CKK-8原理

CellCountingKit，CCK-8試劑含有WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽），是近年新開發(fā)的一種更新的水溶性四唑鹽檢測,，原理與WST-1類似：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan）。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,，用酶聯(lián)免疫分析儀測定其光吸收值可間接反映活細(xì)胞數(shù)量，在一定細(xì)胞數(shù)量范圍內(nèi)甲臜形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比,。

細(xì)胞增殖與毒性檢測實驗方法及經(jīng)驗總結(jié)-CCK-8 .浙江cck8 mtt

酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾；◆細(xì)胞毒性非常低,，因此加入WST-8顯色后,，可以在不同時間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到比較好測定時間。實驗二：細(xì)胞增殖-毒性檢測1,、在96孔板中配置100μL的細(xì)胞懸液,。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時（37℃，5%CO2）,。2,、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測物質(zhì)。3,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間（例如：6,、12、24或48小時）,。4,、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）,。5,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。6,、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度,。湖北cck8結(jié)果圖怎么做生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比.

細(xì)胞增殖實驗就是對細(xì)胞生長的測定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測,。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),，如果想證明一個***或者說是一個作用條件對細(xì)胞生長的影響，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來證明作用效果,。所以,，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實驗操作和注意事項。

MTT實驗操作

1,、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,，設(shè)置對照組（細(xì)胞+無血清培養(yǎng)基）、實驗組和空白組（無血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式：

2,、在對照組和實驗組中，每孔加入細(xì)胞懸液100ul,培養(yǎng)24小時,；

統(tǒng)一鋪好后,，待細(xì)胞完全沉淀下來后，在顯微鏡下觀察各實驗組的細(xì)胞密度,，如果密度不均勻,，則固定一組，微調(diào)其他組細(xì)胞的量再次鋪板（如：發(fā)現(xiàn)NC組細(xì)胞較多,，降低細(xì)胞量再次鋪板）,，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。4.從鋪板后第二天開始,，每孔加入10-20μlCCK-8溶液,，如果每孔的培養(yǎng)基為100μl，則加入10μlCCK-8溶液,，如果每孔的培養(yǎng)基為200μl,，則加入20μlCCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）,。用加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對照,。CCK8系列簡稱終于來了.

細(xì)胞增殖實驗就是對細(xì)胞生長的測定，常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測,。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個***或者說是一個作用條件對細(xì)胞生長的影響,，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來證明作用效果,。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實驗操作和注意事項,。MTT實驗操作1,、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,，設(shè)置對照組（細(xì)胞+無血清培養(yǎng)基）、實驗組和空白組（無血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式：2,、在對照組和實驗組中，每孔加入細(xì)胞懸液100ul,培養(yǎng)24小時代謝率低了以后,，細(xì)胞呼吸減弱,，NAD+產(chǎn)生減少，測出的Formazan也會減少,。上海cck8數(shù)據(jù)作圖

那它的用途也就大致可以猜到,，和細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性相關(guān)的實驗都可以,。浙江cck8 mtt

CCK法與其他細(xì)胞增殖/毒性檢測方法的優(yōu)勢比較檢測方法MTT法XTT法WST-1法CCK法甲臜產(chǎn)物的水溶性差（需加有機溶劑溶解再檢測）好好好產(chǎn)品性狀粉末2瓶溶液溶液1瓶溶液使用方法配成溶液后使用現(xiàn)配現(xiàn)用即開即用即開即用檢測靈敏度高很高很高高檢測時間較長較短較短**短檢測波長560-600nm420-480nm420-480nm430-490nm細(xì)胞毒性高,，細(xì)胞形態(tài)完全消失很低，細(xì)胞形態(tài)不變很低,，細(xì)胞形態(tài)不變很低,，細(xì)胞形態(tài)不變試劑穩(wěn)定性一般較差一般很好批量樣品檢測可以非常適合非常適合非常適合便捷程度一般便捷便捷非常便捷浙江cck8 mtt