鼠尾膠原實驗應(yīng)用：探討應(yīng)用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細(xì)胞膜片鉗實驗中的促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁效果。方法制作鼠尾膠原，觀察全細(xì)胞膜片鉗實驗中，自制的鼠尾膠原對前庭毛細(xì)胞的貼壁黏附作用,。結(jié)果無鼠尾膠原時，前庭毛細(xì)胞懸浮于外液，不宜封接,；有鼠尾膠原時，前庭毛細(xì)胞貼附于培養(yǎng)皿底壁,，易于封接和長時間（約8h)的觀察和記錄,。鼠尾膠原對前庭毛細(xì)胞具有良好的貼壁黏附促進(jìn)作用。結(jié)論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,，并且制作簡便，成本低廉,。酸法提取主要采用低離子濃度酸性條件浸漬處理原料,，從而破壞分子間的鹽鍵和希夫堿。金華南昌鼠尾膠原

鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用：膠原蛋白具有抗氧化作用,，但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進(jìn)細(xì)胞貼壁和支架構(gòu)建,，對于其抗氧化作用目前尚無相關(guān)研究。目的：探討鼠尾膠原對過氧化氫導(dǎo)致離體心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用,。方法：將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿（實驗組）和普通培養(yǎng)皿（對照組）中,，并且均用0，10,，100μmol/LH2O2誘導(dǎo),。24h后，以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細(xì)胞的形態(tài),，應(yīng)用MTT比色法檢測心肌細(xì)胞存活率,，TUNEL法檢測心肌細(xì)胞凋亡形態(tài)，流式細(xì)胞技術(shù)檢測心肌細(xì)胞凋亡率,，黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力,，硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平，Western-Blot檢測凋亡蛋白Bax,、Bcl-2的表達(dá),。石家莊正規(guī)鼠尾膠原單價鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基，它具有促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞（特別是上皮細(xì)胞）貼壁的作用。

膠原蛋白分離提純實驗方案：提取鼠尾膠原蛋白的實驗步驟：1,、使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對初步處理的鼠尾腱進(jìn)行酶解,，持續(xù)一段時間待混合物變成無色、透明,、粘稠液體后即可在4℃,，5000g的離心力下離心20min，收集上清即為粗制鼠尾膠原蛋白原液,。2,、將一定濃度的氯化鈉溶液加入其中，持續(xù)攪拌直至白色絮狀沉淀從溶液中析出,，繼續(xù)加入氯化銨直至沉淀不在析出為止,，4℃，5000g的離心力下離心20min后獲得白色沉淀,。沉淀物加入一定濃度的醋酸溶液中溶解,。3、將溶解后的鼠尾膠原蛋白溶液繼續(xù)反復(fù)進(jìn)行鹽析處理,，重復(fù)步驟2的過程2~4次,。_x005f_x000c_鼠尾膠原蛋白經(jīng)SDS-PAGE蛋白質(zhì)電泳。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,，并且制作簡便，成本低廉,。

一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血的優(yōu)點(diǎn)：1,、本發(fā)明制作的止血材料采用溫和的冷凍干燥操作工藝不光光提高了生產(chǎn)效率，同時避開了使用其他設(shè)備帶來的成本上升問題,。2,、本發(fā)明專利生產(chǎn)的止血材料(止血海綿)，其動物實驗表明其具有非常好的止血效果,。也可應(yīng)用于內(nèi)臟出血,。具有廣闊的應(yīng)用前景。3,、本發(fā)明制備的止血材料具有可完全被人體吸收,，與出血創(chuàng)面一接觸，其接觸面迅速形成凝膠而粘附在出血創(chuàng)面上,，外面則形成連續(xù)的壓迫干層,。啟動凝血因子,。同時,，聚乙烯醇為成膜材料，兩種的協(xié)同效應(yīng)形成了一種理想的止血狀態(tài)和結(jié)構(gòu)。膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同,。

利用鼠尾Ⅰ型膠原構(gòu)建與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料,。方法通過醋酸酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白，并重構(gòu)成膠原纖維,。然后,，將重構(gòu)后的膠原纖維放置在礦化液中模仿骨生物礦化2～6d，通過透射電子顯微鏡和電子衍射觀察骨生物礦化,。結(jié)果酸解提取的鼠尾Ⅰ型膠原蛋白能夠重構(gòu)成膠原纖維,，并且具有特征性的D-Band結(jié)構(gòu)。透射電子顯微鏡和電子衍射顯示：礦化2d后,，羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維,，膠原纖維部分礦化；礦化6d后,，膠原纖維內(nèi)部完全礦化,，形成Ⅰ型膠原蛋白/羥基磷灰石鈣的仿生骨材料。結(jié)論利用酸解法提取的鼠尾Ⅰ型膠原蛋白可以重構(gòu)成膠原纖維,，經(jīng)礦化可形成與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)一致的仿生骨材料,。制備鼠尾膠原：取大鼠尾巴洗凈，75%酒精浸泡5分鐘,。北京正規(guī)鼠尾膠原價格

鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用,。金華南昌鼠尾膠原

使用方法：1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被：以包被濃度為2μg/cm2為例,，用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL,。加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中，確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面,。開蓋在超凈臺上過夜晾干,，也可以在室溫放置1小時后，用PBS洗3~4次后直接使用,。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個月以上的時間,。2、三維膠原凝膠的制備：A,、無細(xì)胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）將200μL本品加到置于冰浴的離心管中,，加入690μL雙蒸水，然后加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻。再加入100μL10×PBS或10×培養(yǎng)液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要測定pH值）。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡,。金華南昌鼠尾膠原