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鼠尾膠原蛋白等實(shí)驗(yàn)技術(shù)應(yīng)用:干細(xì)胞,、血管內(nèi)皮細(xì)胞等多種「難伺候」的細(xì)胞,,以及一些組織在體外培養(yǎng)時(shí),需要在模擬體內(nèi)環(huán)境的細(xì)胞外基質(zhì)中生長(zhǎng),,膠原蛋白和纖粘蛋白正是細(xì)胞外基質(zhì)的主要組成部分,,富含1型膠原蛋白大鼠尾部也成了實(shí)驗(yàn)室用膠原蛋白的較主要來(lái)源。鼠尾取血剪下幾毫米小鼠尾巴,、在小鼠尾靜脈上劃一道小口,、用注射器抽取的操作都可以得到這種鮮紅的。它可以用于監(jiān)測(cè)小鼠血液成分的變化,,確認(rèn)小鼠是否患上了糖尿病或者某些治好能夠改變小鼠的血糖等,。比起心臟和眼部取血,實(shí)驗(yàn)用鼠尾尖取血的取血量較小,,但取血之后,,小鼠還能繼續(xù)下一步建模或者實(shí)驗(yàn),,完全沒(méi)有性命之憂,。可以在無(wú)菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過(guò)夜消毒,。在接種細(xì)胞前用無(wú)菌的水漂洗,。蘇州鼠尾膠原供應(yīng)商
膠原蛋白分離提純實(shí)驗(yàn)方案:提取鼠尾膠原蛋白的實(shí)驗(yàn)步驟:1、使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對(duì)初步處理的鼠尾腱進(jìn)行酶解,,持續(xù)一段時(shí)間待混合物變成無(wú)色,、透明、粘稠液體后即可在4℃,,5000g的離心力下離心20min,,收集上清即為粗制鼠尾膠原蛋白原液。2,、將一定濃度的氯化鈉溶液加入其中,,持續(xù)攪拌直至白色絮狀沉淀從溶液中析出,繼續(xù)加入氯化銨直至沉淀不在析出為止,4℃,,5000g的離心力下離心20min后獲得白色沉淀,。沉淀物加入一定濃度的醋酸溶液中溶解。3,、將溶解后的鼠尾膠原蛋白溶液繼續(xù)反復(fù)進(jìn)行鹽析處理,,重復(fù)步驟2的過(guò)程2~4次。_x005f_x005f_x005f_x000c_鼠尾膠原蛋白經(jīng)SDS-PAGE蛋白質(zhì)電泳,。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,并且制作簡(jiǎn)便,,成本低廉,。開(kāi)封鼠尾膠原廠家供應(yīng)制備鼠尾膠原:將尾腱剪斷置于平皿中,生理鹽水浸泡,。
鼠尾Ⅰ型膠原:材料與方法:1.主要材料,、試劑和儀器鼠尾、鹽酸,、等滲氯化鈉溶液,、鈣液、磷液均購(gòu)自上海晶純生化科技股份有限公司,。日立高新TEMHT770(日本日立公司),;多功能粉末X射線衍射儀。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白取大鼠尾巴洗凈,,用75%的乙醇浸泡5min。將尾巴剪開(kāi),,去掉皮毛,,并剪成小段,抽出銀色的肌腱,。將肌鍵剪斷置于平皿中,,用無(wú)菌等滲氯化鈉溶液浸泡。吸去等滲氯化鈉溶液,,將肌鍵置于平皿中剪碎,,按每克肌鍵50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液。搖晃,,將肌鍵分散于醋酸溶液中,,4℃放置一周,然后以2186×g離心20min,。在醋酸溶液的酸解下,,肌腱水解成膠凍狀凝膠,置于冰箱4℃保存。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,,并且制作簡(jiǎn)便,成本低廉,。
鼠尾膠原蛋白I型,,用那一種膠原酶可以溶解:1.將膠原加入到0.1M的醋酸中,制備成濃度為0.1%的溶液,。在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解,。2.建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。氯仿的量約為膠原溶液的10%,。不要晃動(dòng)或攪拌。在2-8度中放置過(guò)夜,。在無(wú)菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液,。我們不建議用過(guò)濾的方法無(wú)菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會(huì)導(dǎo)致丟失蛋白,。3.稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。4.按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過(guò)夜,。5.從包被表面除去多余的液體,。過(guò)夜干燥。如果膠原溶液不是無(wú)菌的,,這時(shí)候可以在無(wú)菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過(guò)夜消毒,。在接種細(xì)胞前用無(wú)菌的水漂洗。I型膠原蛋白分布非常普遍,,是主纖維束的主要成分,。
生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝,,保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境,,利用同樣濃度的鹽溶液進(jìn)行兩次鹽析與離心,簡(jiǎn)化了提純步驟,。所用酸為低濃度酸溶液,,并采用檸檬酸替代醋酸進(jìn)行提純。從提取原料到樣品生成過(guò)程中,,進(jìn)行多次真空冷凍干燥,,并經(jīng)進(jìn)一步處理獲得含水率在3%以下的膠原蛋白微粉;較后由滅菌,、無(wú)菌包裝,,成品膠原蛋白粉末的純度在98%以上,。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性,提高了產(chǎn)率和生物相容性,,降低了成本,,適用于生物醫(yī)用材料,所得到的膠原蛋白能完整地保留其特有的三股螺旋結(jié)構(gòu),。膠原蛋白就像骨骼中的一張充滿小洞的網(wǎng),,它會(huì)牢牢地留住就要流失的鈣質(zhì)。太原鼠尾膠原直銷價(jià)
整個(gè)操作請(qǐng)?jiān)跓o(wú)菌環(huán)境下無(wú)菌操作,,避免污染以影響細(xì)胞生長(zhǎng),。蘇州鼠尾膠原供應(yīng)商
膠原蛋白的功效與作用:1、可以作為一種補(bǔ)鈣食品,。膠原蛋白的特征氨基酸羥基脯氨酸是血漿中運(yùn)輸鈣到骨細(xì)胞的運(yùn)載工具,,骨細(xì)胞中的骨膠原是羥基磷灰石的黏合劑,它與羥摹磷灰石共同構(gòu)成了骨骼的主體,。因此,,只要攝入足夠的膠原蛋白,就能保證正常機(jī)體鈣質(zhì)的攝入量,,膠原蛋白可成制成補(bǔ)鈣的保健食品,。2、可以為特殊人群使用,。婦科疾病的根源來(lái)自于內(nèi)分泌失調(diào),,膠原蛋白能夠改善婦科疾病的困擾,而更年期的婦女更需要膠原蛋白供給身體所需,,使得更年期婦女能夠更輕松面對(duì)各種不適,。蘇州鼠尾膠原供應(yīng)商