由于CRISPR/Cas的發(fā)現(xiàn)，基因組編輯領(lǐng)域經(jīng)歷了一場**,。細菌免疫系統(tǒng)的CRIPSR/Cas成分導(dǎo)致全基因組雙鏈DNA斷裂,，并通過內(nèi)部DNA修復(fù)過程促進基因編輯,。有研究指出，陽離子聚合物聚乙二胺-環(huán)糊精(PC)有助于編碼Cas9和sgRNA的質(zhì)粒的有效遞送,。當(dāng)大質(zhì)粒通過PC傳遞時,，它們可以以高N/P比聚結(jié)并包裹質(zhì)粒;這有效地編輯了兩個基因組位點:血紅蛋白亞基β(19.1%)和菱形5同源物1(RHBDF1(7.0%))。研究人員開發(fā)了巨噬細胞特異性啟動子驅(qū)動的Cas9表達質(zhì)粒(pM458和pM330),，并將其包裹在陽離子脂質(zhì)輔助PEG-b-PLGA納米顆粒中，以解決無法在靶組織和細胞中進行精確基因編輯的問題(CLAN),?；陉栯x子聚合物的基因***在臨床試驗中顯示出巨大的潛力，但由于研究仍處于早期階段,，目前大多數(shù)研究都處于臨床前階段,。評估轉(zhuǎn)染效率至關(guān)重要，特別是在需要高轉(zhuǎn)染效率以保證特定下游靶標(biāo)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的功能研究中,。jetPEI 轉(zhuǎn)染試劑便宜

小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染可用于評估轉(zhuǎn)染效率,。這可以通過引入含有熒光素酶報告基因的質(zhì)粒來實現(xiàn)，其中的3'UTR可以被特定的小RNA(如miRNA)識別,，然后允許小RNA結(jié)合以抑制熒光素酶的表達,。另一方面，在RNA干擾(RNAi)研究中,，小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染也是必不可少的,，以確定siRNA等特定小RNA對宿主細胞中特定基因表達的調(diào)節(jié)作用。小的非編碼RNA,，如siRNA,，以其表觀遺傳調(diào)控能力而聞名，更具體地說,，是轉(zhuǎn)錄后對特定基因表達的調(diào)控,。siRNA模擬物和攜帶與熒光素酶報告系統(tǒng)相關(guān)的特定基因的質(zhì)粒DNA可以同時共轉(zhuǎn)染到靶細胞中。siRNA模擬物成功敲低特定基因表達將導(dǎo)致熒光素酶活性***降低,。共轉(zhuǎn)染還可能涉及不同的小分子如miRNAs,，這有助于研究小RNA對靶宿主細胞的影響。例如,，如果引入miRNA模擬物可以影響特定細胞類型中特定下游基因的表達,，那么預(yù)計將其抑制劑序列同時轉(zhuǎn)染到同一細胞中會降低單獨miRNA模擬物序列發(fā)揮的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)作用。與單一核酸類型的轉(zhuǎn)染相比,，涉及將多個核酸轉(zhuǎn)移到同一細胞中的共轉(zhuǎn)染通常更多挑戰(zhàn)性更大,，因為并非所有核酸類型都能有效轉(zhuǎn)移，這可能取決于轉(zhuǎn)染方法和所涉及的細胞類型,。廣東天津轉(zhuǎn)染試劑選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑可能取決于幾個因素,，包括轉(zhuǎn)染核酸的類型和轉(zhuǎn)染的復(fù)雜性(單轉(zhuǎn)染或共轉(zhuǎn)染),。

作為一般指導(dǎo)原則，建議使用早期傳代的細胞以獲得良好的轉(zhuǎn)染效率,，特別是涉及原代或干細胞的轉(zhuǎn)染,。另一個有趣的觀察結(jié)果是，37℃是可以幫助原代細胞達到更高轉(zhuǎn)染效率的比較好培養(yǎng)溫度,。這種現(xiàn)象可能是因為37攝氏度是哺乳動物細胞的比較好培養(yǎng)溫度,。同時，在轉(zhuǎn)染原代細胞時,，化學(xué)轉(zhuǎn)染似乎不如病毒和物理轉(zhuǎn)染有吸引力,，尤其是在人類原代干細胞中。當(dāng)在相似條件下使用相同的轉(zhuǎn)染試劑進行轉(zhuǎn)染時,，細胞系的來源(如人類與動物細胞系)也可能有助于不同程度的效率,。在一項涉及轉(zhuǎn)染人類和大鼠平滑肌細胞的研究中，大多數(shù)轉(zhuǎn)染試劑在轉(zhuǎn)染大鼠平滑肌細胞(α-10SMCs)方面的效率高于轉(zhuǎn)染人主動脈平滑肌細胞(HASMCs),。

化學(xué)轉(zhuǎn)染的效率在很大程度上取決于幾個因素,，如使用的試劑類型、靶細胞的來源和性質(zhì),，以及選擇的比較好DNA與試劑比例,。慢病毒等病毒載體能夠攜帶大尺寸的核酸，并將其靶標(biāo)傳遞給非分裂細胞和分裂細胞,，因此在基因***中非常有用,。有幾個因素已被證明可能影響病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的效率，如靶細胞類型,、使用的啟動子類型,、載體濃度和使用的轉(zhuǎn)導(dǎo)介質(zhì)條件。在一項評估使用人類免疫缺陷病毒(HIV)和馬傳染性貧血病毒(EIAV)進行基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的體外研究中,，觀察到這兩種病毒在來自人類,、倉鼠、貓,、狗,、馬和豬的不同細胞系上的不同程度的效率。在大多數(shù)細胞類型上,，使用HIV的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率普遍優(yōu)于EIAV,，而這兩種病毒對嚙齒動物細胞的***性較弱。在同一項研究中,，啟動子的類型也被認為是可能影響轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的一個因素,，因此含有替代CMV啟動子的內(nèi)部啟動子EF-1a的HIV在小鼠和大鼠細胞上表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。研究已經(jīng)確定了陽離子脂質(zhì)體（CLs）的某些特征,，這些特征增強了它們在體內(nèi)轉(zhuǎn)運核酸的能力,。

陽離子脂質(zhì)體合成中常用的分子是中性脂質(zhì)二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE),。DOPE的作用是促進膜融合，并有助于質(zhì)膜或核內(nèi)體的不穩(wěn)定,。此外,，由于陽離子脂質(zhì)相互排斥，因此需要DOPE等輔助脂質(zhì)來穩(wěn)定陽離子脂質(zhì)體（CLs）懸浮液,，并抵消其他載體如聚乙烯亞胺(PEI)和樹狀大分子中存在的陰離子糖胺聚糖的抗轉(zhuǎn)染作用,。沒有中性脂質(zhì)的脂質(zhì)體具有較低的轉(zhuǎn)染率，盡管情況并非總是如此,。不同的轉(zhuǎn)染率可能是由用于配制脂質(zhì)體的陽離子:中性脂質(zhì)的不同比例引起的,。如上所述，CLs介導(dǎo)的核酸轉(zhuǎn)移的成功取決于許多因素,，這些因素可能解釋了脂質(zhì)體(脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染)的內(nèi)在變異性，特別是在體內(nèi),。影響物理轉(zhuǎn)染或機械轉(zhuǎn)染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理,。湖南陽離子轉(zhuǎn)染試劑

在大腸桿菌細胞中復(fù)制的質(zhì)粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序，這與細菌DNA中的頻率相似,。jetPEI 轉(zhuǎn)染試劑便宜

流式細胞術(shù)可以更精確地定量表達特定熒光基因的細胞,，以評估轉(zhuǎn)染效率。另一種評估轉(zhuǎn)染效率的方法是通過監(jiān)測轉(zhuǎn)染后的特定蛋白表達,。將轉(zhuǎn)基因引入細胞可能會改變由轉(zhuǎn)基因或細胞中其他基因編碼的蛋白質(zhì)的表達,。同樣，轉(zhuǎn)染小RNA也可以調(diào)節(jié)宿主細胞中特定下游遺傳靶點的表達,。免疫印跡和免疫熒光染色可用于評估轉(zhuǎn)染后蛋白表達的變化,。在這兩種方法中，使用特異性抗體結(jié)合靶蛋白是至關(guān)重要的,，后者需要使用與一抗結(jié)合的熒光標(biāo)記二級抗體來檢測感興趣的蛋白質(zhì),。另一方面，在免疫印跡中,，可以使用辣根過氧化物酶(HRP)偶聯(lián)的二抗與一抗結(jié)合,，進行特異性蛋白檢測。免疫印跡法允許對蛋白質(zhì)表達進行半定量,，而免疫熒光染色法允許通過熒光顯微鏡或流式細胞術(shù)進行定量檢測,。通過檢查特定蛋白表達來評估轉(zhuǎn)染效率更具可重復(fù)性和直接性。然而,，使用抗體所固有的非特異性蛋白質(zhì)結(jié)合問題和獲得假陰性結(jié)果的可能性,，這可能是由于不及時測定蛋白質(zhì)表達引起的，仍然是使用這些方法的缺點,。jetPEI 轉(zhuǎn)染試劑便宜