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醫(yī)院檢驗(yàn)中心糖原染色操作規(guī)程:1.雪夫氏試劑:400m1蒸餾水煮沸除去C02,,逐漸加堿性品紅2.08溶解后,,待冷卻至60℃,加1mm01兒HCl40ml,,再加偏重亞硫酸鈉(NaHSO:)4g,,次日加活性碳1.5g,放置半天后過濾,。配好后液體為無色透明,,保存于4℃冰箱中。2.過碘酸作用液:過碘酸1g溶于蒸餾水100ml中,,或取過碘酸鉀(1tI04)0。698加蒸餾水100ml,,微加熱使溶解,,再加濃硝酸0.3m1,置冰箱中保存,。3.固定液:95%乙醇90ml與甲醛10m1混勻,。4.20g/l甲基綠:甲基綠2g溶于100m1蒸餾水。[操作]_x005f_x000c_(1)新鮮或陳舊血片,、骨髓片于固定液內(nèi)10分鐘,。(2)水洗數(shù)次后,對(duì)照片先用唾液消化30分鐘,,也可在同一片,,在其中間用蠟筆劃界,,一半做對(duì)照,另一半做測(cè)定,。(3)水洗后,,滴加過碘酸數(shù)滴于涂片上,作用10分鐘后,,再水洗數(shù)次,。過碘酸溶液和蘇木素溶液濃度更低,不宜過染,。福建哪家生產(chǎn)糖原染色試劑盒直銷價(jià)
糖原及粘液染色法注意事項(xiàng):1,、糖原的固定要及時(shí),而且標(biāo)本要新鮮,。2,、如用無水酒精作糖原的固定劑,有它的弊病,,因無水酒精滲透較慢,,而且容易產(chǎn)生極化,(極化是糖原顆粒趨向于細(xì)胞的一端),。故用Gendre氏固定液效果較佳,,其配法如下:苦味酸飽和于95%酒精85ml40%甲醛10ml冰醋酸5ml3、各種試劑必須化學(xué)純,,亞硫酸鈉須有濃厚氣味,,器皿必須潔凈而干燥,染色缸亦是,。4,、如果Schiff氏試劑,在經(jīng)過活性碳吸附漂白后不顯無色,,首先應(yīng)考慮試劑中的偏重亞硫酸鈉是否失效,。如果偏重亞硫酸鈉氣味不濃,使用時(shí)可考慮適當(dāng)?shù)脑黾佑昧?。其次考慮堿性品紅本身,,常常雖屬同一生產(chǎn)廠家,但不同批號(hào),,其效果就可能不同,,應(yīng)特別引起注意天津哪家提供糖原染色試劑盒生產(chǎn)廠家糖類從組織化學(xué)技術(shù)角度來分,可分為多糖,、中性粘液物質(zhì),。
特染的應(yīng)用價(jià)值:現(xiàn)代病理學(xué)中免疫組織化學(xué)技術(shù)、電子顯微鏡技術(shù)以及其它細(xì)胞及分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用日益普遍,,但由于這些技術(shù)要求一定的實(shí)驗(yàn)條件以及所需的試劑價(jià)格較為昂貴,,對(duì)于一部分病人以及某一些基層醫(yī)院是比較難以接受的,。而組織化學(xué)技術(shù)則具有無需復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)條件以及較為昂貴的試劑操作又比較簡(jiǎn)單的優(yōu)勢(shì),在臨床病理學(xué)診斷中具有重要的應(yīng)用價(jià)值,。比如,,當(dāng)細(xì)胞中出現(xiàn)色素,是黑色素還是含鐵血黃素以及當(dāng)組織中出現(xiàn)均一化學(xué)物質(zhì)是否為淀粉樣變性等,,用組織化學(xué)技術(shù)區(qū)別起來很簡(jiǎn)單,,所以組織化學(xué)技術(shù),雖然已有幾十年到幾百年的歷史,,仍是一個(gè)很有實(shí)用價(jià)值的技術(shù),。
特殊染色方法選擇應(yīng)遵循:染色結(jié)果對(duì)比鮮明、結(jié)果易保存,、陽性突出的染色方法,;突出的陽性結(jié)果在于所選擇方法表達(dá)的色調(diào)及如何進(jìn)行背景的復(fù)染。結(jié)果能夠長(zhǎng)時(shí)間保存,、不褪色對(duì)于后續(xù)的調(diào)閱,、科研、論文均較為有利,。如顯示淀粉樣物質(zhì),,甲基紫染色法雖然流程較為簡(jiǎn)單,但結(jié)果不易保存,,陽性對(duì)比度相對(duì)不突出,;剛果紅染色法陽性結(jié)果明顯,長(zhǎng)時(shí)間保存不褪色,,流程簡(jiǎn)便,,更是實(shí)用的方法。如顯示彈性纖維,,地衣紅染色染液雖配制較方便,,但結(jié)果對(duì)比度相對(duì)欠佳,與其他幾個(gè)染色法相比,,多不選擇使用,。對(duì)某種鹽基性人工合成染料如硫堇或甲苯胺藍(lán)有異染性。
染色的一般原則:因檢測(cè)細(xì)胞的類型,、凋亡誘導(dǎo)劑種類、使用的檢測(cè)儀器不同,,因而流式檢測(cè)的熒光補(bǔ)償也不同,,因此建議每次檢測(cè)均需使用凋亡誘導(dǎo)處理的細(xì)胞做單陽對(duì)照,進(jìn)行熒光補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié),。標(biāo)記抗體常用熒光素FITC,,EGFP激發(fā)光:488nm發(fā)射光:525nm;使用面較廣,,價(jià)格便宜。PE激發(fā)光488nm發(fā)射光575nm,,此熒光的激發(fā)效率較佳,,故此熒光得到的信號(hào)較強(qiáng);檢測(cè)某些弱表達(dá)的抗原,,推薦使用此熒光素,。價(jià)格較FITC昂貴。APC激發(fā)光633nm,,發(fā)射光660nm,,在配有雙激光的流式細(xì)胞儀上,此熒光染料可與7-AAD或PI共同使用來避開自帶綠色熒光的樣本,。流式細(xì)胞儀相關(guān)試劑盒,。在滴加染液時(shí),務(wù)必使染液完全覆蓋組織,,但不能溢出圈外,,避免浪費(fèi)試劑。江西口碑好的糖原染色試劑盒推薦廠家
冷凍切片染色效果不佳,成熟時(shí)間2個(gè)月,染色時(shí)間一般15-20分鐘,。福建哪家生產(chǎn)糖原染色試劑盒直銷價(jià)
可以通過pas染色計(jì)算糖原含量嗎:PAS染色又稱過碘酸雪夫染色,糖原染色.一般用來顯示糖元和其它多糖物質(zhì).具體現(xiàn)象例舉:陽性反應(yīng),胞漿呈紅色,陰性反應(yīng),胞漿呈無色,;在正常血片中RBC不染色;PLT染成深紅色,;中性粒細(xì)胞胞漿染成紅色或深紅色,有些細(xì)胞有陽性顆粒,;單核細(xì)胞的胞漿染成淡紅色,可含有細(xì)小或粗大陽性顆粒;少數(shù)淋巴細(xì)胞的胞漿內(nèi)含有少許小的淡紅色或紅色顆粒,;正常骨髓的幼稚細(xì)胞和有核RBC都不染色,;巨核細(xì)胞的胞漿內(nèi)呈彌散紅色或深紅色.巨核細(xì)胞的胞漿內(nèi)呈彌散紅色或深紅色.顏色深淺與濃度相關(guān)福建哪家生產(chǎn)糖原染色試劑盒直銷價(jià)
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