動物組織總RNA提?。?,、盡量選取新鮮的組織,,如果不是新鮮的(較好在三個月之內(nèi)-80℃冰箱或者在液氮中凍存的,。在剪取組織時,不要拿到室溫直接剪取,,一定要放到冰盒上,,盡量避免反復(fù)凍融。2,、用干凈的剪刀鑷子剪取一小塊組織,,剪取樣本時盡量剪組織中心的部位,或者先將大塊的組織先從中間切開,,然后再在新鮮切口的位置剪取樣本,。取下的組織要充分的剪碎,將剪碎的組織放到無RNA酶的EP管中,,加入裂解液,,剪碎的組織要充分接觸裂解液,準(zhǔn)備勻漿,。3,、正常組織選取綠豆粒大小(30~60mg)的組織進行勻漿,如果組織中含有大量的蛋白,、脂肪或者是緊密的纖維組織比如肝臟等,,適當(dāng)增減剪取組織的量(可選10~20mg)。4,、如果提取的是魚肌肉,,蝦肉,海蜇等含水分較多的組織時則應(yīng)當(dāng)適當(dāng)提高樣本量用量(推薦100~200mg),。5、條件允許的情況下,,動物組織使用高通道組織勻漿機勻漿后即可直接進行提取步驟,,如沒有該設(shè)備。6,、較后提取后得到的RNA一定要立即放到冰盒上,,以減少RNA的降解。β-巰基乙醇主要破壞RNase蛋白質(zhì)中的二硫鍵,。北京RNA提取試劑哪家便宜
RNA是核糖核酸,,是存在于生物細胞以及部分病菌、類病菌中的遺傳信息載體,。RNA是由核糖核苷酸經(jīng)磷酸二酯鍵縮合而成的長鏈狀分子,。一個核糖核苷酸分子則由磷酸,核糖和堿基構(gòu)成,。在細胞中,,根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同,RNA主要分三類,,即tRNA,、rRNA,以及mRNA,。mRNA是依據(jù)DNA序列轉(zhuǎn)錄而成的蛋白質(zhì)合成模板,;tRNA是mRNA上遺傳密碼的識別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運者;rRNA是組成核糖體的部分,,而核糖體是蛋白質(zhì)合成的機械,。細胞中還有許多種類和功能不一的小型RNA,可調(diào)節(jié)基因表達,。而其他如I,、II型內(nèi)含子、HDV,、核糖體RNA等等都有催化生化反應(yīng)過程的活性,,即具有酶的活性,這類RNA被稱為核酶,。溫州石家莊RNA提取試劑帶口罩,、帽子,,屏住呼吸、不說話,,帶乳膠手套并要時常更換,。
植物RNA提取過程:植物組織成分相對于動物組織來說復(fù)雜多樣,因此其RNA的分離和純化的難度也隨之加大,,如果要完美的數(shù)據(jù)結(jié)果,,那么提取純度高、完整性好的RNA就成了關(guān)鍵所在,。植物RNA的提取一般會經(jīng)歷以下幾個過程:1.破碎細胞壁,。2.裂解細胞膜。3.雜質(zhì)去除,,包括:DNA,、蛋白質(zhì)、多糖,、多酚,、次生代謝產(chǎn)物等。4.純化和濃縮RNA,。而在RNA提取過程中,,純化除雜的過程是影響RNA純度的關(guān)鍵所在。在完整的細胞內(nèi),,多糖多酚類化合物,,次級代謝產(chǎn)物,蛋白質(zhì)如RNase等與核酸是分離的,,一旦細胞破碎,,這些物質(zhì)就不可避免的會與RNA發(fā)生相互作用。
在細胞中,,根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同,,RNA主要分三類,即tRNA(轉(zhuǎn)運RNA),,rRNA(核糖體RNA),,mRNA(信使RNA)。mRNA是合成蛋白質(zhì)的模板,,內(nèi)容按照細胞核中的DNA所轉(zhuǎn)錄,;tRNA是mRNA上堿基序列(即遺傳密碼子)的識別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運者;rRNA是組成核糖體的組分,,是蛋白質(zhì)合成的工作場所,。細胞中還有許多種類和功能不一的小型RNA,像是組成剪接體的snRNA,負責(zé)rRNA成型的snoRNA,,以及參與RNAi作用的miRNA與siRNA等,,可調(diào)節(jié)基因表達。而其他如I,、II型內(nèi)含子,、RNaseP、HDV,、核糖體RNA等等都有催化生化反應(yīng)過程的活性,,即具有酶的活性,這類RNA被稱為核酶,。在病菌方面,,很多病菌只以RNA作為其中的遺傳信息載體(有別于細胞生物普遍用雙鏈DNA作載體)。tRNA是mRNA上堿基序列(即遺傳密碼子)的識別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運者,。
RNA試劑盒:用于各種植物,、動物,、微生物的RNA提取,,在每個試劑盒里都有一份說明使用說明書。實驗者只需要按照說明書上的步驟操作即可,。使用時無需配制其它試劑,,非常方便,適合于RNA的快速提取,。所提取的RNA完整性好,、純度高,可用于分子生物學(xué)后實驗,。但較好的試劑盒價格比較貴,,在實驗室可以根據(jù)自己的實驗需要來定奪試劑盒的使用。注意事項所有相關(guān)器皿耗材都應(yīng)為RNase-free產(chǎn)品,,操作過程要小心,,帶口罩、手套避免環(huán)境中RNA酶污染樣品,。RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之間,,但這并不表示RNA不純,需電泳檢測,。移去水相后,,用乙醇可從中間相沉淀得到DNA,加入異丙醇沉淀可從有機相得到蛋白質(zhì),。鄭州正規(guī)RNA提取試劑進貨價
總RNA的產(chǎn)量可達30μg,。產(chǎn)量可能因樣品類型而異。北京RNA提取試劑哪家便宜
RNA提取注意事項:1、組織樣本要盡可能的新鮮,,避免反復(fù)凍融,。2、提取時組織要充分研磨,,組織量不宜過少,,更不宜過多。3,、加入裂解液后應(yīng)給予充分的孵育時間,,使樣本充分裂解。4,、在用Trizol法提取時,,分層后吸取上清的原則是“寧愿少吸,不能多吸”,,千萬不能提取到中間層,,否則會導(dǎo)致嚴(yán)重的基因組DNA污染。5,、洗滌時洗滌液應(yīng)充分浸潤到管壁的四周,,確保洗滌徹底。6,、柱式提取法,,洗滌完后除了對柱子進行空離后,還應(yīng)當(dāng)將吸附柱置于超凈臺內(nèi)吹風(fēng)5~10min,,使有機溶劑充分揮發(fā)干,。7、柱式法較后洗脫時候,,當(dāng)加入DEPC水后還應(yīng)孵育3~5min,,或者提前將DEPC水加熱至60℃,可提高洗脫得率,。傳統(tǒng)的Trizol裂解異丙醇沉淀法較后RNA是用DEPC水溶解沉淀,,則應(yīng)當(dāng)給予適當(dāng)溶解時間,并用泵頭不斷吹吸離心管底部,。北京RNA提取試劑哪家便宜