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細(xì)胞轉(zhuǎn)染：(1)轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備A.將400ul去核酸酶水加入管中,，震蕩10秒鐘,，溶解脂狀物,。B.震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存，使用前還需震蕩,，,。(2)選擇合適的混合比例(1：1-1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基,。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA,，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩,。(3)將混合液在室溫放置10—15分鐘,。(4)吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次,。(5)加入混合液,，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時。(6)到時后,，根據(jù)細(xì)胞種類決定是否移除混合液,，之后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時。瞬時表...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染操作方法：轉(zhuǎn)染 ,，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù),。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法,。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo),、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法,、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例,；化學(xué)介導(dǎo)方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法,、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù),；生物介導(dǎo)方法，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,，和現(xiàn)在比較多見的各種細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高,、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點,。細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法,，同時具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢,。但是，細(xì)菌轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜,，常常對細(xì)胞類型...

如何提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗效率：優(yōu)化細(xì)胞生長狀態(tài)密切觀察您的細(xì)胞;確保它們狀態(tài)良好,。在開始轉(zhuǎn)染細(xì)胞之前，先制定一個適當(dāng)?shù)姆N板方案,，使細(xì)胞密度從轉(zhuǎn)染開始到結(jié)束都保持較佳狀態(tài),。增加成功幾率—細(xì)胞是轉(zhuǎn)染過程中的一個關(guān)鍵元素，它可以是影響結(jié)果的一致性和質(zhì)量的較重要的變量,。此外,，還常用促有絲分裂刺激物(如，細(xì)菌轉(zhuǎn)化,，生長因子，條件培養(yǎng)基,，以及滋養(yǎng)細(xì)胞)來活化原代培養(yǎng)細(xì)胞,。貼壁細(xì)胞相比較懸浮細(xì)胞—在轉(zhuǎn)染效率方面貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞之間的差異明顯。天生趨于懸浮的細(xì)胞(如HL 60,，Jurkat)非常難以轉(zhuǎn)染,。相反,，天生為貼壁的細(xì)胞(如HEK,，CHO)則可適應(yīng)懸浮生長的條件,。重新接種于培養(yǎng)皿或瓶,，較好在轉(zhuǎn)染前4小時換...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法：1.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷,，能與核酸的磷酸根通過靜電作用,，將DNA分子包裹入內(nèi),，形成DNA脂復(fù)合物,，也能被表面帶負(fù)電的細(xì)胞膜吸附,，再通過融合或細(xì)胞內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞,。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中，是目前實驗室較方便的轉(zhuǎn)染方法之一,，其轉(zhuǎn)染率較高,，優(yōu)于磷酸鈣法,。由于脂質(zhì)體對細(xì)胞有一定的毒性，所以轉(zhuǎn)染時間一般不超過24小時,。常用細(xì)胞類型：cos-7 ,、BHK、NIH3T3 ,、Hela等2.電穿孔轉(zhuǎn)染法電流能夠可逆地?fù)舸┘?xì)胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進(jìn)入胞內(nèi),，這種方法就是電穿孔。當(dāng)遇到某些脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很低或幾乎無法轉(zhuǎn)入時建議用電穿孔法轉(zhuǎn)染,。...

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的篩選：生長的細(xì)胞比不分裂的細(xì)胞更快的受到GENETICIN物品的影響,。轉(zhuǎn)染后，在開始篩選前等待48-72小時,，使細(xì)胞表達(dá)足夠量的抗性酶,，保證在開始篩選時可以自我保護(hù)。轉(zhuǎn)染后48-72小時倒掉培養(yǎng)基,，加入含有GENETICIN物品的培養(yǎng)基,，物品的濃度根據(jù)劑量反應(yīng)曲線確定，足夠殺死未轉(zhuǎn)染細(xì)胞,。因為許多因子影響到篩選所需的GENETICIN物品的較佳濃度,，包括細(xì)胞類型，培養(yǎng)基和血清濃度等,，所以有必要對每種細(xì)胞作一個劑量反應(yīng)曲線,，確定較佳濃度。篩選較多可能需要一周時間,，因為在致死劑量的GENETICIN物品存在條件下,，細(xì)胞會分裂1-2次。在次培養(yǎng)細(xì)胞時使用較低劑量的物品,，一般是篩選劑量...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染,，你至少要掌握以下幾點：主要有下面幾種方法：：化學(xué)法：磷酸鈣法、DEAE-右旋糖苷法,、陽離子脂質(zhì)體法,；物理法：電穿孔法、顯微注射法,、顆粒傳遞法,；細(xì)菌介導(dǎo)法：逆轉(zhuǎn)錄細(xì)菌、腺細(xì)菌A. 陽離子脂質(zhì)體法：帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞,。特點：簡單通用,，適用性廣，轉(zhuǎn)染效率高，重復(fù)性好,，但轉(zhuǎn)染時需除血清,，轉(zhuǎn)染效率隨細(xì)胞類型變化大。由于脂質(zhì)體復(fù)合物與貼壁細(xì)胞的接觸機會遠(yuǎn)大于懸浮細(xì)胞,，所以貼壁比懸浮轉(zhuǎn)染效率要高,。懸浮細(xì)胞建議使用電穿孔法。B. 電穿孔法：利用高壓電脈沖對細(xì)胞膜的干擾,，使其形成利于核酸進(jìn)入的微孔,。通過緩沖液的作用以及脂質(zhì)與內(nèi)體膜融合，增大內(nèi)體的內(nèi)部滲透壓,。重慶細(xì)...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的原理,、操作步驟以及小技巧：一、脂質(zhì)體(Liposome)轉(zhuǎn)染方法原理脂質(zhì)體作為體內(nèi)和體外輸送載體的工具,，已經(jīng)研究的十分普遍,，中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA，借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi),。帶正電的陽離子脂質(zhì)體,，DNA并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中，而是帶負(fù)電的DNA自動結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上,，形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物,，從而吸附到帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面，經(jīng)過內(nèi)吞被導(dǎo)入細(xì)胞,。優(yōu)點:與其它方法相比,，有較高的效率和較好的重復(fù)性，它適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中,，是目前條件下較方便的轉(zhuǎn)染方法之一,。對于轉(zhuǎn)染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質(zhì)體試劑的量會因細(xì)胞密度而異。北京細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑...

細(xì)胞電轉(zhuǎn)染實驗的幾點建議：1. 電場強度要合適合適的電場強度對于電轉(zhuǎn)染實驗非常重要,，電場強度不能過高，過高會增加細(xì)胞的死亡率,；也不能過低,，過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同細(xì)胞系具有不同的較佳場強值,，實驗前應(yīng)測定所轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的較佳電場強度,。2. 細(xì)胞狀態(tài)要好用于電轉(zhuǎn)的細(xì)胞一般選取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞（15代以內(nèi)，傳代后2d）,。因為處于對數(shù)生長期的細(xì)胞分裂旺盛,，表面結(jié)構(gòu)致密比穩(wěn)定期的細(xì)胞差，電轉(zhuǎn)后，細(xì)胞膜的恢復(fù)能力強,，而且處于有絲分裂期的細(xì)胞更容易接受外源DNA.對于原代細(xì)胞,，可用促有絲分裂刺激物進(jìn)行細(xì)胞活化。寧波天津細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1. 細(xì)胞污染細(xì)胞污染也...

如何高效率實現(xiàn)細(xì)胞轉(zhuǎn)染：陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑,，以其適用宿主范圍廣,，操作簡便，對細(xì)胞毒性小,，轉(zhuǎn)染效率高受到研究者們的青睞,。脂質(zhì)體（liposome）是一種人工膜，在水相中形成具有雙分子層結(jié)構(gòu)的球形封閉囊泡,。脂質(zhì)體可以和帶負(fù)電荷的核酸結(jié)合后重新形成復(fù)合物,，當(dāng)復(fù)合物接近細(xì)胞膜時，通過內(nèi)吞作用形成內(nèi)體（endosomes）進(jìn)入細(xì)胞,，通過緩沖液的作用以及脂質(zhì)與內(nèi)體膜融合,，增大內(nèi)體的內(nèi)部滲透壓，使內(nèi)體結(jié)構(gòu)破壞,，釋放出核酸,。隨后DNA復(fù)合物被釋放進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)。對于普通細(xì)胞系,，一般的瞬時轉(zhuǎn)染方法多采用脂質(zhì)體法,。利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法較重要的就是防止其毒性，因此脂質(zhì)體與質(zhì)粒的比例,，細(xì)胞密度以及轉(zhuǎn)染的時間長...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染那些事兒：1. 選擇傳代次數(shù)較低并處于對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。對大多數(shù)細(xì)胞而言，均需要在轉(zhuǎn)染當(dāng)天或前現(xiàn)在鋪板,，第二天上午進(jìn)行轉(zhuǎn)染,，48h后收集細(xì)胞進(jìn)行功能檢測。對于原代細(xì)胞,，可用促有絲分裂刺激物進(jìn)行細(xì)胞活化,。2.對于貼壁細(xì)胞，一般要求在轉(zhuǎn)染前一日,，用胰酶處理為單細(xì)胞懸液,，重新接種于培養(yǎng)皿或瓶，較好在轉(zhuǎn)染前4小時換一次新鮮培養(yǎng)液,。3.支原體污染會嚴(yán)重降低細(xì)胞轉(zhuǎn)染的效率,，且支原體不會像細(xì)菌污染那么明顯，因而轉(zhuǎn)染前可用環(huán)丙沙星處理細(xì)胞以除去支原體,。4.細(xì)胞轉(zhuǎn)染時需要一定的細(xì)胞密度,，以70-90%（貼壁細(xì)胞）或2×106-4×106細(xì)胞/ml（懸浮細(xì)胞）為宜,。選擇傳代次數(shù)較低并處于對數(shù)生長期...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗簡介：實驗原理外源基因進(jìn)入細(xì)胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質(zhì)體介導(dǎo)法和細(xì)菌介導(dǎo)法,。電擊法是在細(xì)胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質(zhì)粒進(jìn)入;磷酸鈣法和脂質(zhì)體法是利用不同的載體物質(zhì)攜帶質(zhì)粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進(jìn)入細(xì)胞;細(xì)菌法是利用包裝了外源基因的細(xì)菌傳染細(xì)胞的方法使得其進(jìn)入細(xì)胞,。但是由于電擊法和磷酸鈣法的實驗條件控制較嚴(yán)、難度較大;細(xì)菌法的前期準(zhǔn)備較復(fù)雜,、而且可能對于細(xì)胞有較大影響;所以現(xiàn)在對于很多普通細(xì)胞系,，一般的瞬時轉(zhuǎn)染 方法多采用脂質(zhì)體法。其可降解性對體內(nèi)應(yīng)用也具有重要的意義,。濟南正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家供應(yīng)如何提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗效率：優(yōu)化細(xì)胞生長狀態(tài)密切觀察...

如何有效提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗效率：1.選擇高效的轉(zhuǎn)染方法不同轉(zhuǎn)染試劑有不同的轉(zhuǎn)染方法,，但大多大同小異。轉(zhuǎn)染時應(yīng)跟據(jù)具體轉(zhuǎn)染試劑推薦的方法,，但也要注意,，因不同實驗室培養(yǎng)的細(xì)胞性質(zhì)不同，質(zhì)粒定量差異,，操作手法上的差異等,，其轉(zhuǎn)染效果可能不同，應(yīng)根據(jù)實驗室的具體條件來確定較佳轉(zhuǎn)染條件,。2.確保所構(gòu)建載體的質(zhì)量,。轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建（細(xì)菌載體，質(zhì)粒DNA,，RNA,，PCR產(chǎn)物，寡核苷酸等）也影響轉(zhuǎn)染結(jié)果,。細(xì)菌載體對特定宿主細(xì)胞傳染效率較高,，但不同細(xì)菌載體有其特定的宿主，有的還要求特定的細(xì)胞周期,，如逆轉(zhuǎn)錄細(xì)菌需侵染分裂期的宿主細(xì)胞,，此外還需考慮一些安全問題（如基因污染）。除載體構(gòu)建外,，載體的形態(tài)及大小對轉(zhuǎn)染效率也有不...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗注意事項：1.如為貼壁生長細(xì)胞,，一般要求在轉(zhuǎn)染前一日，必須應(yīng)用胰酶處理成單細(xì)胞懸液,，重新接種于培養(yǎng)皿或瓶,，轉(zhuǎn)染當(dāng)日的細(xì)胞密度以70-90%（貼壁細(xì)胞）或2×106-4×106細(xì)胞/ml（懸浮細(xì)胞）為宜，較好在轉(zhuǎn)染前4h換一次新鮮培養(yǎng)液,。2.用于轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒DNA必須無蛋白質(zhì)，無RNA和其他化學(xué)物質(zhì)的污染,，OD260/280比值應(yīng)在1.8以上,。3.培養(yǎng)基中的血清在開始準(zhǔn)備DNA和陽離子脂質(zhì)體試劑稀釋液時要使用無血清的培養(yǎng)基,，因為血清會影響復(fù)合物的形成。其實,，只要在DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物形成時不含血清,，在轉(zhuǎn)染過程中是可以使用血清的。在一般實驗室中很難普及,。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染之PEI 轉(zhuǎn)染法：1.細(xì)胞分盤：通過胰酶消化收集細(xì)胞,，用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以 1×105 至 4×105細(xì)胞/cm2 的密度平鋪細(xì)胞于 35 mm 培養(yǎng)皿上（根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿，使細(xì)胞貼壁后所占面積達(dá)到培養(yǎng)皿總面積的 70－90％）,。將細(xì)胞置于含 5％CO2 的 37℃溫箱中孵育 8-24 h,，當(dāng)細(xì)胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前 2 h 換液（用 1.5 ml 無血清培養(yǎng)基置換舊的培養(yǎng)基）,。注：PEI轉(zhuǎn)染法對細(xì)胞生長有克制作用,，在換液前細(xì)胞幾乎不生長，所以需要密度比較大時做轉(zhuǎn)染,。2.制備PEI-DNA 混合物以 35 mm 組織培養(yǎng)皿用 240 μl 反應(yīng)總體積為例,。先在無菌EP管...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法：1.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用,，將DNA分子包裹入內(nèi),，形成DNA脂復(fù)合物，也能被表面帶負(fù)電的細(xì)胞膜吸附,，再通過融合或細(xì)胞內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞,。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中，是目前實驗室較方便的轉(zhuǎn)染方法之一,，其轉(zhuǎn)染率較高,，優(yōu)于磷酸鈣法。由于脂質(zhì)體對細(xì)胞有一定的毒性,，所以轉(zhuǎn)染時間一般不超過24小時,。常用細(xì)胞類型：cos-7 、BHK,、NIH3T3 ,、Hela等2.電穿孔轉(zhuǎn)染法電流能夠可逆地?fù)舸┘?xì)胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進(jìn)入胞內(nèi)，這種方法就是電穿孔,。當(dāng)遇到某些脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很低或幾乎無法轉(zhuǎn)入時建議用電穿孔法轉(zhuǎn)染,。...

如何高效率實現(xiàn)細(xì)胞轉(zhuǎn)染：瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)根據(jù)基因表達(dá)時間的長短可分為兩大類，一類是瞬時轉(zhuǎn)染,，一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（很長轉(zhuǎn)染）,。瞬時轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中，外源基因得以表達(dá)但它們并不會整合到細(xì)胞的基因組中,，也就不會被復(fù)制,。細(xì)胞中瞬時轉(zhuǎn)染的外源基因表達(dá)時間有限,，通常*持續(xù)幾天，直到外源基因在細(xì)胞分裂過程中因各種因素丟失為止,。在瞬時轉(zhuǎn)染質(zhì)粒中往往都含有一個報告基因,，來指示細(xì)胞中目標(biāo)基因是否存在，這樣的報告基因一般可以在轉(zhuǎn)染后一兩天內(nèi)檢測到,。大部分細(xì)胞可以在無血清培養(yǎng)基中幾個小時內(nèi)保持健康,。開封細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑價格如何提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗效率：優(yōu)化細(xì)胞生長狀態(tài)密切觀察您的細(xì)胞;確保它們狀態(tài)良好。在開始轉(zhuǎn)染細(xì)...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染常用步驟：1.轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備①將400ul去核酸酶水加入管中,，震蕩10秒鐘,，溶解脂狀物。②震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存,，使用前還需震蕩,。2.選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基,。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA,，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩,。3.將混合液在室溫放置10―15分鐘,。4.吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次,。5.加入混合液,，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時。6.到時后,，根據(jù)細(xì)胞種類決定是否移除混合液,，之后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24－48小時。細(xì)胞易于生長到高...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染為什么不能加血清：不同的細(xì)胞及轉(zhuǎn)染試劑要求轉(zhuǎn)染的條件是不同 的,。較好是在靠前次實驗前做一個預(yù)實驗,，比如：HeLa，293,，CHO,，COS7， MCF－7,，HepG2等細(xì)胞,，是否加血清，對不同的細(xì)胞是有不同的影響的,，有些細(xì)胞是可以有血清的,，有些加血清就會受影響。轉(zhuǎn)染后在6小時左右較好換液且換為有血清的培養(yǎng)基,，其一因為普通轉(zhuǎn)染試劑對細(xì)胞的毒性作用大,，其二可降低因血清的缺乏引起的細(xì)胞的死亡,。轉(zhuǎn)染時不加血清是防止血清的干擾作用，轉(zhuǎn)染后可適時加入,。加入過早會引起未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的優(yōu)勢生長，過晚會引起較多細(xì)胞死亡,?？蓪崟r觀察1/5細(xì)胞變圓的時候加入血清。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法,，則各有其特點,。太原細(xì)...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗注意事項：1.培養(yǎng)基中的物品物品是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。這些物品一般對于真核細(xì)胞無毒,，但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性,，使物品可以進(jìn)入細(xì)胞。這降低了細(xì)胞的活性,，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低,。這時候可以選擇Entranster轉(zhuǎn)染試劑，非脂質(zhì)體試劑,，培養(yǎng)基可加物品,，避免了細(xì)胞染菌。2.設(shè)置陽性對照和陰性對照,。3.一般在轉(zhuǎn)染24-48h,，靶基因即在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。根據(jù)不同的實驗?zāi)康模?4-48h后即可進(jìn)行靶基因表達(dá)的檢測實驗,。4.如若建立穩(wěn)定的細(xì)胞系,，則可對靶細(xì)胞進(jìn)行篩選，根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物,，常用的真核表達(dá)基因載體的標(biāo)志物有潮霉素和新霉素等,。轉(zhuǎn)染 ，是將外源性基因?qū)?..

細(xì)胞轉(zhuǎn)染那些事兒：1.設(shè)置陰性和陽性對照：一般在轉(zhuǎn)染后24-48h,靶基因即在細(xì)胞內(nèi)表達(dá),?？梢罁?jù)不同的實驗?zāi)康模?4-48h后即可進(jìn)行靶基因表達(dá)的檢測等實驗。2.轉(zhuǎn)染后效率的檢測方法：觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞熒光情況,；qPCR驗證,；WB檢測敲減或過表達(dá)蛋白。3. 轉(zhuǎn)染效率低,，可采取以下兩種方法：1 )復(fù)轉(zhuǎn)染,，即轉(zhuǎn)染后12-24h再進(jìn)行轉(zhuǎn)染，前提是該細(xì)胞對脂質(zhì)體的耐受性較好,，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞死亡數(shù)較少,。2 )通過藥篩來殺死未轉(zhuǎn)入成功的細(xì)胞,，前提是該質(zhì)粒帶有物品抗性的基因。4. 電轉(zhuǎn)時,，不同的細(xì)胞需要的電壓是不一樣的,，需要做預(yù)實驗，摸索較佳條件,。對于大多數(shù)細(xì)胞而言,，較佳電壓位于250-1250v/cm。電擊后,，應(yīng)...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項：1.細(xì)胞鋪板密度用于轉(zhuǎn)染的較佳細(xì)胞密度根據(jù)不同的細(xì)胞類型或應(yīng)用而異,。因轉(zhuǎn)染試劑對細(xì)胞有毒害作用，細(xì)胞太少,，容易死,。一般轉(zhuǎn)染時，貼壁細(xì)胞密度為70%-90%,，懸浮細(xì)胞密度為2-4×106細(xì)胞/ml,，確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞沒有長滿或處于靜止期。因為轉(zhuǎn)染效率對細(xì)胞密度很敏感,，所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要,。鋪板細(xì)胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細(xì)胞產(chǎn)量。細(xì)胞的融合度必須要達(dá)到90%才能做啟動子的選擇獲得高轉(zhuǎn)染活性所需選擇的啟動子依賴于選用的細(xì)胞系和要表達(dá)的蛋白,。CMV啟動子在大多數(shù)細(xì)胞類型中可以獲得高表達(dá)活性,。同其他啟動子，如SV40和RSV(勞斯肉瘤細(xì)菌)相比,，在BHK-2...

如何提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗效率：優(yōu)化細(xì)胞生長狀態(tài)密切觀察您的細(xì)胞;確保它們狀態(tài)良好,。在開始轉(zhuǎn)染細(xì)胞之前，先制定一個適當(dāng)?shù)姆N板方案,，使細(xì)胞密度從轉(zhuǎn)染開始到結(jié)束都保持較佳狀態(tài),。增加成功幾率—細(xì)胞是轉(zhuǎn)染過程中的一個關(guān)鍵元素，它可以是影響結(jié)果的一致性和質(zhì)量的較重要的變量,。此外,，還常用促有絲分裂刺激物(如，細(xì)菌轉(zhuǎn)化,，生長因子,，條件培養(yǎng)基，以及滋養(yǎng)細(xì)胞)來活化原代培養(yǎng)細(xì)胞,。貼壁細(xì)胞相比較懸浮細(xì)胞—在轉(zhuǎn)染效率方面貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞之間的差異明顯,。天生趨于懸浮的細(xì)胞(如HL 60，Jurkat)非常難以轉(zhuǎn)染。相反,，天生為貼壁的細(xì)胞(如HEK,，CHO)則可適應(yīng)懸浮生長的條件?？?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化,。蘇州正...

如何提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率：1.組織培養(yǎng)試劑優(yōu)化細(xì)胞生長條件。只使用新鮮配制的培養(yǎng)基和添加劑,，并經(jīng)可能減少所用試劑的變更,。基礎(chǔ)培養(yǎng)基—目前所使用的各種市售培養(yǎng)基(如,，RPMI 1640和DMEM)。培養(yǎng)基的成分包括營養(yǎng)物質(zhì)(氨基酸,，葡萄糖),，維生素，無機鹽,，和緩沖物質(zhì),。有些成分非常不穩(wěn)定，因此如果不在使用時新鮮加入就可能會產(chǎn)生問題,。務(wù)必要使培養(yǎng)基避光保存,。因為已知有一些組分和緩沖物質(zhì)，如HEPES,，當(dāng)暴露于光照下就會分解產(chǎn)生細(xì)胞毒性物質(zhì),。另外，血清,，添加劑,，來自于培養(yǎng)箱內(nèi)的污染物、化學(xué)物質(zhì),，或/細(xì)胞的污染也都可能影響到細(xì)胞生理,。2.細(xì)胞生長狀態(tài)密切觀察您的細(xì)胞;確保它們狀態(tài)良好。在開始轉(zhuǎn)染細(xì)胞之前,，...

如何高效率實現(xiàn)細(xì)胞轉(zhuǎn)染：瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)根據(jù)基因表達(dá)時間的長短可分為兩大類,，一類是瞬時轉(zhuǎn)染，一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（很長轉(zhuǎn)染）,。瞬時轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中,，外源基因得以表達(dá)但它們并不會整合到細(xì)胞的基因組中，也就不會被復(fù)制,。細(xì)胞中瞬時轉(zhuǎn)染的外源基因表達(dá)時間有限,，通常*持續(xù)幾天，直到外源基因在細(xì)胞分裂過程中因各種因素丟失為止。在瞬時轉(zhuǎn)染質(zhì)粒中往往都含有一個報告基因,，來指示細(xì)胞中目標(biāo)基因是否存在,，這樣的報告基因一般可以在轉(zhuǎn)染后一兩天內(nèi)檢測到。較適合轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是經(jīng)過幾次傳代后達(dá)到對數(shù)生長期的細(xì)胞,。廈門昆明細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑細(xì)胞轉(zhuǎn)染操作方法：轉(zhuǎn)染 ,，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研...

轉(zhuǎn)染的注意事項：細(xì)胞鋪板密度用于轉(zhuǎn)染的較佳細(xì)胞密度根據(jù)不同的細(xì)胞類型或應(yīng)用而異,。一般轉(zhuǎn)染時,，貼壁細(xì)胞密度為70%-90%，懸浮細(xì)胞密度為2×106-4×106細(xì)胞/ml時效果較好,。確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞沒有長滿或處于靜止期,。因為轉(zhuǎn)染效率對細(xì)胞密度很敏感，所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要,。鋪板細(xì)胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細(xì)胞產(chǎn)量,。在三種不同密度進(jìn)行細(xì)胞鋪板的比較表明鋪板密度較高的，CAT活性也較高,。得到較高活性所需的LIPOFECTAMINE試劑的量也相應(yīng)增加了,。這些結(jié)果說明，對于轉(zhuǎn)染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質(zhì)體試劑的量會因細(xì)胞密度而異,。來指示細(xì)胞中目標(biāo)基因是否存在,，這樣的報告基...

轉(zhuǎn)染的注意事項：細(xì)胞鋪板密度用于轉(zhuǎn)染的較佳細(xì)胞密度根據(jù)不同的細(xì)胞類型或應(yīng)用而異。一般轉(zhuǎn)染時,，貼壁細(xì)胞密度為70%-90%,，懸浮細(xì)胞密度為2×106-4×106細(xì)胞/ml時效果較好。確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞沒有長滿或處于靜止期,。因為轉(zhuǎn)染效率對細(xì)胞密度很敏感,，所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要。鋪板細(xì)胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細(xì)胞產(chǎn)量,。在三種不同密度進(jìn)行細(xì)胞鋪板的比較表明鋪板密度較高的,，CAT活性也較高。得到較高活性所需的LIPOFECTAMINE試劑的量也相應(yīng)增加了,。這些結(jié)果說明,，對于轉(zhuǎn)染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質(zhì)體試劑的量會因細(xì)胞密度而異。由于脂質(zhì)體對細(xì)胞有一定的毒性,，所以轉(zhuǎn)染時間...

轉(zhuǎn)染方式：細(xì)胞由帶負(fù)電荷的磷脂雙分子層構(gòu)成,，這對大分子物質(zhì)來說是個不可透過的屏障，比如DNA和RNA的磷酸骨架,，其也帶負(fù)電荷,。為了使核酸穿過細(xì)胞膜，研究人員開發(fā)了多種技術(shù)，大致分為三類：化學(xué)方法---利用載體分子包被核酸使其呈現(xiàn)中性電荷或正電荷,。生物方法---利用基因工程細(xì)菌轉(zhuǎn)染非細(xì)菌基因到細(xì)胞中,。物理方法---在細(xì)胞膜表面產(chǎn)生一個瞬時的孔從而導(dǎo)入DNA。然而,，沒有一種方法適用于所有的細(xì)胞和實驗,，理想的方法應(yīng)根據(jù)您的細(xì)胞類型和實驗需要進(jìn)行選擇，理想的方法應(yīng)具有高轉(zhuǎn)染效率,，低細(xì)胞毒性和對正常生理學(xué)的影響較小,，并且易于使用和可重復(fù)性等特點。在現(xiàn)生命可續(xù)研究中,，大部分的工作是利用基因功能研究來探索生...

如何提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率：1.組織培養(yǎng)試劑優(yōu)化細(xì)胞生長條件,。只使用新鮮配制的培養(yǎng)基和添加劑，并經(jīng)可能減少所用試劑的變更,?；A(chǔ)培養(yǎng)基—目前所使用的各種市售培養(yǎng)基(如，RPMI 1640和DMEM),。培養(yǎng)基的成分包括營養(yǎng)物質(zhì)(氨基酸，葡萄糖),，維生素,，無機鹽，和緩沖物質(zhì),。有些成分非常不穩(wěn)定,，因此如果不在使用時新鮮加入就可能會產(chǎn)生問題。務(wù)必要使培養(yǎng)基避光保存,。因為已知有一些組分和緩沖物質(zhì),，如HEPES，當(dāng)暴露于光照下就會分解產(chǎn)生細(xì)胞毒性物質(zhì),。另外,，血清，添加劑,，來自于培養(yǎng)箱內(nèi)的污染物,、化學(xué)物質(zhì)，或/細(xì)胞的污染也都可能影響到細(xì)胞生理,。2.細(xì)胞生長狀態(tài)密切觀察您的細(xì)胞;確保它們狀態(tài)良好,。在開始轉(zhuǎn)染細(xì)胞之前，...

轉(zhuǎn)染效率：線型PEI(LinePEI,LPEI)與其衍生物用作基因轉(zhuǎn)染載體的研究比分枝狀PEI(BranchedPEI,BPEI)要早一些,，過去的研究認(rèn)為在不考慮具體條件,，LPEI/DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物的細(xì)胞毒性較低，有利于細(xì)胞定位，因此與BPEI相比應(yīng)該轉(zhuǎn)染效率高一些,。但較近研究表明BPEI的分枝度高有利于形成小的轉(zhuǎn)染復(fù)合物,，從而提高轉(zhuǎn)染效率，但同時細(xì)胞毒性也增大,。超很高枝的,、較柔性的PEI衍生物含有額外的仲胺基和叔胺基，在染實驗中發(fā)現(xiàn)這種PEI的毒性低,，但轉(zhuǎn)染效率卻較高,。GenEscort是采用各種分枝狀和超很高枝狀的小分子PEI與各種含有生理條件下可降解鍵的交聯(lián)劑交聯(lián)，合成出的一系列很高枝的...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項：物品(PS)物品,，比如青霉素和鏈霉素,，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。這些物品一般對于真核細(xì)胞無毒,，但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性,，使物品可以進(jìn)入細(xì)胞。這降低了細(xì)胞的活性,，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低,。所以，在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用物品,，甚至在準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染前進(jìn)行細(xì)胞鋪板時也要避免使用物品,。這樣，在轉(zhuǎn)染前也不必潤洗細(xì)胞,。對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素，ICIN選擇性物品的競爭性克制劑,。另外,，為了保證無血清培養(yǎng)基中細(xì)胞的健康生長，使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量,。當(dāng)復(fù)合物接近細(xì)胞膜時,，通過內(nèi)吞作用形成內(nèi)體進(jìn)入細(xì)胞。南昌正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家批發(fā)價細(xì)胞轉(zhuǎn)染那些事兒：1. 選擇傳...