鼠尾Ⅰ型膠原:選擇適當(dāng)?shù)墓切迯?fù)材料是治好骨缺損的中心環(huán)節(jié),。目前,,臨床上常用的有人工骨移植,、自體骨移植和同種異體骨移植,。其中,,人工骨材料多為磷酸三鈣,、半水硫酸鈣等含有鈣和磷的無機礦物材料[1-2],,由于不含自體骨組織中的有機大分子Ⅰ型膠原蛋白,,其臨床療效遠遠低于自體骨組織,。但是,,自體骨移植和同種異體骨移植均來源于人類自身骨組織,數(shù)量有限,,難以滿足臨床需要,。因此,,研發(fā)與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料,,成為全世界骨組織工程學(xué)者孜孜以求的目標,。由于天然骨組織是Ⅰ型膠原蛋白和羥基磷灰石鈣生物礦化的產(chǎn)物,,在分子結(jié)構(gòu)上,,羥基磷灰石鈣晶體是以Ⅰ型膠原纖維為模板,,呈片狀鑲嵌在膠原纖維分子間隙,沿著膠原纖維的長軸縱向礦化生長,。本研究仿生天然骨組織的分子結(jié)構(gòu),,酸解提取鼠尾肌腱的Ⅰ型膠原蛋白,,重構(gòu)形成Ⅰ型膠原纖維,然后將Ⅰ型膠原纖維放置在礦化液中模擬人體內(nèi)骨生物礦化,,通過透射電子顯微鏡(TEM)和電子衍射觀察羥基磷灰石鈣晶體在膠原纖維內(nèi)部的骨生物礦化,。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,,并且制作簡便,,成本低廉。一種基于鼠尾膠原蛋白:根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,。鼠尾膠原報價
鼠尾膠原:1實驗制備:實驗設(shè)備及材料:大鼠尾巴、剪刀,、鑷子、止血鉗,、彎頭吸管、平皿,、三角燒瓶、燒杯,、量筒,、天平、生理鹽水,、75%酒精、0.1%醋酸溶液,、蓋玻片、培養(yǎng)瓶,、鉆石筆,、鼠尾膠原。實驗內(nèi)容:1,、制備鼠尾膠原(兩個同學(xué)一組操作)。2,、切割小玻片,。3、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi),。實驗步驟:制備鼠尾膠原:1、取大鼠尾巴洗凈,,75%酒精浸泡5分鐘;2,、手持尾巴,用止血鉗夾住鼠尾的較高,,折斷尾骨后拉出尾腱;3,、將尾腱剪斷置于平皿中,生理鹽水浸泡,;4、重復(fù)步驟2,、3,,直至尾腱量夠用;5,、吸去生理鹽水,將尾腱稱重(0.5-1克),。蕪湖正規(guī)鼠尾膠原廠家推薦利用鼠尾膠原可以構(gòu)建類似物,該模型是進行皮膚部位型培養(yǎng)和制作復(fù)合皮的關(guān)鍵與基礎(chǔ),。
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上,,pH左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml,。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,,在成膠過程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液(均需要無菌,、預(yù)冷)10mg/L酚紅用于pH指示)0.1mol/LNaOH,,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,,加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié))立即混勻,。再加入100ul10PBS10培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH左右,,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,,初次使用時需要用pH試紙測試)。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,,并且制作簡便,成本低廉,。
要準備的器具:組織剪2把,,有齒鑷1把,,無齒鑷1把,,200ml燒杯1個,培養(yǎng)皿1個,,帶蓋廣口瓶1個,離心管,、小瓶數(shù)個,滴管若干,。以上物品須經(jīng)嚴格高壓消毒滅菌,。需配制的液體0.1%醋酸溶液。經(jīng)44.48N10min高壓蒸汽滅菌(或是過濾除菌)后備用,。此外還有用消毒雙蒸水配制75%酒精溶液,。取大鼠尾巴,洗凈,,置75%酒精浸泡消毒后,手持尾巴,,用止血鉗夾住尾巴較高,,折斷尾骨后拉出尾腱,將尾腱剪碎后置消毒的三角燒瓶中,,稱尾腱的重量,,按每克尾腱50ml的比例加入0.1%醋酸溶液,搖晃,,使尾腱分散于醋酸溶液中,,4℃放置48小時,離心,。吸取其上清,,分裝至小瓶,4℃保存。上述制備過程均在無菌條件下完成,。制備鼠尾膠原:吸取上清,,分裝成小瓶,4℃保存,。
膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同,,每一條亞基形成一股左手旋轉(zhuǎn)的螺旋,其中每3個氨基酸殘基形成一圈螺旋,。3條左手螺旋再扭在一起形成一個右手大螺旋,。這樣的螺旋稱為3股螺旋。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內(nèi)部,。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃,,這些棒狀分子首尾相連,并側(cè)向排列形成膠原微絲(其直徑可從50埃至數(shù)千埃),。膠原分子在兩端及沿軸向每隔680埃的距離存在極性區(qū),,這些極性區(qū)能和重金屬離子結(jié)合,使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu),。鼠尾膠原蛋白是從老鼠尾巴提取出來的物質(zhì),。杭州重慶鼠尾膠原
在操作過程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存,,切勿凍存,,有效期一年。鼠尾膠原報價
鼠尾膠原包被培養(yǎng)板:胎干細胞在體外可誘導(dǎo)分化為血管內(nèi)皮細胞,進而形成血管,因而成為血管組織工程理想的種子細胞來源之一,。目的:探討建立定向誘導(dǎo)人胚胎干細胞向血管內(nèi)皮細胞分化的方法,。方法:在小鼠胚胎成纖維細胞飼養(yǎng)層上培養(yǎng)人胚胎干細胞H1,將H1細胞團塊轉(zhuǎn)移到鼠尾膠原包被的培養(yǎng)板,貼壁24-48h后,培養(yǎng)基換為含不同輔助因子和內(nèi)皮細胞生長添加劑的EGM-2內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基。結(jié)果與結(jié)論:①在EGM-2內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基誘導(dǎo)下,細胞逐步表達內(nèi)皮細胞特異性標記基因VEGFR-2,、PECAM1,、vWF、CD34,、VE-cadherin、GATA-2,。②分化細胞表達內(nèi)皮細胞特異性標記VE-cadherin,、CD31。③分化細胞具有吞噬低密度脂蛋白功能,。說明將人胚胎干細胞接種在鼠尾膠原包被培養(yǎng)板上,通過EGM-2內(nèi)皮培養(yǎng)體系誘導(dǎo),可直接分化為功能性血管內(nèi)皮細胞。為研究胞外基質(zhì)對誘導(dǎo)胚胎干細胞血管內(nèi)皮細胞分化的作用以及相關(guān)信號分子機制打下了基礎(chǔ),。鼠尾膠原報價