細胞凍存經(jīng)驗談:選對凍存培養(yǎng)基才是王道：研究人員經(jīng)常需要冷凍細胞并保存,，以供后續(xù)實驗或臨床使用,?；具^程相當(dāng)簡單：慢慢冷凍細胞,，將凍存管放入液氮中,，并在需要時快速解凍,。凍存培養(yǎng)基能支持細胞并防止冰晶形成,。不過,，Malfavon的體驗告訴我們,，使用不同的凍存培養(yǎng)基，結(jié)果那可是大不同,。一些經(jīng)驗老道的研究人員自己制備凍存培養(yǎng)基,。不過，那些面對脆弱細胞（比如原代和多能細胞）的研究人員,，則更喜歡購買標(biāo)準(zhǔn)化的商業(yè)產(chǎn)品,。一些非常敏感的細胞系也許能從添加物中受益，以避免細胞在解凍時凋亡,。PH,，電解質(zhì)等的改變，進而促使細胞死亡,。金華正規(guī)無血清細胞凍存液

細胞凍存是細胞保存的主要方法之一,。利用凍存技術(shù)將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來,，這樣在需要的時候再復(fù)蘇細胞用于實驗,。而且適度地保存一定量的細胞,，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用,。除此之外,，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈,、交換和運送某些細胞,。細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低,，加之在緩慢凍結(jié)條件下,，細胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成,，從而避免細胞損傷,。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活,。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開始為-1到-2℃/min,，當(dāng)溫度低于-25℃時可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃),。唐山無血清細胞凍存液廠家現(xiàn)貨在冰袋附近操作時,，低溫避免保護劑對細胞造成損傷。

使用方法：1)細胞超凈臺無菌環(huán)境,，1.5mlEP管內(nèi)加入細胞混懸劑均勻混懸細胞,，細胞終濃度為5×106個/ml，混懸液體積為200μl,。細胞凍存劑冰水混合物中預(yù)冷,，逐滴加入細胞凍存劑800μl，細胞混懸劑與細胞凍存劑的體積比控制在1:4,。2)開啟程序性降溫,，降溫速率為1℃/min，較后降溫至-80℃以下進行凍存,。將比較例1凍存后細胞的復(fù)蘇率與實施例5凍存后細胞的復(fù)蘇率進行對比,，具體結(jié)果如附圖1所示，可見采用本發(fā)明的凍存方法能夠明顯提高細胞的復(fù)蘇率,。其他實施例通過與比較例1進行比較,，也得到相同的試驗結(jié)果。本發(fā)明的凍存方法不僅可以明顯提高凍存后細胞復(fù)蘇率,，同時還可減少不同批次細胞凍存復(fù)蘇率不穩(wěn)定,、以及避免由血清中的支原體，細菌,，朊細菌及其他細菌顆粒引發(fā)的污染,。

細胞凍存中的注意事項：細胞凍存開始時,，要溫好相應(yīng)的培養(yǎng)基和相應(yīng)的試劑，以及計數(shù)耗材,，避免操作過程中手忙腳亂,。用移液管吹打相應(yīng)的胞液時，要保證移液管在液面以下吹打,，管內(nèi)要有液體,，防止產(chǎn)生相應(yīng)的氣泡，氣泡的張力會影響細胞的活率和生存狀態(tài),。計數(shù)細胞時要保證取胞液時也要混勻,，這個過程比較重要，細胞不混勻,，計數(shù)不準(zhǔn),，此外吹打應(yīng)該輕柔，避免細胞在吹打的過程中出現(xiàn)了相應(yīng)的死亡,。凍存離心用50ml離心管比較好,，加凍存液吹打混勻比較方便，離心后不能過多地晃動離心管,。當(dāng)離心管液體較多的時候,，可以直接傾倒，不要磕,，多余的液體較好用泵吸出比較好,。凍存支數(shù)少的情況，用泵頭輕柔吹打,，避免出現(xiàn)氣泡,，凍存支數(shù)多用移液管吹打。細胞凍存是細胞培養(yǎng)技術(shù)中細胞進行保種并長期保存的常用方法,。

如何提高細胞凍存成功率：無菌,！無菌！無菌,！要折騰嬌貴的細胞寶寶,，必須要在無菌超凈環(huán)境下才行。超凈工作臺,，所有的儀器用品提前滅菌,，培養(yǎng)箱什么的定期用酒精擦干凈。微生物污染對細胞的影響經(jīng)常是開始的時候沒發(fā)現(xiàn),，發(fā)現(xiàn)的時候已經(jīng)結(jié)束了,，所以千萬要小心。除了操作中的各種小細節(jié)，還有一個實驗雷區(qū),，就是配制細胞凍存液,。常見的凍存液配制要遵循培養(yǎng)基+血清+DMSO的成分要求，根據(jù)細胞實際判斷成分配比,，還建議使用程控儀,，注意配制溫度，一個不小心就又會影響細胞的存活效果,。隨著細胞凍存數(shù)量增加,，凍存流程簡化也成為必然趨勢，因此無血清非程序降溫凍存液應(yīng)運而生,。上海無血清細胞凍存液產(chǎn)品介紹

無血清細胞凍存液的優(yōu)勢：無需程序降溫,，可直接放置-80℃凍存，操作簡單,。金華正規(guī)無血清細胞凍存液

細胞凍存,，我們應(yīng)該注意哪些事項：1、液氮內(nèi)的細胞凍存較長時間不要超過半年,，凍存在液氮中的細胞應(yīng)一段時間內(nèi)進行更替,。一個細胞系在培養(yǎng)一個月后，可復(fù)蘇一管新的細胞確保其質(zhì)量沒有發(fā)生太大變化,，傳代幾次后,，再凍存留種。2,、細胞復(fù)蘇時，為保證獲得較高的存活率和接種率,，應(yīng)盡可能的快速完成復(fù)蘇,，以避免在升溫過程中細胞內(nèi)部晶體的產(chǎn)生。書面介紹的復(fù)蘇溫度是37℃-42℃,，但是本人在實際操作中發(fā)現(xiàn)40℃環(huán)境下復(fù)蘇效果較好,。3.復(fù)蘇時使用的培養(yǎng)基和凍存時使用的培養(yǎng)基中的血清盡量保證同一批次。金華正規(guī)無血清細胞凍存液