鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基,,它具有促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞(特別是上皮細(xì)胞)貼壁的作用,,同時(shí)它也是一種天然的黏附劑,當(dāng)我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)放置小玻片,制備細(xì)胞爬片時(shí),,可在瓶底涂一層膠原,再放上小玻片,,自然干燥后小玻片就固定于培養(yǎng)瓶之中,。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)可掌握鼠尾膠原的制備方法,以及如何切割小玻片,,并利用鼠尾膠原將其固定于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),。實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料:大鼠尾巴、剪刀、鑷子,、止血鉗,、彎頭吸管、平皿,、三角燒瓶,、燒杯、量筒,、天平,、生理鹽水、75%酒精,、0.1%醋酸溶液,、蓋玻片、培養(yǎng)瓶,、鉆石筆,、鼠尾膠原。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:1,、制備鼠尾膠原,。2、切割小玻片,。3,、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。鼠尾膠原醋酸溶解:在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過(guò)夜,。蕪湖鼠尾膠原推薦廠家
鼠尾膠原膠凝程序:膠原蛋白I按以下步驟使其pH達(dá)到堿性時(shí)凝膠,。1)將無(wú)菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養(yǎng)皿的蓋子上來(lái)制備氨蒸氣室。用氫氧化銨使紗布飽和,,把蓋子放在150mm的培養(yǎng)皿上,,暫放置一邊。2)將膠原蛋白I均勻涂布在要包被物的表面上,,厚度可以根據(jù)需要改變,,膠原蛋白I(50-100μL)足以涂覆22mm的蓋玻片。對(duì)于直徑100mm的培養(yǎng)皿,,每個(gè)加入約6mL;對(duì)于60mm培養(yǎng)皿添加約2.3mL,,對(duì)于35mm培養(yǎng)皿添加約1mL。3)將涂有膠原蛋白的蓋玻片或帶有蓋子的培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)移到氨蒸氣室并暴露三分鐘,。4)在無(wú)菌蒸餾水中(35mm培養(yǎng)皿加5mL,,60mm培養(yǎng)皿加10mL等)浸泡涂布的蓋玻片或培養(yǎng)皿30min。吸取原蒸餾水并加0.5-1.0mL無(wú)菌蒸餾水,,放置在層流罩中過(guò)夜,。5)吸出蒸餾水,用含血清的平衡鹽緩沖液溶液代替并保存在2-8°C。開封鼠尾膠原單價(jià)在以小鼠為模式生物進(jìn)行科學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)室中,。
鼠尾膠原包被培養(yǎng)板:胎干細(xì)胞在體外可誘導(dǎo)分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞,進(jìn)而形成血管,因而成為血管組織工程理想的種子細(xì)胞來(lái)源之一,。目的:探討建立定向誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的方法。方法:在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層上培養(yǎng)人胚胎干細(xì)胞H1,將H1細(xì)胞團(tuán)塊轉(zhuǎn)移到鼠尾膠原包被的培養(yǎng)板,貼壁24-48h后,培養(yǎng)基換為含不同輔助因子和內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑的EGM-2內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基,。結(jié)果與結(jié)論:①在EGM-2內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基誘導(dǎo)下,細(xì)胞逐步表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)記基因VEGFR-2,、PECAM1、vWF,、CD34,、VE-cadherin、GATA-2,。②分化細(xì)胞表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)記VE-cadherin,、CD31,。③分化細(xì)胞具有吞噬低密度脂蛋白功能,。說(shuō)明將人胚胎干細(xì)胞接種在鼠尾膠原包被培養(yǎng)板上,通過(guò)EGM-2內(nèi)皮培養(yǎng)體系誘導(dǎo),可直接分化為功能性血管內(nèi)皮細(xì)胞。為研究胞外基質(zhì)對(duì)誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的作用以及相關(guān)信號(hào)分子機(jī)制打下了基礎(chǔ),。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,并且制作簡(jiǎn)便,,成本低廉,。
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng):通過(guò)醋酸抽提、氯化鈉沉淀,、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的,。鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿,培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞,。也可用于制備三維膠,,模擬真實(shí)的生長(zhǎng)環(huán)境,使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長(zhǎng),。1,,在使用鼠膠原蛋白型包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細(xì)胞的貼壁和生長(zhǎng)。1mg/ml濃度以上,,pH左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度的三維膠,,檢查到NIH-3T3細(xì)胞在三維膠內(nèi)正常生長(zhǎng)、PC-12細(xì)胞在三維膠表面正常生長(zhǎng),。使用方法:1,、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度:1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中,。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,并且制作簡(jiǎn)便,成本低廉,。鼠尾膠原蛋白還能用于制備三維膠,。
鼠尾膠原蛋白的用途是什么:顧名思義,鼠尾膠原蛋白是從老鼠尾巴提取出來(lái)的物質(zhì),。膠原蛋白是一種蛋白質(zhì),,能幫助連接皮膚,骨頭和肌腱等身體組織,。鼠尾膠原蛋白的用途很普遍,,可用于化妝品,工業(yè)和食品生產(chǎn)等領(lǐng)域,。它在實(shí)驗(yàn)室中也有一定用途,,因?yàn)樗鼛缀跏羌兡z原蛋白。在食品加工領(lǐng)域,,鼠尾膠原蛋白用于生產(chǎn)明膠并添加到布丁和棉花糖中,。它還可以當(dāng)作酸奶,冰淇淋,,果醬和奶油芝士等食品的增稠劑使用,。在一些低脂肪食品中,它用于模仿全脂食品的感覺和質(zhì)地,。它還用于生產(chǎn)膳食保健品,,據(jù)說(shuō)能讓手指甲和皮膚看起來(lái)更好。此外,,還有基于膠原蛋白的保健品,,可用于促進(jìn)關(guān)節(jié)健康。免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的分泌上皮細(xì)胞特征,。金華正規(guī)鼠尾膠原哪里買
我們不建議用過(guò)濾的方法無(wú)菌化,。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會(huì)導(dǎo)致丟失蛋白。蕪湖鼠尾膠原推薦廠家
實(shí)驗(yàn)應(yīng)用:探討應(yīng)用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中的促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁效果,。方法制作鼠尾膠原,,觀察全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中,自制的鼠尾膠原對(duì)前庭毛細(xì)胞的貼壁黏附作用,。結(jié)果無(wú)鼠尾膠原時(shí),,前庭毛細(xì)胞懸浮于外液,不宜封接,;有鼠尾膠原時(shí),,前庭毛細(xì)胞貼附于培養(yǎng)皿底壁,易于封接和長(zhǎng)時(shí)間(約8h)的觀察和記錄,。鼠尾膠原對(duì)前庭毛細(xì)胞具有良好的貼壁黏附促進(jìn)作用,。結(jié)論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,并且制作簡(jiǎn)便,,成本低廉,。蕪湖鼠尾膠原推薦廠家
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