空白對照。另外,，血清不影響測定,，所以我用CCK-8來測定病毒對細(xì)胞活性的影響或者某個***對病毒復(fù)制的影響時，我都小心翼翼的測很多個時間點,，說實話,，效果不是很好。所以我比較喜歡中性紅,。湖北dojindo cck8說明書在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5% CO2）.

。一般情況下,，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基,，不作為測定孔用。在培養(yǎng)基中加入CCK8,，培養(yǎng)一定的時間,，測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗時，還應(yīng)考慮***的吸收,，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8,，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度作為空白對照,。金屬對CCK-8顯色有影響：當(dāng)終濃度為1mM的氯化亞鉛,、氯化鐵、硫酸銅會***5%,、15%,、90%的顯色反應(yīng)，使靈敏度降級,。如果終濃度是10 mM的話,，將會*****。懸浮細(xì)胞由于染色比較困難,，一般需要增加細(xì)胞數(shù)量和延長培養(yǎng)時間,。

7、若暫時不測定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定,，吸光度不會發(fā)生變化,。注意：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基,，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉***影響,。當(dāng)然***影響比較小的情況下,，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可,?；盍τ嬎悖罕４鏃l件：4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存兩年有效,。cck8試劑盒原理是什么a?

實驗材料及試劑96孔板,、CO2培養(yǎng)箱、酒精燈,、移液***,、酶標(biāo)儀等；細(xì)胞,、CCK8等。實驗內(nèi)容取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期細(xì)胞,，每孔按4×103個接種至96孔板中,，每組設(shè)置8個復(fù)孔,，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁后轉(zhuǎn)染相應(yīng)質(zhì)粒后,。繼續(xù)培養(yǎng)48h后,，棄含藥培養(yǎng)基，每孔加入新鮮配制的含10ｕL的毒性檢測液CCK8,，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h后,，用酶標(biāo)儀測波長為450nm的OD值。實驗重復(fù)3次,，取實驗結(jié)果的平均值作為**終實驗結(jié)果,。按公式計算生長***率＝[(對照組OD－實驗組OD)/對照組OD]×**，以分組為橫坐標(biāo),，生長***率為縱坐標(biāo),，繪制細(xì)胞生長科研狗**值錢的就是時間,不能再被CCK8“拖累”了.江蘇cck8換液

水溶性，不需要換液,，尤其適合于懸浮細(xì)胞.天津cck8孵育時間

酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾,，可以通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去。

· CCK8可以檢測大腸桿菌,，但不能檢測酵母細(xì)胞,。在細(xì)胞增殖實驗每次測定的過程中需要避免細(xì)菌污染，以免影響結(jié)果,。

· CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個月,，在-20℃下避光可以保存1年。

· 當(dāng)在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時,，培養(yǎng)板**外一圈的孔**容易干燥揮發(fā),，由于體積不準(zhǔn)確而增加誤差。一般情況下,，**外一圈的孔加培養(yǎng)基或者PBS,，不作為測定孔用。

· 在培養(yǎng)基中加入CCK8,，培養(yǎng)一定的時間,，測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗時,，還應(yīng)考慮***的吸收,，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間,，測定450 nm的吸光度作為空白對照,。 天津cck8孵育時間