對(duì)RNA的科學(xué)研究,,首先要從植物或者動(dòng)物等組織中提取出合格的RNA,。在實(shí)際RNA提取中,有幾個(gè)提取原則:1,、保證RNA一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性,;2,、提取的RNA樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶存在壓制作用的有機(jī)溶劑及過(guò)高濃度的金屬離子;3,、其他生物大分子如蛋白質(zhì),、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降低到較低程度;4,、排除其它核酸分子(DNA)的污染,。常用RNA提取方法有:1TRIzol法;2TRIzol+過(guò)柱法,;3CTAB+過(guò)柱法,;4試劑盒法。RNA提取試劑盒BiomarkerPlantTotalRNAIsolationKit(Polysaccharides&Polyphenolics–rich),能從植物組織,,特別是富含多糖多酚或淀粉的植物組織(如成熟水稻葉片,,棉花葉片,擬南芥種子,,香蕉,,馬鈴薯塊莖,蘋果,,西瓜果肉,,獼猴桃,梨,,月季等)中快速提取總RNA,,同時(shí)可以處理大量不同樣品。一個(gè)核糖核苷酸分子由磷酸,,核糖和堿基構(gòu)成,。長(zhǎng)沙RNA提取試劑廠家推薦
RNA提取:預(yù)備工作RNA酶(Rnase)是導(dǎo)致RNA降解較主要的物質(zhì),。此酶非常穩(wěn)定,,在一些極端的條件下只可暫時(shí)失活,但限制因素去除后又迅速恢復(fù)活性,。常規(guī)高溫高壓滅菌方法和蛋白壓制劑不能使所有的Rnase完全失活,。1.它普遍存在于人的皮膚上,因此制備RNA時(shí)必須戴手套,。2.RNase的又一污染源是取液器,。根據(jù)取液器制造商的要求對(duì)取液器進(jìn)行處理。一般情況下采用以DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的內(nèi)部和外部,,可基本達(dá)到要求,。3.塑料制品、玻璃和金屬物品的處理,。合肥珠海RNA提取試劑細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點(diǎn):試劑盒可用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞或者組織樣品的提取,。
RNA提取試劑的選擇:對(duì)于富含多糖多酚的植物類組織提取是個(gè)難點(diǎn),Takara精心研發(fā)的柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以輕松解決這個(gè)問(wèn)題,。TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以高效地從各種簡(jiǎn)單的植物組織材料(葉片,、莖、幼苗等),、富含多糖多酚的植物組織材料(果實(shí),、種子等),、菌類提取高純度的TotalRNA,,適用范圍普遍。按照標(biāo)準(zhǔn)流程,本試劑盒可以有效地提取分子量大于200nt的RNA,,也可以按照可選步驟提取得到包含SmallRNA(<200nt)的TotalRNA,。試劑盒中包含了RNA提取所需的全部試劑,無(wú)需額外購(gòu)買其它試劑~
拭子RNA提取試劑的選擇,?拭子樣本的量與提取的核酸量成正比,,如果要提高核酸得率,也可通過(guò)增加樣本量來(lái)實(shí)現(xiàn),。一般先取一根拭子的涮洗液樣本,,然后進(jìn)行提取,如結(jié)果不理想可考慮增加樣本量或重新采樣,。但如果增加樣本量或重新采樣還不能得到滿意結(jié)果,,應(yīng)及時(shí)考慮更換試劑盒。目前國(guó)內(nèi)常用的拭子核酸提取試劑有Q,、Biog等,。根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn),Q和T品牌試劑盒的拭子RNA提取得率(一根口腔拭子在口咽部來(lái)回刮擦10次)在0.5-3.5ug,。同樣處理的口咽拭子,,Biog試劑盒的提取得率在1-4ug,基本上都能滿足下游PCR相關(guān)實(shí)驗(yàn)的要求好的試劑盒價(jià)格比較貴,,在實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要來(lái)定奪試劑盒的使用,。
植物、動(dòng)物,、人類都存在RNA干擾現(xiàn)象,,這對(duì)于基因表達(dá)的管理、參與對(duì)病菌傳染的防護(hù),、控制活躍基因具有重要意義,。RNA干擾是一個(gè)生物過(guò)程,在這個(gè)過(guò)程中雙鏈RNA以一種非常明確的方式壓制了基因表達(dá),。自1998年發(fā)現(xiàn)以來(lái),,RNA干擾已經(jīng)作為一種強(qiáng)大的“基因沉默”技術(shù)而出現(xiàn)。RNA干擾作為研究基因運(yùn)行的一種研究方法已被普遍應(yīng)用于基礎(chǔ)科學(xué),,它可能在將來(lái)產(chǎn)生更多更新的醫(yī)治方法,。科學(xué)家認(rèn)為,,RNA干擾技術(shù)不僅是研究基因功能的一種強(qiáng)大工具,,不久的未來(lái),這種技術(shù)也許能用來(lái)直接從源頭上讓致病基因“沉默”,,以醫(yī)治病癥甚至一些病,,在農(nóng)業(yè)上也將大有可為。β-巰基乙醇主要破壞RNase蛋白質(zhì)中的二硫鍵。貴陽(yáng)正規(guī)RNA提取試劑平均價(jià)格
總RNA提取試劑:自備新開封或?qū)iT氯仿,,異丙醇,,75%乙醇,DEPC處理水,。長(zhǎng)沙RNA提取試劑廠家推薦
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一種總RNA抽提試劑,,內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì),能迅速裂解細(xì)胞,,壓制細(xì)胞釋放出的核酸酶活性,。目前常用Trizol法進(jìn)行提取組織或細(xì)胞中的RNA。Trizol作用原理:在勻質(zhì)化或溶解樣品中,,Trizol試劑可保持RNA的完整性,,同時(shí)能破壞細(xì)胞及溶解細(xì)胞成分。加入氯仿離心后,,裂解液分層成水相和有機(jī)相,。RNA存在于水相中。水相轉(zhuǎn)移后,,RNA通過(guò)異丙醇沉淀回收,。移去水相后,用乙醇可從中間相沉淀得到DNA,,加入異丙醇沉淀可從有機(jī)相得到蛋白質(zhì),。長(zhǎng)沙RNA提取試劑廠家推薦
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