酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原及相對(duì)分子質(zhì)量和濃度檢測(cè)鼠尾肌腱在醋酸溶液的酸解作用下,，其腱性組織被水解成膠凍狀溶液,，從而分解成鼠尾Ⅰ型膠原蛋白分子。抽取鼠尾Ⅰ型膠原150μL滴在薄膜上,，可形成液滴狀膠原蛋白凝膠(,，其生物力學(xué)強(qiáng)度極差，一碰即散,。將鼠尾膠原蛋白進(jìn)行SDS-PAGE,，結(jié)果顯示：Ⅰ型膠原蛋白原液在相對(duì)分子質(zhì)量130000附近有明顯條帶，另一條帶的相對(duì)分子質(zhì)量大于170000(圖2),。膠原蛋白濃度為1.8mg/mL,。吸取礦化液倒入小培養(yǎng)皿中，將鼠尾Ⅰ型膠原纖維浸泡在礦化液中,。礦化2,、6d后，分別將礦化后的Ⅰ型膠原纖維進(jìn)行TEM和電子衍射觀察,。堿法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰,、氫氧化鈉、碳酸鈉等,。濟(jì)南鼠尾膠原生產(chǎn)廠家

膠原蛋白的提取方法：酶法提?。好阜ㄌ崛∈抢玫鞍酌甘鼓z原溶解，水解條件溫和,，反應(yīng)速率快,，提取的膠原蛋白仍有完整的三股螺旋結(jié)構(gòu)，蛋白純度高,，理化性質(zhì)穩(wěn)定,，且無(wú)環(huán)境污染。酶法提取常用的蛋白酶有：胃蛋白酶,、胰蛋白酶或者復(fù)合酶,。工藝可選擇一步法,，即利用酶液直接提取,；二步法,，即先用酸或者堿進(jìn)行初步提取，然后再用酶提取,。Langmaier等[6]用MgO預(yù)處理革屑,，然后用堿性蛋白酶提取膠原的水解產(chǎn)物。CabezaL.F.T等[7]先用胃蛋白酶,，再用堿性蛋白酶提取了2種不同的膠原水解產(chǎn)物,。趙蒼碧等[2]采用胃蛋白酶和無(wú)花果蛋白酶消化法從牛腱中提取膠原蛋白，探討了酶和酶的加入量對(duì)提取結(jié)果的影響,，給出了酶對(duì)膠原提取較佳工藝配比,，酶與牛腱的質(zhì)量比為0.1時(shí)效果較佳，而使用無(wú)花果蛋白酶時(shí),，0.01的配比較佳,。寧波鼠尾膠原供應(yīng)商在2-8度中放置過(guò)夜。在無(wú)菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液,。

膠原蛋白的功效與作用：1,、膠原蛋白中含有大量甘氨酸，在人體內(nèi)不僅參與合成膠原,，而且還是大腦細(xì)胞中是一種克制性遞質(zhì),，以產(chǎn)生對(duì)的安靜作用，對(duì)焦慮癥,、神經(jīng)衰弱等有良好的治好作用膠原蛋白食品,，在胃里可以克制蛋白質(zhì)因胃酸作用引起的凝聚作用，從而有利于食物的消化,，還有克制胃酸和胃原酶分泌的作用,，可減輕胃潰瘍患者疼痛，促進(jìn)胃潰瘍愈合,。2,、膠原蛋白是身體免疫作用中負(fù)責(zé)重要功能的阿米巴細(xì)胞清掃異物的感知器，因此對(duì)預(yù)防疾病很有幫助,?？商岣呙庖邫C(jī)能、克制細(xì)胞,、活化細(xì)胞機(jī)能,、活化筋骨、治好關(guān)節(jié)炎及酸痛,。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說(shuō)明：不含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升,，1mg/ml三維膠為例）：將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,，加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過(guò)來(lái)把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻。再加入100ul10×PBS或10×培養(yǎng)液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試),。將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是10×PBS,，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。成纖維細(xì)胞膠原凝膠復(fù)合物有著良好的生物學(xué)特性,。

鼠尾膠原,，10mg包裝，配制方法如下：1.配0.1M的乙酸溶液100ml,。即取575ul冰乙酸加超純水至100ml,，容量瓶配制比較準(zhǔn)確。2.用吸管吸取10ml剛配好的0.1M乙酸溶液（不要用*加,，吸十次不如加一次z準(zhǔn)確）,，加入盛膠原的瓶中，輕輕顛倒,，不要震蕩,，蛋白容易起泡。幾分鐘即可,，蛋白質(zhì)非常好溶解,。3.將膠原溶液移入事先壓好的玻璃瓶中，比青霉素瓶大點(diǎn)的就行,。用*在瓶底加1ml氯仿,，打到一檔就行，避免加入氣泡,。然后4度過(guò)夜除菌,。4.第二天將上層膠原溶液分裝進(jìn)EP管中。用封口膜封口,，4度保存,，勿冷凍。鼠尾I型膠原蛋白系采用方法在無(wú)菌下制備,，純度達(dá)到95%以上,。青島鼠尾膠原進(jìn)貨價(jià)

酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法,，用酸法提取的膠原較大程度地保持了其三股螺旋結(jié)構(gòu)。濟(jì)南鼠尾膠原生產(chǎn)廠家

利用鼠尾Ⅰ型膠原構(gòu)建與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料,。方法通過(guò)醋酸酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白,，并重構(gòu)成膠原纖維。然后,，將重構(gòu)后的膠原纖維放置在礦化液中模仿骨生物礦化2～6d,，通過(guò)透射電子顯微鏡和電子衍射觀察骨生物礦化。結(jié)果酸解提取的鼠尾Ⅰ型膠原蛋白能夠重構(gòu)成膠原纖維,，并且具有特征性的D-Band結(jié)構(gòu),。透射電子顯微鏡和電子衍射顯示：礦化2d后，羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維,，膠原纖維部分礦化,；礦化6d后，膠原纖維內(nèi)部完全礦化,，形成Ⅰ型膠原蛋白/羥基磷灰石鈣的仿生骨材料,。結(jié)論利用酸解法提取的鼠尾Ⅰ型膠原蛋白可以重構(gòu)成膠原纖維，經(jīng)礦化可形成與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)一致的仿生骨材料,。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄，并且制作簡(jiǎn)便,，成本低廉,。濟(jì)南鼠尾膠原生產(chǎn)廠家