細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時候轉(zhuǎn)染效率低下,，還要考慮會不會存在試劑過期的情況。毛博當(dāng)年做轉(zhuǎn)染整整半年，百思不得其解,。較后發(fā)現(xiàn),，原來是Lipofectamine2000過期了。換了之后,，立馬成功,。根據(jù)我的經(jīng)驗，盡量使用開封半年內(nèi)的,，因為過了半年后,，就算沒有過失效期，但是細(xì)胞毒性較大增加,，而轉(zhuǎn)染效率卻較大下降,。千萬不要為了省錢，影響實驗進(jìn)度哈,。2.未加血清轉(zhuǎn)染后未及時加入血清,，會導(dǎo)致細(xì)胞大量死亡。一般要在轉(zhuǎn)染后的4-6小時換液且換為有血清的培養(yǎng)基,。根據(jù)毛博的經(jīng)驗,，其實也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴加血清。這個時候,，較好不要換液,，不要打擾細(xì)胞，讓它安安靜靜地休息,。但是也不能過早加入血清,。過早的話，會引起未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞瘋狂生長,。建議選擇50%~80%區(qū)間密度進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染,。北京細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑報價

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗簡介：實驗原理外源基因進(jìn)入細(xì)胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質(zhì)體介導(dǎo)法和細(xì)菌介導(dǎo)法,。電擊法是在細(xì)胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質(zhì)粒進(jìn)入;磷酸鈣法和脂質(zhì)體法是利用不同的載體物質(zhì)攜帶質(zhì)粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進(jìn)入細(xì)胞;細(xì)菌法是利用包裝了外源基因的細(xì)菌傳染細(xì)胞的方法使得其進(jìn)入細(xì)胞,。但是由于電擊法和磷酸鈣法的實驗條件控制較嚴(yán)、難度較大;細(xì)菌法的前期準(zhǔn)備較復(fù)雜,、而且可能對于細(xì)胞有較大影響;所以現(xiàn)在對于很多普通細(xì)胞系,，一般的瞬時轉(zhuǎn)染方法多采用脂質(zhì)體法南昌細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑價格有血清時的轉(zhuǎn)染 血清一度曾被認(rèn)為會降低轉(zhuǎn)染效率。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染那些事兒：1.設(shè)置陰性和陽性對照：一般在轉(zhuǎn)染后24-48h,靶基因即在細(xì)胞內(nèi)表達(dá),?？梢罁?jù)不同的實驗?zāi)康模?4-48h后即可進(jìn)行靶基因表達(dá)的檢測等實驗。2.轉(zhuǎn)染后效率的檢測方法：觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞熒光情況,；qPCR驗證,；WB檢測敲減或過表達(dá)蛋白,。3.轉(zhuǎn)染效率低，可采取以下兩種方法：1)復(fù)轉(zhuǎn)染,，即轉(zhuǎn)染后12-24h再進(jìn)行轉(zhuǎn)染,，前提是該細(xì)胞對脂質(zhì)體的耐受性較好，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞死亡數(shù)較少,。2)通過藥篩來殺死未轉(zhuǎn)入成功的細(xì)胞，前提是該質(zhì)粒帶有物品抗性的基因,。4.電轉(zhuǎn)時,，不同的細(xì)胞需要的電壓是不一樣的，需要做預(yù)實驗,，摸索較佳條件,。對于大多數(shù)細(xì)胞而言，較佳電壓位于250-1250v/cm,。電擊后,，應(yīng)該將DNA和細(xì)胞混合液在室溫下放置10min,使細(xì)胞恢復(fù)損傷。

影響轉(zhuǎn)染試驗的因素：細(xì)胞狀態(tài)變化：（1）轉(zhuǎn)染試劑與細(xì)胞不匹配細(xì)胞轉(zhuǎn)染較適合的不是原代細(xì)胞,，也不是傳代很多次的細(xì)胞,。這是因為細(xì)胞培養(yǎng)在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化,。這會導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化,。較適合轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是經(jīng)過幾次傳代后達(dá)到對數(shù)生長期的細(xì)胞，細(xì)胞生長旺盛,，較容易轉(zhuǎn)染,。（2）把握時機沒錯！轉(zhuǎn)染也有適當(dāng)?shù)臅r機,，相比較非分裂細(xì)胞——分裂細(xì)胞往往要比靜止細(xì)胞更易于攝取并表達(dá)外源DNA,。因此對大多數(shù)轉(zhuǎn)染操作而言，細(xì)胞都在轉(zhuǎn)染當(dāng)天或前現(xiàn)在種板,。同樣重要的是細(xì)胞在種板進(jìn)行轉(zhuǎn)染時不應(yīng)處于過度生長的狀態(tài),，如細(xì)胞數(shù)量過多，互相疊加,，營養(yǎng)物質(zhì)耗竭,，代謝廢物積聚，轉(zhuǎn)染率低下也是很正常的,！對于貼壁細(xì)胞,，一般要求在轉(zhuǎn)染前一日，用胰酶處理為單細(xì)胞懸液,。

轉(zhuǎn)染的注意事項：用于蛋白生產(chǎn)的細(xì)胞的轉(zhuǎn)染可以在添加有血清或無血清培養(yǎng)基中進(jìn)行,。但更傾向于使用無血清培養(yǎng)基表達(dá)蛋白,，因為血清蛋白會干擾下游表達(dá)蛋白的純化。無血清培養(yǎng)基一般針對某一特定細(xì)胞類型優(yōu)化并有幾類無血清培養(yǎng)基不需要添加血清,，一般含有不均一的或大量的蛋白（但比添加血清的培養(yǎng)基低得多）,。無蛋白培養(yǎng)基不含蛋白但可能含有不明成分的抽提物，限定化學(xué)成分的培養(yǎng)基不含有蛋白或未知組成的成分,。多種多樣的配方使您可以選擇較適合您應(yīng)用的一種,。在含血清時轉(zhuǎn)染的細(xì)胞可以適應(yīng)無血清培養(yǎng)基，無蛋白培養(yǎng)基或限定化學(xué)成分的培養(yǎng)基,。在部分情況下（如293-F,，293-H，COS-7和CHO-S）,，對于已適應(yīng)無血清或無蛋白培養(yǎng)基的細(xì)胞,，可以使用其培養(yǎng)基進(jìn)行轉(zhuǎn)染。其他一些無血清培養(yǎng)基包含克制陰離子脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染的成分,，在這些情況下,，有必要在諸如D-MEM或OPTI-MEMⅠ等培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染必須通過對藥物的抗性篩選進(jìn)行擴增或通過表型變化進(jìn)行鑒定。開封細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷廠家

瞬時表達(dá)分析檢測未重組質(zhì)粒DNA上基因的表達(dá),。北京細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑報價

轉(zhuǎn)染的注意事項：培養(yǎng)基中的物品物品,，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物,。這些物品一般對于真核細(xì)胞無毒,，但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性，使物品可以進(jìn)入細(xì)胞,。這降低了細(xì)胞的活性,，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。所以,，在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用物品,，甚至在準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染前進(jìn)行細(xì)胞鋪板時也要避免使用物品。這樣,，在轉(zhuǎn)染前也不必潤洗細(xì)胞,。對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素,，因為這些物品是GENETICIN選擇性物品的競爭性克制劑,。北京細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑報價