RNA提取試劑注意事項:1,、必須戴一次性手套操作,,且盡量不要對著RNA樣品說話,以防RNA酶污染,。建議戴一次性口罩操作,。2、TRIReagent含有毒物質(zhì)苯酚,,避免接觸皮膚或吸入,。為防止濺入眼睛,請戴防護眼鏡或使用透明保護屏,。如皮膚接觸TRIReagent,,請立即用大量去垢劑和水沖洗,如仍有不適,,請聽取醫(yī)生意見,。3、TRIReagent抽提總RNA的同時,,理論上也可抽提蛋白和DNA,,但未經(jīng)測試。4,、為了您的安全和健康,,請穿實驗服并戴一次性手套操作。是基于異硫氰酸胍/苯酚法的一種即用的從細(xì)胞和組織中提取總RNA的試劑,,在樣品裂解或勻漿過程中取出水相,,用異丙醇可沉淀回收RNA;中間層用乙醇沉淀可回收DNA,;有機相用異丙醇沉淀可回收蛋白,。試劑盒中的吸附柱采用特殊的硅基質(zhì)膜材料。廣州正規(guī)RNA提取試劑服務(wù)電話
RNA提取濃度不高或質(zhì)量不佳原因及解決辦法:1,、得率過低:提取樣本過低總量不足或者提取樣本過多裂解不徹底,;應(yīng)當(dāng)使用適當(dāng)質(zhì)量的組織或細(xì)胞進行提取,樣本前處理一定要做好,,裂解應(yīng)充分,。2、基因組殘留:Trizol法提取時,,分層后吸取上清時吸到中間層會帶來嚴(yán)重的基因組污染,;分層吸取時應(yīng)當(dāng)格外小心,,不要吸取到中間層。如果是采用柱式法提取,,可選擇含有DNaseI的試劑盒進行提取,,吸附在膜上的核酸直接用DNaseI進行消化,可極大限度的降低DNA殘留,。廣州正規(guī)RNA提取試劑服務(wù)電話植物花總RNA提取試劑盒:效去除植物花組織中的多糖,、多酚類等雜質(zhì)。
總RNA提取試劑,,適用于動植物細(xì)胞或組織及細(xì)菌的總RNA抽提,,可有效防止RNA在提取過程中的降解。獲得的RNA可直接用于Northern雜交,,純化mRNA,,體外翻譯,RNase保護實驗,,RT-PCR以及cDNA克隆等一系列操作,。該試劑可用于100次總RNA提取(10平方厘米細(xì)胞或100mg組織),??俁NA提取試劑注意事項:1,RNA提取過程中所用器皿,、離心管,、吸頭等應(yīng)保證無污染無RNA酶。操作中應(yīng)小心,,防止外源性RNA酶污染樣品導(dǎo)致RNA樣品降解,。2,試劑中含有酚等有害物質(zhì),,注意個人防護,。自備新開封或?qū)iT氯仿,異丙醇,,75%乙醇,,DEPC處理水。
RNA提取試劑的選擇:首先,,要確定材料的可用性。盡管現(xiàn)有的RNA提取試劑都用壓制RNase的成分,,但提取的材料仍需謹(jǐn)慎處理,。提取的材料的新鮮度是獲取完整RNA的關(guān)鍵,但是由于種種原因無法立即從新鮮材料中提取RNA時,,使用Takara公司的樣品保護劑SampleProtectorforRNA/DNA可以免去使用液氮或超低溫冰箱的不便,,同時也可以有效解決組織,、細(xì)胞樣品的短時間保存及運輸問題。此外,,如果將不同時期收集的樣品都預(yù)先存放于本試劑中,,可以做到立即終止并固定RNA表達的時序變化,減少實驗組間的誤差,。拭子RNA提取試劑的選擇,?如果離心柱硅膠膜吸附能力不好,裂解液和洗脫液沒有經(jīng)過很好的優(yōu)化,。
目前,,主流的RNA提取方法有Trizol法、離心柱法和磁珠法,。其中,,Trizol法與離心柱法相比,提取效果相當(dāng),,但因其對操作者帶來的毒性,現(xiàn)在越來越被棄用,。磁珠法可以針對大批量樣本處理,,適合機器自動化提取,,但是提取核酸純度低,提取得率低,,且使用成本較高,。對于拭子RNA含量較低的樣本或比較珍貴的樣本或樣本總數(shù)不是很多的實驗室,,選擇的拭子RNA提取方法應(yīng)是離心柱法。近來,,隨著基因診斷技術(shù)的發(fā)展,,從口腔拭子,、泌尿生殖道拭子,、痰液等樣本中進行RNA提取的試劑盒的應(yīng)用價值越來越大,如tumour早期診斷,、遺傳病檢測和病原體傳染核酸檢測等,。拭子RNA提取效果在很大程度上取決于采樣質(zhì)量,、試劑盒性能等,,特別是試劑盒的性能較大影響了拭子核酸的基因檢測和各種研究的開展,。拭子RNA提取試劑的選擇,?離心柱的硅膠膜RNA吸附性能好,、裂解液細(xì)胞裂解能力強,。廣州正規(guī)RNA提取試劑服務(wù)電話
植物RNA提取試劑產(chǎn)品特點:配有高效的DNaseⅠ,,可有效去除DNA污染,。廣州正規(guī)RNA提取試劑服務(wù)電話
RNA提取濃度不高或質(zhì)量不佳原因及解決辦法:1,、RNA降解:可能是提取樣本本身降解,,或者是在提取過程中導(dǎo)致的降級,;應(yīng)當(dāng)盡可能使用新鮮樣本進行RNA提取,,采集的樣本應(yīng)當(dāng)及時置于液氮或者-80℃冰箱凍存,,并減少反復(fù)凍融,。在RNA提取過程中應(yīng)當(dāng)使用RNase/DNasefree的吸頭,、離心管及其他材料,,提取過程盡可能的快,提取后的RNA應(yīng)置于冰盒上并及時放于-80凍存,。如提取后的RNA需要進行凝膠電泳檢測,,則應(yīng)提取好后立刻進行電泳,電泳緩沖液應(yīng)更換新配制的,。2、鹽及有機溶劑殘留:提取試劑中含有酚及胍鹽,,洗滌液中含有乙醇,,在提取過程中裂解液吸棄不徹底,洗液沒有充分晾干導(dǎo)致的,,殘留的鹽及有機溶劑對后續(xù)的逆轉(zhuǎn)錄和PCR均存在不同程度的壓制作用,因此在提取過程中應(yīng)充分去除組織裂解液,,洗滌時應(yīng)充分,,使管壁四周均能被洗滌到,另外管子空離和吹風(fēng)是必須的步驟,會進一步降低有機物殘留,。廣州正規(guī)RNA提取試劑服務(wù)電話