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無血清快速細胞凍存液凍存細胞復蘇方法:1,、從冰箱里取出細胞冷凍保存管,,立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍。2,、待凍存管中細胞混合液完全融化后,,立即加入1ml細胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細胞混合,再將細胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細胞培養(yǎng)基的試管中,,混合均勻,。3,、離心收集培養(yǎng)細胞(參考離心條件:1,000~2,000rpm,,4℃,3~5min),,移去上清液,。4,、清洗細胞,充分洗凈殘留凍存液,。5,、加入適量的新鮮細胞培養(yǎng)基,使用移液管緩緩地均勻細胞混合液,。適量地稀釋后,,將細胞混合液移至事先準備好的培養(yǎng)瓶中。6,、鏡檢后,,研究者可根據各自方法和需要來進行細胞培養(yǎng)。一些保護劑,,易于穿透細胞,,避免細胞內部水分子形成冰晶損傷細胞。天津無血清細胞凍存液產品介紹
細胞凍存中的注意事項:細胞凍存開始時,,要溫好相應的培養(yǎng)基和相應的試劑,,以及計數耗材,避免操作過程中手忙腳亂,。用移液管吹打相應的胞液時,,要保證移液管在液面以下吹打,管內要有液體,,防止產生相應的氣泡,,氣泡的張力會影響細胞的活率和生存狀態(tài)。計數細胞時要保證取胞液時也要混勻,,這個過程比較重要,,細胞不混勻,計數不準,,此外吹打應該輕柔,,避免細胞在吹打的過程中出現了相應的死亡。凍存離心用50ml離心管比較好,,加凍存液吹打混勻比較方便,,離心后不能過多地晃動離心管。當離心管液體較多的時候,,可以直接傾倒,,不要磕,多余的液體較好用泵吸出比較好,。凍存支數少的情況,,用泵頭輕柔吹打,避免出現氣泡,,凍存支數多用移液管吹打,。蘇州正規(guī)無血清細胞凍存液直銷價無血清細胞凍存液:2-8℃即可穩(wěn)定保存,,無需冷凍,即取即用,。
細胞凍存注意事項:1,、從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養(yǎng)細胞都可以用于凍存,但為對數生長期細胞,。在凍存前一日換一次培養(yǎng)液;2,、將凍存管放入液氮容器或從中取出時,要做好防護工作,,以免凍壞;3,、凍存和復蘇用新配制的培養(yǎng)液。4,、取細胞的過程中注意帶好防凍手套,,護目鏡。此項特別重要,,細胞凍存管可能漏入液氮,,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導致炸列,。凍存液產品針對細胞凍存的特殊配方,,能較大降低細胞在凍存過程中冰晶對于細胞的損傷,有效提高細胞復蘇率和活力,。
無血清凍存液通用于各種動物細胞株(tumour細胞和常規(guī)細胞),,凍存細胞可在-80℃長期保存(>5年)。配方成分明確,,不含動物來源性蛋白,,不含血清,可減少各類細菌,、病毒和支原體等污染,,保證凍存細胞的安全。該凍存液含DMSO,、葡萄糖等各種細胞營養(yǎng)成分,,提高細胞存活率和活力,亦適合于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞,。該產品添加了細胞沉降穩(wěn)定劑,,可延緩細胞在凍存過程中的沉降速率,防止細胞互相擠壓,,影響細胞凍存效果,。另外,添加了細胞膜保護劑,、滲透性細胞膜內保護劑,、非滲透性細胞保護劑等多種冷凍保護劑,這些成分在溶液中同水分子結合,,發(fā)生水合作用,,弱化水的結晶過程使溶液的粘性增加從而少冰晶的形成,能較大降低細胞在凍存過程中冰晶對于細胞的損傷,,有效提高細胞復蘇存活率,。該產品配方成分明確,不含血清,、不含動物源性蛋白,,可減少各類細菌、病毒和支原體等污染,,保證凍存細胞的安全,;不光適用于常規(guī)細胞系、原代細胞,,同時亦適合于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞,。無血清凍存液用途:無血清細胞凍存液用于免疫細胞及干細胞的存儲。
無血清細胞凍存液與含血清細胞凍存液對比:傳統(tǒng)的細胞凍存液是使用培養(yǎng)基,、血清和DMSO按照一定的比例混合,,其中DMSO的含量是10%,血清的含量是10%,,統(tǒng)稱為含血清細胞凍存液,。含血清細胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法,如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,,然后移至-20℃冰箱30分鐘,,再移至-80℃冰箱保存16-18個小時(或隔夜),較后才移至液氮罐中進行長期的儲存,??梢姡寮毎麅龃嬉簝龃婕毎麜r遇到的問題:1.凍存細胞時需現配凍存液(如購買市面上通用的含血清細胞凍存液,,此步可省略),。2.需要程序降溫(4℃→-20℃→-80℃→液氮),步驟繁瑣,,耗時耗力,。3.含血清,細胞污染(病毒,、霉菌和支原體等)的風險更高,。4.血清批次、品質間差異導致凍存液的批次間差異,。5.需液氮凍存,,且不能原位(如孔板)凍存,。無血清細胞凍存液用于T淋巴細胞、NK細胞等免疫細胞的存儲,。南昌無血清細胞凍存液供應商
無血清凍存液特性:適合無血清培養(yǎng)細胞與含血清培養(yǎng)細胞,。天津無血清細胞凍存液產品介紹
胞冷凍保存方法:選擇凍存處于對數生長期的細胞有助于提高復蘇細胞存活率。1.按照常用方法收集懸浮細胞或貼壁細胞于試管中,。2.按照培養(yǎng)細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數,。(參考:5×105至5×106 cells/ml)。3.取相當于所需細胞數的細胞懸浮液量,,置于離心管中,,離心收集培養(yǎng)細胞(參考離心條件:1,000~2,000 rpm,4℃,,3~5 min),。移去離心管中的上清液。4.加入適量的無血清型細胞凍存液于離心管中,,使細胞濃度為5×105至5×106 cells/ml,。緩慢地混合均勻,制成細胞混合液,。5.將離心管中的細胞混合液分裝于已標示完全的冷凍保存管中,。6.直接將含細胞混合液的凍存管放入-80℃冰箱,長期冷凍保存,。7.若研究者需要液氮保存時,,可將完全凍結的凍存管(放入-80℃冰箱后至少一晝夜)移至-196℃液氮罐。天津無血清細胞凍存液產品介紹