細(xì)胞凍存液的原理及配制方法:細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng),、引種、保種和保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段,。在細(xì)胞建株和建系中,,及時(shí)凍存原始細(xì)胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過(guò)程中,,雜交瘤細(xì)胞,、每次克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存保種常常是必不可少的實(shí)驗(yàn)操作。因?yàn)樵跊](méi)有建立一個(gè)穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時(shí)候,,細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中隨時(shí)可能因細(xì)胞的污染,、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗,如果沒(méi)有原始細(xì)胞的凍存,,則因?yàn)樯鲜龅囊馔舛肮ΡM棄,。無(wú)血清細(xì)胞凍存液,含多種保護(hù)劑成分,。貴陽(yáng)正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液
細(xì)胞凍存:就凍存細(xì)胞而言,,為了防止細(xì)胞在溫度下降時(shí)產(chǎn)生胞內(nèi)細(xì)微冰晶,,其溫度的下降不能太快。標(biāo)準(zhǔn)的操作是每一分鐘下降一度,。有以下三種建議:(1)優(yōu)先推薦使用程控降溫儀,。(2)其次,加有異丙醇的細(xì)胞凍存盒,,基本上也可以保證每分鐘1℃左右的降溫速度,;(3)還有一些普遍的簡(jiǎn)易凍存方法。如4℃半小時(shí),,-20℃半小時(shí),,然后-80℃過(guò)夜,再放入液氮,;用泡沫盒(裝15mL離心管的那種)加一個(gè)保鮮袋,,直接放在-80℃凍存;也可以用紗布做成袋子,,將細(xì)胞懸掛在液氮上方,,隔天轉(zhuǎn)入液氮;在凍存管外面包上棉花,,直接放在-80℃冰箱就能夠達(dá)到緩慢降溫的效果,;有的時(shí)候如果確實(shí)比較緊急的話,向96孔凍存盒的內(nèi)部加滿自來(lái)水,,再將凍存管放置孔中,,直接置于-80℃,這樣也能夠達(dá)到緩慢降溫的目的,。鄭州正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液哪里買(mǎi)無(wú)血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢(shì):含DMSO,、糖類、氨基酸等成分的一款通用型細(xì)胞凍存液,。
無(wú)血清細(xì)胞凍存液,,含多種保護(hù)劑成分。一些保護(hù)劑,,易于穿透細(xì)胞,,避免細(xì)胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細(xì)胞,同時(shí)另一些保護(hù)劑不能穿透細(xì)胞,,但可以在冰晶形成之前,,優(yōu)先結(jié)合細(xì)胞外的水分子,降低細(xì)胞外溶液的電解質(zhì)濃度,,減少陽(yáng)離子進(jìn)入細(xì)胞的數(shù)量,,為多種保護(hù)劑組合,在細(xì)胞內(nèi)外進(jìn)行雙重保護(hù),,較大提高了細(xì)胞復(fù)蘇存活率,。無(wú)血清細(xì)胞凍存液不含牛血清,,無(wú)動(dòng)物源組份。2-8℃即可穩(wěn)定保存,,無(wú)需冷凍,,即取即用。凍存細(xì)胞,,無(wú)需程序降溫,。凍存細(xì)胞復(fù)蘇率在90%以上。
無(wú)血清細(xì)胞凍存液:凍存注意:開(kāi)蓋之前,,用70%的乙醇或異丙醇擦拭瓶身,。以下說(shuō)明適用于在6孔板內(nèi)的培養(yǎng)物的凍存。培養(yǎng)物應(yīng)該在適合傳代的時(shí)候進(jìn)行收集和凍存,。每管所含有的細(xì)胞應(yīng)當(dāng)來(lái)源于6孔板的1個(gè)培養(yǎng)孔。如果使用其他的培養(yǎng)器皿,,請(qǐng)相應(yīng)的調(diào)整體積,。1. 在室溫(15 - 25°C)以300 x g離心5分鐘。2. 輕輕吸走上清液,,注意不要擾動(dòng)細(xì)胞團(tuán),。3. 用血清學(xué)吸管以1 mL的TBD-698重懸細(xì)胞。在打散細(xì)胞團(tuán)時(shí),,盡量減少細(xì)胞聚集體分解,。4. 用2 mL的血清學(xué)吸管將1 mL的細(xì)胞聚集體轉(zhuǎn)移到標(biāo)記好的凍存管中。5. 用以下方法凍存細(xì)胞聚集體:推薦使用緩速降溫方法,,每分鐘降低1度,,隨后可以在 -196°C液氮長(zhǎng)期保存。不推薦在 -80°C長(zhǎng)期保存,。逐步降溫法:-20°C保存2個(gè)小時(shí),,然后 -80°C中保存2個(gè)小時(shí),隨后可以在 -196°C液氮中長(zhǎng)期保存,。無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品性能:既適用于一般培養(yǎng)細(xì)胞的凍存,,也適用于無(wú)血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞的凍存。
細(xì)胞凍存液的配置成分及比例: 細(xì)胞凍存液是含10%DMSO或甘油,、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液,。在凍存前比較好換一次培養(yǎng)液。 配置方法: 1,、將DMSO和小牛血清加入培養(yǎng)液中,各自含量占總體積的10%; 2,、然后用濾膜過(guò)濾配置好的細(xì)胞凍存液; 3、用**保存瓶分裝保存?zhèn)溆眉纯?15%(常見(jiàn)為10%)的DMSO或甘油,,含10%-20%血清的凍存培養(yǎng)液,。一般來(lái)講血清含量可以在10%-90%之間調(diào)整,,凍存液中加入血清一方面可以為細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng),另一方面可以在細(xì)胞凍存過(guò)程中提供非滲透性保護(hù)物質(zhì),,如蔗糖,,白蛋白等從而更好地保護(hù)細(xì)胞。有人親測(cè)10%血清凍存細(xì)胞,,結(jié)果證明是可以的,,但高血清比例的凍存液更有助于提高細(xì)胞活力,此外嬌貴的細(xì)胞可以適當(dāng)提高凍存液中血清的比例以保證獲得更高的存活率及活力,。開(kāi)蓋之前,,用70%的乙醇或異丙醇擦拭瓶身。深圳正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液價(jià)格
無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品性能:提高細(xì)胞存活率和活力,,亦適合于無(wú)血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞,。貴陽(yáng)正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液
含血清細(xì)胞凍存液凍存細(xì)胞時(shí)遇到的問(wèn)題:1. 凍存細(xì)胞時(shí)需現(xiàn)配凍存液(如購(gòu)買(mǎi)市面上通用的含血清細(xì)胞凍存液,此步可省略),。2. 需要程序降溫(4℃→-20℃→-80℃→液氮),,步驟繁瑣,耗時(shí)耗力,。3. 含血清,,細(xì)胞污染(細(xì)菌、霉菌和支原體等)的風(fēng)險(xiǎn)更高,。4. 血清批次,、品質(zhì)間差異導(dǎo)致凍存液的批次間差異。5. 需液氮凍存,,且不能原位(如孔板)凍存,。Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液是不含血清和動(dòng)物源成分,含DMSO,、糖類,、氨基酸等成分的一款通用型細(xì)胞凍存液。Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液的凍存方法是:將細(xì)胞凍存懸液(凍存管或孔板)直接放置-80℃冰箱長(zhǎng)期保存,。貴陽(yáng)正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液