并含有能用于探針捕捉雜交實(shí)驗(yàn)的足夠信息。這一長度范圍的產(chǎn)物可以通過采用兩步擴(kuò)增循環(huán)方法得到,,從而減少擴(kuò)增時間,。其他PCR方法有不同的佳產(chǎn)物長度。例如,,通過定量的RNA-PCR檢測基因表達(dá)時,,產(chǎn)物應(yīng)該足夠大以便構(gòu)成競爭性模板,這樣,,產(chǎn)物和競爭物都能夠在凝膠上很容易的分辨出來,。這些產(chǎn)物一般在250~750bp范圍內(nèi)。⑦補(bǔ)充說明若在cDNA序列內(nèi)找尋PCR引物,,需特別注意兩點(diǎn):首先,,盡力將引物和產(chǎn)物保持在mRNA的編碼區(qū)域內(nèi),因?yàn)檫@是生成蛋白質(zhì)的獨(dú)特序列,,不像3’末端非編碼區(qū)域與許多其他mRNA有同源性,;第二,盡力把引物放在不同的外顯子上,,以便使RNA特異的PCR產(chǎn)物與從污染DNA中產(chǎn)生...
PCR基因擴(kuò)增法在遺傳性疾病產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用,,遺傳病是由于遺傳物變化而引起的機(jī)體某一功能或缺陷或異常所致的疾病,其根本變化在于遺傳物質(zhì),。地中海貧血(Thalassemia)是一種遺傳性慢性溶血性貧血病,,是世界上常見且發(fā)病比高的一種單基因遺傳病。在兩廣,、貴州,、四川等地發(fā)病率較高,在廣西等地高達(dá)15%,。地中海貧血是由于基因突變造成珠蛋白的不平衡,,使結(jié)構(gòu)正常的肽鏈合成量減少甚至沒有合成表現(xiàn)為溶血性貧血。接受累基因種類分為α,、β,、γ等,其中以α,、β地貧為常見,,危害了大。珠蛋白基因簇位于人6號染色短臂上,,有兩個重復(fù)基因基因位于α1,、α2、兩個α基因及其旁側(cè)序列有很大的同源性,,易出現(xiàn)染色體不等...
在凈化車間內(nèi)工作的人員應(yīng)穿著符合要求的工作服,。工作服的選材,、式樣及穿戴方式應(yīng)與生產(chǎn)操作和空氣潔凈度級別要求相適應(yīng),并不得混用,。潔凈工作服的質(zhì)地應(yīng)光滑,、不產(chǎn)生靜電、不脫落纖維和顆粒性物質(zhì),。無菌工作服必須包蓋全部毛發(fā),、胡須及腳部,并能阻留人體脫落物,。不同空氣潔凈度級別使用的工作服應(yīng)當(dāng)分別清洗,、整理,必要時消毒或滅菌,。工作服洗滌,、滅菌時不應(yīng)帶入附加的顆粒物質(zhì)。工作服應(yīng)制定清洗周期,。進(jìn)入各個區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行,,不同的工作區(qū)域使用不同的工作服(例如不同的顏色)。工作人員離開時,,不得將工作服帶出,。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立、執(zhí)行人員進(jìn)出潔凈區(qū)的清潔程序和管理制度,,人員清潔程序合理,。實(shí)驗(yàn)室需要至少配備兩...
PCR基因擴(kuò)增法在遺傳性疾病產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用,遺傳病是由于遺傳物變化而引起的機(jī)體某一功能或缺陷或異常所致的疾病,,其根本變化在于遺傳物質(zhì),。地中海貧血(Thalassemia)是一種遺傳性慢性溶血性貧血病,是世界上常見且發(fā)病比高的一種單基因遺傳病,。在兩廣,、貴州、四川等地發(fā)病率較高,,在廣西等地高達(dá)15%。地中海貧血是由于基因突變造成珠蛋白的不平衡,,使結(jié)構(gòu)正常的肽鏈合成量減少甚至沒有合成表現(xiàn)為溶血性貧血,。接受累基因種類分為α、β,、γ等,,其中以α、β地貧為常見,,危害了大,。珠蛋白基因簇位于人6號染色短臂上,,有兩個重復(fù)基因基因位于α1、α2,、兩個α基因及其旁側(cè)序列有很大的同源性,,易出現(xiàn)染色體不等...
PCR儀的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物,。PCR由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:1,、模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,,使之成為單鏈,,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備,;2,、模板DNA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,,引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對結(jié)合,;3、引物的延伸:DNA模板--引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下,,以dNTP為反應(yīng)原料,,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復(fù)制原理,,合成一條新的與模板DN...
PCR儀的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程,,其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:1,、模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后,,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,,以便它與引物結(jié)合,,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備;2,、模板DNA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對結(jié)合,;3,、引物的延伸:DNA模板--引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應(yīng)原料,,靶序列為模板,,按堿基配對與半保留復(fù)制原理,合成一條新的與模板DN...
基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)又稱PCR實(shí)驗(yàn),,其特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加,,PCR是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法,,應(yīng)用于生物學(xué)各個領(lǐng)域,例如:特定基因的檢測和診斷,,DNA指紋,、個體識別、親子鑒定及法醫(yī)物證,,動,、植物檢疫,動物及其衍生產(chǎn)品檢測,,動物飼料,、化妝品、食品衛(wèi)生檢測,,轉(zhuǎn)基因作物與轉(zhuǎn)基因微生物檢測等,。PCR實(shí)驗(yàn)室原則上為試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品制備區(qū),、擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)四個單獨(dú)的工作區(qū)域并設(shè)有走廊,,各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)緩沖間,工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置,。不同功能的工作區(qū)應(yīng)是分隔的,,各工作區(qū)有明顯的標(biāo)志,不能直通,,如果緊密相連,,需安裝物品傳遞窗。前兩區(qū)為擴(kuò)增前區(qū),,后兩區(qū)為擴(kuò)增后區(qū),,擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)...
PCR實(shí)驗(yàn)室的空氣流向必須嚴(yán)格按照試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)空氣壓力逐漸遞減方式進(jìn)行,防止擴(kuò)增產(chǎn)物順空氣氣流進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域,。風(fēng)速流向不得混亂,。為了保證房間內(nèi)的壓差和避免污染,應(yīng)在空調(diào)面板處寫清楚送風(fēng)機(jī)和排風(fēng)機(jī)的開啟順序和關(guān)閉順序,,先后順序不得混亂,。空氣潔凈級別不同的相鄰房間之間的靜壓差應(yīng)大于5帕,,潔凈室(區(qū))與室外大氣的靜壓差應(yīng)大于10帕,,應(yīng)配備監(jiān)測靜壓差的設(shè)備,并定期監(jiān)控,。一般情況下,試劑配制室及樣品處理室宜呈微正壓,,以防外界含核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入,,造成污染,;可以通過控制進(jìn)風(fēng)風(fēng)量大于排風(fēng)風(fēng)量達(dá)到正壓效果。核酸擴(kuò)增室及產(chǎn)物分析室應(yīng)呈微負(fù)壓,,以防含核酸的氣溶膠擴(kuò)散出...
并含有能用于探針捕捉雜交實(shí)驗(yàn)的足夠信息,。這一長度范圍的產(chǎn)物可以通過采用兩步擴(kuò)增循環(huán)方法得到,從而減少擴(kuò)增時間,。其他PCR方法有不同的佳產(chǎn)物長度,。例如,通過定量的RNA-PCR檢測基因表達(dá)時,,產(chǎn)物應(yīng)該足夠大以便構(gòu)成競爭性模板,,這樣,產(chǎn)物和競爭物都能夠在凝膠上很容易的分辨出來,。這些產(chǎn)物一般在250~750bp范圍內(nèi),。⑦補(bǔ)充說明若在cDNA序列內(nèi)找尋PCR引物,需特別注意兩點(diǎn):首先,,盡力將引物和產(chǎn)物保持在mRNA的編碼區(qū)域內(nèi),,因?yàn)檫@是生成蛋白質(zhì)的獨(dú)特序列,不像3’末端非編碼區(qū)域與許多其他mRNA有同源性,;第二,,盡力把引物放在不同的外顯子上,以便使RNA特異的PCR產(chǎn)物與從污染DNA中產(chǎn)生...
微滴),,包含一個或多個拷貝的核酸分子(也就是說我們所說的DNA模板),,這是與PCR或qPCR反應(yīng)的區(qū)別,PCR或qPCR只在一個反應(yīng)體系中進(jìn)行,,而數(shù)字PCR在每個反應(yīng)單元(微滴)中都會對目標(biāo)分子進(jìn)行擴(kuò)增,,擴(kuò)增結(jié)束后統(tǒng)計(jì)熒光信號并分析。數(shù)字PCR檢測其實(shí)離我們越來越近,,下面我們以幾個臨床案例研究來舉例,,展示數(shù)字PCR巨大的臨床應(yīng)用前景。1).個體化診療通過檢測T790M位點(diǎn)突變情況,,可以更好地評估一代TKI藥物的療效及耐藥情況并指導(dǎo)第三代TKI靶向藥Osimertinib的使用,。然而,由于qPCR平臺ARMS檢測技術(shù)的靈敏度有限,,沒有辦法在含大量EGFR基因野生型背景核酸中高效準(zhǔn)確的...
PCR儀的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程,,其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:1,、模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后,,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,,以便它與引物結(jié)合,,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備,;2、模板DNA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,,溫度降至55℃左右,,引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對結(jié)合;3,、引物的延伸:DNA模板--引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下,,以dNTP為反應(yīng)原料,靶序列為模板,,按堿基配對與半保留復(fù)制原理,,合成一條新的與模板DN...
基因?qū)嶒?yàn)室與PCR實(shí)驗(yàn)室的規(guī)劃布局要求:1、環(huán)境要求通風(fēng),、溫度和濕度實(shí)驗(yàn)室的長期使用,,有毒、有害等污濁氣體不及時排出會危害室內(nèi)操作人員健康,。實(shí)驗(yàn)室良好的通風(fēng)環(huán)境是必要前提,。除了實(shí)驗(yàn)室建筑選址的朝向和所處地域的氣候特征,實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)系統(tǒng)也是必須考慮的問題,。通風(fēng)柜作為保持實(shí)驗(yàn)室內(nèi)安全,、衛(wèi)生的重要柜體,是建立一個科學(xué)實(shí)驗(yàn)室必不可少的組成部分,。潔凈度實(shí)驗(yàn)室的潔凈,,除了實(shí)驗(yàn)室地面、實(shí)驗(yàn)室器具的清潔,,還要考慮實(shí)驗(yàn)室內(nèi)空氣的潔凈度,。不良的空氣質(zhì)量會影響實(shí)驗(yàn)的正常進(jìn)行,擴(kuò)散到空氣中的有害物質(zhì)也會危害到人體健康,。2,、設(shè)施要求給排水、排污系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的實(shí)驗(yàn)室,,都會配置有供水,、排水和排污系統(tǒng),實(shí)驗(yàn)臺配置水池,、...
非洲豬瘟的影響范圍是非常大的,,很多家豬或者野豬都極易受到非洲豬瘟病毒的傳染,再加上對于非洲豬瘟,,我們無法一勞永逸的解決,,養(yǎng)殖戶只能不斷檢測,避免豬瘟的苗頭出現(xiàn),同時注意養(yǎng)殖場內(nèi)的消毒工作,,可以有效的減少非洲豬瘟傳染的概率,。在分子生物學(xué)中,經(jīng)常會遇到細(xì)胞分裂的處理,,這些處理方式利用人工來做的話,花費(fèi)的時間往往極多,,這就造成不必要的人力,、物力浪費(fèi),是非常不合算的,,所以我們一般利用基因擴(kuò)增儀器進(jìn)行這方面的處理,,在很多實(shí)驗(yàn)室的使用過程中,取得了良好的成效,。利用基因擴(kuò)增儀器既可節(jié)省試驗(yàn)時間,,提高實(shí)驗(yàn)效率,又能節(jié)約實(shí)驗(yàn)成本,,同時根據(jù)不同的試驗(yàn)進(jìn)行不同的設(shè)置,,基因擴(kuò)增儀器是為滿足當(dāng)今分子生物實(shí)驗(yàn)室的...
力康X960全自動醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)是新推出的實(shí)時熒光定量PCR儀,秉承力康品牌一貫的 ,,產(chǎn)品具有兩通道和五通道兩種配置選擇,,標(biāo)配96孔鍍金模塊,滿足不同應(yīng)用需求,。力康X960型全自動醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)是特異性靶基因檢測與定量分析的一體化平臺,,將PCR熱循環(huán)儀、熒光檢測和各種應(yīng)用分析軟件結(jié)合于一體,,實(shí)時動態(tài)觀察PCR每一循環(huán)中每個孔中擴(kuò)增產(chǎn)物情況,,無需凝膠電泳分析,無需純化PCR產(chǎn)物,,無需進(jìn)行其他任何實(shí)驗(yàn)操作即可快速得到分析結(jié)果,。PCR儀被大量運(yùn)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中,。上海國產(chǎn)品牌PCR儀批發(fā)價力康深耕醫(yī)療領(lǐng)域三十余年,,始終堅(jiān)持重視科技創(chuàng)新,積極響應(yīng)醫(yī)療領(lǐng)域市場需求,,為臨床及科研機(jī)構(gòu)系統(tǒng)提供...
力康熒光定量pcr儀X960型數(shù)據(jù)分析系統(tǒng):向?qū)降娜形牟僮鹘缑?,直觀、清晰,、功能 -實(shí)時記錄熒光信號的原始數(shù)據(jù),;涵蓋多種分析模式:相對/ 定量、標(biāo)準(zhǔn)溶解曲線、終點(diǎn)法等位基因鑒定,、高分辨率溶解曲線,、等溫?cái)U(kuò)增等;內(nèi)置統(tǒng)計(jì)分析工具和自定義公式編輯工具,,數(shù)據(jù)無需導(dǎo)出,,直接在儀器軟件中分析完成。力康熒光定量pcr儀X960型其他人性化設(shè)計(jì):具有梯度,、Touchdown等高級編程功能,、WIFI或LAN連接PC端-可實(shí)現(xiàn)一臺PC機(jī)連接多臺qPCR;低噪音,、低能耗,、長壽命。PCR技術(shù)不但能檢測基因的突變,而且能準(zhǔn)確檢測特定基因的表達(dá)量,可據(jù)此進(jìn)行早期診斷,分型,分期和預(yù)后判斷.實(shí)驗(yàn)室PCR儀規(guī)格有哪些 ...
完備的實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施是保證實(shí)驗(yàn)工作的必要條件,,應(yīng)根據(jù)各個實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器,,如超凈工作臺、離心機(jī),、加樣器等,。實(shí)驗(yàn)室是科學(xué)的搖籃,是科學(xué)研究的基地,,科技發(fā)展的源泉,,對科技發(fā)展起著非常重要的作用。PCR實(shí)驗(yàn)室規(guī)范的操作:(1)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員必須進(jìn)行上崗培訓(xùn),,經(jīng)培訓(xùn)合格后才能從事臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的工作;(2)在實(shí)驗(yàn)操作過程中,,操作者必須戴手套,并經(jīng)常更換,。此外,,操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施;(3)清潔工作及時、正確,。實(shí)驗(yàn)工作結(jié)束后,,必須立即對本區(qū)進(jìn)行清潔。除常規(guī)的消毒液體對表面進(jìn)行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外,,對一些實(shí)驗(yàn)設(shè)備還應(yīng)進(jìn)...
實(shí)時熒光定量pcr儀,,由熒光定量系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)組成,用來監(jiān)測循環(huán)過程的熒光,。與實(shí)時設(shè)備相連的計(jì)算機(jī)收集熒光數(shù)據(jù),。數(shù)據(jù)通過開發(fā)的實(shí)時分析軟件以圖表的形式顯示。原始數(shù)據(jù)被繪制成熒光強(qiáng)度相對于循環(huán)數(shù)的圖表,。原始數(shù)據(jù)收集后可以開始分析,。實(shí)時設(shè)備的軟件能使收集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行正?;幚韥韽浹a(bǔ)背景熒光的差異。正?;罂梢栽O(shè)定域值水平,,這就是分析熒光數(shù)據(jù)的水平。實(shí)時熒光定量pcr儀組成熒光定量系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)作用,,監(jiān)測循環(huán)過程的熒光,,數(shù)據(jù)形式顯示,通過開發(fā)的實(shí)時分析,,軟件以圖表的表現(xiàn),。實(shí)時熒光定量pcr儀優(yōu)勢:樣品到達(dá)域值水平所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)稱為Ct值(限制點(diǎn)的循環(huán)數(shù))。域值應(yīng)設(shè)定在使指數(shù)期的擴(kuò)增效率為大,,...
它能降解特異性熒光記探針,因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能,。(2)此后熒光雙標(biāo)記探針的運(yùn)用使在一密閉的反應(yīng)管中能實(shí)時地監(jiān)測反應(yīng)全過程,。這兩個發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展導(dǎo)致real-timeQ-PCR方法在研究工作中的運(yùn)用。PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)方式增加的,,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)方式生成模板,從而進(jìn)入平臺期,。在傳統(tǒng)的PCR中,,常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測PCR反應(yīng)的終擴(kuò)增產(chǎn)物,因此用此終點(diǎn)法對PCR產(chǎn)物定量存在不可靠之處,。在real-timeQ-PCR中,,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時的監(jiān)測和連續(xù)地分析擴(kuò)增相關(guān)的...
3).無創(chuàng)產(chǎn)前檢查鐮狀細(xì)胞貧血(sicklecellanemia)是HBB基因突變引起的常染色體顯性遺傳病,有嚴(yán)重的危害,,可以導(dǎo)致高達(dá)5%的胎兒死亡率及,。而有效的無創(chuàng)產(chǎn)前診斷是預(yù)防鐮狀細(xì)胞貧血患兒出生的有效方法。研究人員采用dPCR技術(shù)檢測孕婦胎兒游離DNA(cff-DNA)HBB基因突變,。結(jié)果顯示,,dPCR技術(shù)能夠確定87%的男性胎兒(n=45)和75%的女性胎兒(n=20)HBB基因的突變狀態(tài)。當(dāng)cff-DNA濃度大于7%時,,可以100%的檢測出HBB基因突變[3],,可以說是相當(dāng)厲害了。Nacia數(shù)字PCRNaica數(shù)字PCR系統(tǒng)——簡便,、快速地完成3通道檢測Naica數(shù)字PC...
移動箱式PCR實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格按照生物安全實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)建造,,配備有各類儀器設(shè)備,,注重保障實(shí)驗(yàn)人員安全,,同時具備機(jī)動靈活、反應(yīng)迅速等特點(diǎn),,協(xié)助前線醫(yī)院開展檢測工作,,為防控奉獻(xiàn)綿薄之力。由于集裝箱在出廠前已經(jīng)完成了單個箱體里面配置的所有安裝,,水,、電、風(fēng),、廢水和廢氣排放等系統(tǒng)已經(jīng)在箱體配備,,同時保證了外面環(huán)境的安全。在現(xiàn)場基礎(chǔ)平整的條件下,,只需要簡單的進(jìn)行箱體吊裝安放,、給水和用電對接即可——在極端情況下甚至可以在無水無電的情況下短時運(yùn)行,真正做到組裝迅速,。對接安裝本身不需要非常專業(yè)的人員,,常規(guī)的疾控維修人員或工程人員就可以完成對接。箱體安放位置一般在室外,,對于病人的隔離或控制病毒擴(kuò)散都是有利的,。室...
它能降解特異性熒光記探針,,因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能。(2)此后熒光雙標(biāo)記探針的運(yùn)用使在一密閉的反應(yīng)管中能實(shí)時地監(jiān)測反應(yīng)全過程,。這兩個發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展導(dǎo)致real-timeQ-PCR方法在研究工作中的運(yùn)用,。PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)方式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)方式生成模板,,從而進(jìn)入平臺期。在傳統(tǒng)的PCR中,,常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測PCR反應(yīng)的終擴(kuò)增產(chǎn)物,,因此用此終點(diǎn)法對PCR產(chǎn)物定量存在不可靠之處。在real-timeQ-PCR中,,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時的監(jiān)測和連續(xù)地分析擴(kuò)增相關(guān)的...
并含有能用于探針捕捉雜交實(shí)驗(yàn)的足夠信息,。這一長度范圍的產(chǎn)物可以通過采用兩步擴(kuò)增循環(huán)方法得到,從而減少擴(kuò)增時間,。其他PCR方法有不同的佳產(chǎn)物長度,。例如,通過定量的RNA-PCR檢測基因表達(dá)時,,產(chǎn)物應(yīng)該足夠大以便構(gòu)成競爭性模板,,這樣,,產(chǎn)物和競爭物都能夠在凝膠上很容易的分辨出來。這些產(chǎn)物一般在250~750bp范圍內(nèi),。⑦補(bǔ)充說明若在cDNA序列內(nèi)找尋PCR引物,,需特別注意兩點(diǎn):首先,盡力將引物和產(chǎn)物保持在mRNA的編碼區(qū)域內(nèi),,因?yàn)檫@是生成蛋白質(zhì)的獨(dú)特序列,,不像3’末端非編碼區(qū)域與許多其他mRNA有同源性;第二,,盡力把引物放在不同的外顯子上,,以便使RNA特異的PCR產(chǎn)物與從污染DNA中產(chǎn)生...
力康生物醫(yī)療集研發(fā)、制造,、銷售,、服務(wù)為一體,專注于為您提供完善可靠的數(shù)字化醫(yī)療及實(shí)驗(yàn)室解決方案,??偛吭O(shè)于香港,員工千余人,,產(chǎn)品遍布全球百多個地區(qū)。集團(tuán)擁有多家專業(yè)設(shè)備研發(fā)生產(chǎn)工廠,,青浦工業(yè)園區(qū)是集團(tuán)研發(fā)制造基地,,力新儀器(上海)有限公司是集團(tuán)下屬銷售運(yùn)營中心。投身醫(yī)療領(lǐng)域三十年,,力康已是中國頗具規(guī)模的醫(yī)療器械制造商和供應(yīng)商,。多領(lǐng)域數(shù)字化解決方案、多樣化智能操作系統(tǒng),、準(zhǔn)確的檢測結(jié)果,、貼心的用戶體驗(yàn),使 “力康 Heal Force” 品牌享譽(yù)國內(nèi)外,。PCR實(shí)驗(yàn)室分為四個單獨(dú)工作區(qū)域:試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū),標(biāo)本制備區(qū),擴(kuò)增反應(yīng)混合物配置和擴(kuò)增區(qū),擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū).上海國產(chǎn)品牌PCR儀價格比較力康GM05...
它能降解特異性熒光記探針,,因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能。(2)此后熒光雙標(biāo)記探針的運(yùn)用使在一密閉的反應(yīng)管中能實(shí)時地監(jiān)測反應(yīng)全過程,。這兩個發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展導(dǎo)致real-timeQ-PCR方法在研究工作中的運(yùn)用,。PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)方式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)方式生成模板,,從而進(jìn)入平臺期。在傳統(tǒng)的PCR中,,常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測PCR反應(yīng)的終擴(kuò)增產(chǎn)物,,因此用此終點(diǎn)法對PCR產(chǎn)物定量存在不可靠之處,。在real-timeQ-PCR中,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時的監(jiān)測和連續(xù)地分析擴(kuò)增相關(guān)的...
在凈化車間內(nèi)工作的人員應(yīng)穿著符合要求的工作服,。工作服的選材,、式樣及穿戴方式應(yīng)與生產(chǎn)操作和空氣潔凈度級別要求相適應(yīng),并不得混用,。潔凈工作服的質(zhì)地應(yīng)光滑,、不產(chǎn)生靜電、不脫落纖維和顆粒性物質(zhì),。無菌工作服必須包蓋全部毛發(fā),、胡須及腳部,并能阻留人體脫落物,。不同空氣潔凈度級別使用的工作服應(yīng)當(dāng)分別清洗,、整理,必要時消毒或滅菌,。工作服洗滌,、滅菌時不應(yīng)帶入附加的顆粒物質(zhì)。工作服應(yīng)制定清洗周期,。進(jìn)入各個區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行,,不同的工作區(qū)域使用不同的工作服(例如不同的顏色)。工作人員離開時,,不得將工作服帶出,。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立、執(zhí)行人員進(jìn)出潔凈區(qū)的清潔程序和管理制度,,人員清潔程序合理,。實(shí)驗(yàn)室需要至少配備兩...
它能降解特異性熒光記探針,因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能,。(2)此后熒光雙標(biāo)記探針的運(yùn)用使在一密閉的反應(yīng)管中能實(shí)時地監(jiān)測反應(yīng)全過程,。這兩個發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展導(dǎo)致real-timeQ-PCR方法在研究工作中的運(yùn)用。PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)方式增加的,,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)方式生成模板,從而進(jìn)入平臺期,。在傳統(tǒng)的PCR中,,常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測PCR反應(yīng)的終擴(kuò)增產(chǎn)物,因此用此終點(diǎn)法對PCR產(chǎn)物定量存在不可靠之處,。在real-timeQ-PCR中,,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時的監(jiān)測和連續(xù)地分析擴(kuò)增相關(guān)的...
儀器制冷部件可以在完成擴(kuò)增后降溫至4℃,保存樣品過夜,。缺點(diǎn):管內(nèi)反應(yīng)液溫度比鋁塊顯示溫度滯后,;須使用特制且與鋁塊凹孔形狀緊密吻合的薄壁耐熱反應(yīng)管,;變溫時難以快速克服鋁塊的熱容量;壓縮機(jī)制冷啟動慢,、重量大,、滯后時間長。2.水浴式PCR儀儀器本身有3個不同溫度的水浴,,用機(jī)械裝置將帶有反應(yīng)管的架子移位和升降溫度,,使溫度循環(huán)。優(yōu)點(diǎn):水為傳熱介質(zhì),,溫度易恒定,,熱容量大;反應(yīng)管形狀無特殊要求,,溫度轉(zhuǎn)換較快擴(kuò)增效果穩(wěn)定,;具有較高的運(yùn)行效率,擴(kuò)增產(chǎn)物特異性好,。缺點(diǎn):高溫浴不穩(wěn)定,,水面需用液體石蠟覆蓋;改變水浴溫度所需時間較長,,不易實(shí)施復(fù)雜程序(如套式PCR)的操作,,儀器體積較大;室溫影響溫度下限,。...
原位PCR儀:用于從細(xì)胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細(xì)胞內(nèi)基因擴(kuò)增儀稱作原位PCR儀,。如病源基因在細(xì)胞的位置或目的基因在細(xì)胞內(nèi)的作用位置等。是保持細(xì)胞或組織的完整性,,使PCR反應(yīng)體系滲透到組織和細(xì)胞中,,在細(xì)胞的靶DNA所在位置上進(jìn)行基因擴(kuò)增。不但可以檢測到靶DNA,,又能標(biāo)出靶序列在細(xì)胞內(nèi)的位置,,對于在分子和細(xì)胞水平上研究疾病的發(fā)病機(jī)理和臨床過程及病理的轉(zhuǎn)變有重大的實(shí)用價值。主要應(yīng)用于臨床,、科研,。原位PCR儀,主要應(yīng)用于:檢測外源性基因片段,提高檢出率,,集中在病毒的檢查上,,如HIV、HPV,、HBV,、CMV等,;觀察病原體在體內(nèi)分布規(guī)律;內(nèi)源性基因片段,,如人體的單基因病,、重組基因、易位的染色體,、Ig的mR...
1988年初,,Keohanog改用T4DNA聚合酶進(jìn)行PCR,,其擴(kuò)增的DN段很均一,真實(shí)性也較高,,只有所期望的一種DN段,。但每循環(huán)一次,仍需加入新酶,。1988年Saiki等從溫泉中分離的一株水生嗜熱桿菌thermusaquaticus中提取到一種耐熱DNA聚合酶,。此酶具有以下特點(diǎn):①耐高溫,在70℃下反應(yīng)2h后其殘留活性大于原來的90%,,在93℃下反應(yīng)2h后其殘留活性是原來的60%,,在95℃下反應(yīng)2h后其殘留活性是原來的40%。②在熱變性時不會被鈍化,,不必在每次擴(kuò)增反應(yīng)后再加新酶,。③提高了擴(kuò)增片段特異性和擴(kuò)增效率,增加了擴(kuò)增長度,。由于提高了擴(kuò)增的特異性和效率,,因而其靈敏性也提高。為與大腸桿...
普通PCR儀:一次PCR擴(kuò)增只能運(yùn)行一個特定退火溫度的PCR儀稱作傳統(tǒng)PCR儀,,也叫普通PCR儀,。如果要做不同的退火溫度需要多次運(yùn)行。主要是用于簡單的,、對目的基因退火溫度的擴(kuò)增,。該儀器主要應(yīng)用于科學(xué)研究、教學(xué),、醫(yī)學(xué)臨床,、檢驗(yàn)檢疫等機(jī)構(gòu)。 梯度PCR儀:一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度,,通常有12種溫度梯度)的PCR儀稱作梯度PCR儀,。因?yàn)楸粩U(kuò)增的不同DN段,其適退火溫度是不同的,通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增,,從而一次性PCR擴(kuò)增,,就可以篩選出表達(dá)量高的適退火溫度,進(jìn)行有效的擴(kuò)增,。用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增,,這樣節(jié)約成本的同時也節(jié)約了時間。梯度P...