外泌體,,是一種能被大多數(shù)細胞分泌的微小膜泡,具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),,直徑大約40-100nm,。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn),但人們一直認(rèn)為它只是一種細胞的廢棄物,。然而較近幾年,,人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細胞特異的蛋白、脂質(zhì)和核酸,,能作為信號分子傳遞給其他細胞從而改變其他細胞的功能。這些發(fā)現(xiàn)點燃了人們對細胞分泌膜泡的興趣,。較近的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在很多生理病理上起著重要的作用,,如免疫中抗原呈遞、一些病癥的生長與遷移,、組織損傷的修復(fù)等,。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,。外泌體提?。狠^常見的過濾膜具有0.8μm、0.45μm或0.22μm的孔徑,。珠海正規(guī)外泌體提取試劑直銷廠家
外泌體(exosome),,特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。其主要來源于細胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中?,F(xiàn)已證實可以分泌外泌體的細胞有:肥大細胞、淋巴細胞,、樹突狀細胞,、瘤細胞、間充質(zhì)干細胞等,。外泌體在免疫中抗原呈遞,、瘤的生長與遷移,、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用。同時,,不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,。細胞外囊泡是蛋白質(zhì),、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,,根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,包括外泌體,、微泡和凋亡小體,。武漢外泌體提取試劑供應(yīng)商多聚物沉淀法早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,。
外泌體研究的主要應(yīng)用:外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型,,其可參與到機體免疫應(yīng)答、抗原提呈,、細胞遷移,、細胞分化、一些病癥侵襲等方方面面,。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細胞與基底細胞的遺傳信息的交換,,從而導(dǎo)致大量新生血管的生成,,促進了一些病癥的生長與侵襲,。一些病癥,。一些病癥轉(zhuǎn)移,。來自白血病干細胞的外泌體促進急性骨髓性白血病(AML)細胞的增殖,、遷移和壓制細胞凋亡,。治病靶標(biāo)。利用外泌體遞送小干擾RNA來沉默KRASG12D,,從而特異性高效靶向至胰腺病細胞,,以明顯降低RAS活化、病細胞增殖和轉(zhuǎn)移過程,。免疫,。β細胞將含有蛋白質(zhì)和miRNA的外泌體釋放到細胞外,并可轉(zhuǎn)移到其他代謝部位或免疫內(nèi)皮細胞,,有利于維持葡萄糖體內(nèi)平衡或造成胰島素抵抗,。心血管,。外泌體介導(dǎo)miR-155從平滑肌細胞轉(zhuǎn)移到內(nèi)皮細胞導(dǎo)致了內(nèi)皮細胞的損傷促進動脈硬化。分子標(biāo)記,。疾病診斷,。在酒精性肝病、NASH,、菌類性肝炎,、藥物性肝損傷和肝細胞病中發(fā)現(xiàn)循環(huán)EVs的水平上升
外泌體與肺病預(yù)后:在當(dāng)代精細醫(yī)療的大趨勢下,外泌體的發(fā)現(xiàn)和研究為肺病的早期診斷和治病提供了嶄新的方向,。外泌體在液體活檢中的巨大潛力可以為肺病患者的早期發(fā)現(xiàn)和早期診療提供可靠依據(jù),。根據(jù)一些病癥來源的外泌體在肺病的發(fā)生的發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移過程中的作用及相關(guān)機制的研究,臨床醫(yī)療人員可以針對不同的患者制定較合適的治病方案,,以達到改善肺病患者生存率,,延長肺病患者生存時間的目的。但是,,針對外泌體的研究還存在諸多的問題有待廣大研究者解決,,如:外泌體的純化及標(biāo)記方法、如何尋找外泌體的靶基因,、外泌體的作用機制及信號通路等,。總而言之,,外泌體的研究有著廣闊的前景,,基于外泌體與肺病的研究,有望研發(fā)出能夠應(yīng)用于肺病臨床診斷和治病的有效措施,,造福更多的患者,。外泌體的提取分離:超速離心法(差速離心)。
外泌體的提取方法:1,、磁珠免疫法,。外泌體表面有其特異性標(biāo)記物(如CD63、CD9蛋白),,用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,,即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高,、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,但是效率低,,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,,不利于下游實驗,難以普遍普及。2,、多聚物沉淀法,。聚乙二醇(PEG)為常用的多聚物,可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,,早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒,,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān),。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,,產(chǎn)生難以去除的聚合物,,機械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會破壞外泌體等外泌體提?。嚎捎糜谑占笥?00nm,、400nm或200nm的外泌體。溫州外泌體提取試劑價格
超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法,,由于離心步驟繁瑣,。珠海正規(guī)外泌體提取試劑直銷廠家
所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,,包括血液,、唾液、尿液,、腦脊液和乳汁中,。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應(yīng)功能的精確分子機制剛剛開始研究,。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,,參與細胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā),。1983年,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細胞中被發(fā)現(xiàn),,1987年Johnstone將其命名為“exosome”,。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中,。珠海正規(guī)外泌體提取試劑直銷廠家