外泌體的提取方法:1.超速離心法(差速離心),。超離法是較常用的外泌體純化手段,采用低速離心,、高速離心交替進行,,可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,,但過程比較費時,且回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類型有關),,純度也受到質(zhì)疑,;此外,重復離心操作還有可能對囊泡造成損害,,從而降低其質(zhì)量,。2.密度梯度離心。在超速離心力作用下,,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,,是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心,,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,,耗時,,對離心時間極為敏感。外泌體是一種能被機體內(nèi)大多數(shù)細胞分泌的直徑大約為30~150nm的具有脂質(zhì)雙層膜的微小膜泡,。深圳外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹
外泌體研究的主要應用:外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型,,其可參與到機體免疫應答、抗原提呈,、細胞遷移,、細胞分化、一些病癥侵襲等方方面面,。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細胞與基底細胞的遺傳信息的交換,,從而導致大量新生血管的生成,促進了一些病癥的生長與侵襲。一些病癥,。一些病癥轉(zhuǎn)移,。來自白血病干細胞的外泌體促進急性骨髓性白血病(AML)細胞的增殖,、遷移和壓制細胞凋亡,。治病靶標。利用外泌體遞送小干擾RNA來沉默KRASG12D,,從而特異性高效靶向至胰腺病細胞,,以明顯降低RAS活化、病細胞增殖和轉(zhuǎn)移過程,。免疫,。β細胞將含有蛋白質(zhì)和miRNA的外泌體釋放到細胞外,并可轉(zhuǎn)移到其他代謝部位或免疫內(nèi)皮細胞,,有利于維持葡萄糖體內(nèi)平衡或造成胰島素抵抗,。心血管。外泌體介導miR-155從平滑肌細胞轉(zhuǎn)移到內(nèi)皮細胞導致了內(nèi)皮細胞的損傷促進動脈硬化,。分子標記,。疾病診斷。在酒精性肝病,、NASH,、菌類性肝炎、藥物性肝損傷和肝細胞病中發(fā)現(xiàn)循環(huán)EVs的水平上升,。預后標志,。溫州正規(guī)外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家外泌體提?。焊鶕?jù)外泌體的大小,,從蛋白質(zhì)和其他大分子中分離外泌體。
外泌體(exosome),,特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡,。其主要來源于細胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中?,F(xiàn)已證實可以分泌外泌體的細胞有:肥大細胞,、淋巴細胞、樹突狀細胞,、瘤細胞,、間充質(zhì)干細胞等。外泌體在免疫中抗原呈遞,、瘤的生長與遷移,、組織損傷的修復等生理病理上起著重要的作用。同時,,不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,,可作為疾病診斷的生物標志物,。細胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA,、miRNA和脂質(zhì)運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,,根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,包括外泌體,、微泡和凋亡小體,。
外泌體項目獲批學科方向:從統(tǒng)計來看,與前年相似外泌體立項集中的領域還是一些病癥學,,近年來外泌體發(fā)表的文章也絕大部分與其在一些病癥的形成,,耐藥性,檢測等方面有關,。例如2019年發(fā)表在MolecularCancer(IF=10.679)上的文章表明外泌體FMR1-AS1通過TLR7/NFκB/c-My信號通路在女性食管ai中促進維持ai癥干細胞樣細胞的動態(tài)平衡,。發(fā)表在JournalofExperimental&ClinicalCancerResearch(IF=5.646)上的一篇文章發(fā)現(xiàn)外泌體轉(zhuǎn)運p-STAT3可促進結直腸ai細胞獲得性5-FU耐藥性。發(fā)表在Cancers(IF=6.162)上的一篇文章則研究了腹腔灌洗液中細胞外囊泡相關的miRNA作為子宮內(nèi)膜ai分子標志物的可能性,。此外,,在神經(jīng)系統(tǒng)和精神疾病,中醫(yī)學及其他領域也有不少外泌體相關項目中標,。來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。
外泌體提?。?,、過濾。超濾膜也可用于分離外泌體,。根據(jù)外泌體的大小,,從蛋白質(zhì)和其他大分子中分離外泌體。較常見的過濾膜具有0.8μm,、0.45μm或0.22μm的孔徑,,可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌體,,也有設計成微柱多孔硅纖毛結構以分離40-100nm外泌體:不過,,該方法由于過濾膜的粘附,可能會損失外泌體,,并且過濾時的壓力和剪切力,,可能會使外泌體變形受損。2,、基于聚合物的沉淀技術,。基于聚合物的沉淀技術通常包括將樣本與含聚合物的沉淀溶液混合,在4℃溫育并低速離心,。用于聚合物沉淀的較常見聚合物之一是聚乙二醇(PEG),。用這種聚合物沉淀具有許多優(yōu)點,包括對分離的外泌體影響小,、pH中性等,。目前大多數(shù)快速分離外泌體的商品化試劑盒都是基于此方法。然而基于聚合物的沉淀方法可能會同時分離非囊泡污染物(包括脂蛋白)而且,,聚合物材料的混雜可能會影響下游分析,。外泌體在免疫中抗原呈遞、一些病癥的生長與遷移,、組織損傷的修復等生理病理上起著重要的作用,。貴陽外泌體提取試劑單價
同時對超速離心機的設備要求以及操作程序的培訓較大提高了提取成本。深圳外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹
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