細(xì)胞傳代的方法都有哪些：根據(jù)不同的細(xì)胞采取不同的方法。貼壁生長的細(xì)胞用消化法傳代,；部分貼壁生長的細(xì)胞用直接吹打即可傳代,；懸浮生長的細(xì)胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代，或用自然沉降法吸除上清后,，再吹打,。原代培養(yǎng)的開始傳代應(yīng)注意的問題？細(xì)胞沒有生長到足以覆蓋瓶底壁的大部分表面以前,，不要急于傳代,；原代培養(yǎng)時細(xì)胞多為混雜生長，不同的細(xì)胞有不同的消化時間,，因此要根據(jù)需要注意觀察及時處理,，并根據(jù)不同細(xì)胞對胰蛋白酶的耐受時間而分離和純化所需要的細(xì)胞；吹打細(xì)胞時動作要輕巧盡可能減少對細(xì)胞的損傷,；開始傳代時細(xì)胞接種數(shù)量要多一些,，使細(xì)胞能盡快適應(yīng)新環(huán)境而利于細(xì)胞生存和增值接種的細(xì)胞密度過大，會導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足,。珠海正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒

原代細(xì)胞體外培養(yǎng)現(xiàn)狀：原代細(xì)胞自然生長有兩種方式,，錨定依賴或非錨定依賴，這主要取決于它們在體內(nèi)的組織來源：外周血（非錨定依賴）或固體組織部位（錨定依賴）,。原代細(xì)胞一旦分離后,，24-48h內(nèi)需要進(jìn)行貼壁或起始，開始培養(yǎng),。廣義地說,，所有的哺乳動物細(xì)胞，無論其類型或來源,，都需要在與人類生理?xiàng)l件非常相似的條件下生長,。此外，它們還需要一個pH可調(diào)節(jié)的生長環(huán)境,，并且培養(yǎng)基中需包含細(xì)胞類型特定的營養(yǎng)因子,、生長因子、葡萄糖和/或物品,。為了確定一種特定細(xì)胞類型在低至無血清培養(yǎng)基中正常生長和功能所需的較低條件,，相關(guān)研究工作已經(jīng)揭示了生長培養(yǎng)基必須包含的基本成分：胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白,、葡萄糖和各種鹽,、維生素和氨基酸1。然而，除此之外培養(yǎng)基也可以含有組織和細(xì)胞特異性細(xì)胞因子和增殖,、生存所需的生長因子,。例如，原代內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞都需要添加L-谷氨酰胺和成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）,，但是,，應(yīng)該添加額外的組織特異性因子，以防止成纖維細(xì)胞的生長,。珠海正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒具有體內(nèi)組織特異性特征并且純度高,。

細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)及常見問題解答：1、培養(yǎng)基的選擇依細(xì)胞種類而定,。如果是從別的實(shí)驗(yàn)室借來的細(xì)胞,，較初階段一定要保持細(xì)胞原有的培養(yǎng)條件；特殊種類的細(xì)胞,，比如內(nèi)皮細(xì)胞,，可以借鑒網(wǎng)上培養(yǎng)成功的條件，添加一些特定成分,。2,、液體培養(yǎng)基的保存條件應(yīng)是冰箱4度冷藏。小六兒見過有的大實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞量多,，一次性購買的培養(yǎng)基瓶數(shù)也多，有些人可能覺得-20冰箱保存時間會更久一些,。但是經(jīng)過冷凍后的培養(yǎng)基再溶化時,，你會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基的顏色發(fā)生變化，顏色變深,，這就是培養(yǎng)基的PH值升高了,。3、培養(yǎng)基中都含有大量的谷氨酰胺,，用來合成細(xì)胞生長所需要的核酸和蛋白質(zhì),。但是谷氨酰胺在溶液中不穩(wěn)定，保存4周后的培養(yǎng)基需要重新加入谷氨酰胺,。所以盡量不要大批量購買培養(yǎng),，也不要一次配太多的培養(yǎng)基。

原代細(xì)胞的小知識：1.解凍原代細(xì)胞對解凍過程非常敏感,，因此將小瓶置于37℃水浴鍋中,，保持并輕輕旋轉(zhuǎn)直到內(nèi)容物剛剛解凍是很重要的。然后應(yīng)立即從水浴中取出小瓶,，并轉(zhuǎn)移到無菌操作臺,。確保您的培養(yǎng)瓶在解凍前已經(jīng)準(zhǔn)備就緒，以便可以立即用于接種細(xì)胞，并置于培養(yǎng)箱中,，我們在使用cellsystems的原代視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞時,，復(fù)蘇的時候沒有去離心，第二天換個液就可以,。2.傳代原代細(xì)胞有間隙克制接觸不良反應(yīng),，所以細(xì)胞不能到達(dá)100%的密度的時候傳代，一般較有效的建議觀察細(xì)胞的生長周期,，CellSystems的原代細(xì)胞在細(xì)胞密度達(dá)到85%左右的時候傳代較佳,，當(dāng)生長至100％匯合時，它就會衰老,。記住,，所有的原代細(xì)胞不是100％純，因此我們要盡量減少污染細(xì)胞的生長,。當(dāng)細(xì)胞傳代時,，使用低濃度的胰蛋白酶，也可以嘗試下cellsystems的整體消化套裝哦（品牌：cellsystems,，貨號：4Z0-800）并在顯微鏡下密切監(jiān)測細(xì)胞,。此外，記得在胰蛋白酶消化后完全中和細(xì)胞中的胰酶,，因?yàn)槿魏位钚缘囊鹊鞍酌付紝p傷細(xì)胞,。用專門的原代細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，較大限度提高原代細(xì)胞的生長,。

原代細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)：由于每種原代細(xì)胞培養(yǎng)的條件迥異,，而且每個實(shí)驗(yàn)室都摸索出自己的培養(yǎng)條件，而對于一個特定的組織塊,，所用培養(yǎng)條件不一樣,，得出的所需細(xì)胞族群就不一樣，因?yàn)槊糠N組織塊都含有不同種類的細(xì)胞群,，而每一種細(xì)胞群在所選定的培養(yǎng)條件下（比如所選蛋白分解酶的種類和條件,，細(xì)胞因子的種類，基礎(chǔ)培養(yǎng)基的種類或者是培養(yǎng)時間長短）都會得出不同的結(jié)果,。由于各實(shí)驗(yàn)室采取不同的培養(yǎng)條件,，即使是同一塊心組織就有可能造成A實(shí)驗(yàn)室獲得30%的心肌細(xì)胞，70%其他種類細(xì)胞,，而B實(shí)驗(yàn)室卻能獲得70%所需心肌細(xì)胞,，30%為成纖維、脂肪等種類,。這樣的話,，即使是做同一項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)，就有可能得出相反的科學(xué)結(jié)論。因此,，早在2004年,，美國科學(xué)界就質(zhì)疑之前以原代細(xì)胞為主的科研文章，并同時提出原代細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)的概念,。將凍存管快速的放入37℃水浴中,，輕輕握住并旋轉(zhuǎn)，直到管內(nèi)物體完全融化,。珠海正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒

體外分裂增殖的速度較快,，營養(yǎng)成分消耗大，換液時間隔一般較短,。珠海正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒

原代細(xì)胞傳代培養(yǎng)方法：1.當(dāng)細(xì)胞達(dá)到80-90%融合時需要傳代培養(yǎng),。2.提前準(zhǔn)備好多聚賴氨酸（PLL，貨號0403）或纖維粘連蛋白（BPF,，貨號8248）包被好的培養(yǎng)瓶,。3.將完全培養(yǎng)基，胰酶/EDTA消化液（T/E,，貨號0103）,，胰胰中和液（TNS，貨號0113）和不含鈣鎂離子的DPBS（貨號0303）加熱至室溫,。我們不推薦用37度水浴加熱試劑和培養(yǎng)基,。4.用DPBS沖洗細(xì)胞。5.以T-75培養(yǎng)瓶為例,，向培養(yǎng)瓶中加入8mlDPBS,，然后加入2ml胰酶/EDTA消化液。輕輕搖動培養(yǎng)瓶保證細(xì)胞被胰酶/EDTA消化液完全覆蓋,。將培養(yǎng)瓶置于37度培養(yǎng)箱1-2分鐘直到細(xì)胞變圓。在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化,。6.在消化期間,，準(zhǔn)備一支50ml離心管加入5ml胎牛血清（FBS，貨號0500）珠海正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒