聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,，早先應用于從血清等樣本中收集細菌,，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關,。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低,，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物,，機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等，因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑,。外泌體表面有其特異性標記物（如CD63,、CD9蛋白），用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,，即可將外泌體吸附并分離出來,。磁珠法具有特異性高、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗,，難以普遍普及,。外泌體提取：基于聚合物的沉淀技術,。廣州外泌體提取試劑單價

用于外泌體提取的體液收集注意事項：1,、抽血技巧。操作要輕柔迅速,。試管可翻轉(zhuǎn)8-10次使樣本與抗凝劑混勻,，避免劇烈搖晃?；靹蚝?，將試管固定垂直放置于離心分離器，在頂部記錄抽血的準確時間,，因為抽血與離心之間的時間間隔可能是一個影響因素,。外泌體在抽血后30分鐘內(nèi)是比較穩(wěn)定的，若時間過長將導致外泌體數(shù)量增加,。血小板極易因抽血時的物理因素而并釋放出外泌體,，其中包括接觸、壓力,、切力,。2、抽血時間,。除了血液黏度,，體內(nèi)血液的各項指標在1天中變化很大。生理節(jié)律會對血小板的產(chǎn)生很大的影響,。白細胞的募集和循環(huán)系統(tǒng)中促炎細胞和細胞會隨時間變化,。大量的具有特殊表面分子的微粒也被證明會隨時間變化。目前尚無設計較好的實驗對證實不同時間血液中外泌體的變化,，故應在相同的時間采集樣本,。目前飲食是否會對EV產(chǎn)生影響尚未可知，但是由于脂蛋白可運載RNA且食物的攝取可以影響循環(huán)脂蛋白顆粒的類型,、數(shù)量和作用,，故抽血可在較后一次用餐后一段確定的時間進行,。天津外泌體提取試劑廠家推薦外泌體的特殊結(jié)構和功能,，使得它具有潛在的應用價值，可以作為診斷多種疾病的生物指標,。

CD47是信號調(diào)節(jié)蛋白α（SIRPα,，也稱為CD172a）的配體，CD47-SIRPα間的結(jié)合能夠發(fā)出“不要吃我”的信號，從而壓制吞噬作用,。病基因RAS能夠促進胰腺病細胞增殖,，增強胞飲作用從而促進一些病癥細胞攝取外泌體。合成納米顆粒對細胞有一定毒性作用,，但使用外泌體能夠較小化對細胞的毒性,。研究人員發(fā)現(xiàn)，CD47和病基因KRAS驅(qū)動的胞飲作用都會壓制外泌體被循環(huán)系統(tǒng)的清理,，并增強胰腺病細胞對外泌體的特異性,。所以，外泌體的這種特性增強了它們通過遞送RNAi來特異性靶向胰腺病中的KRAS的能力,，并且使用外泌體作為單一靶向劑顯著改善了所有實驗PDAC小鼠模型的總生存期,。

外泌體的提取方法，先用含無外泌體血清的培養(yǎng)基對人脂肪來源間充質(zhì)干細胞進行饑餓培養(yǎng),，這樣可使干細胞處于正常生長狀態(tài),，不會被克制生長增殖，其所分泌的外泌體所包含的有效物質(zhì)也更貼近其自然狀態(tài)下的外泌體,，然后將含有外泌體的培養(yǎng)上清液進行低速差速離心(即先一離心處理,、再第二離心處理)以去除細胞及其碎片，用100kd超濾管對低速差速離心后的離心液進行超濾濃縮得到外泌體濃度更高的超濾液,，將超濾液經(jīng)過第三離心處理去除雜質(zhì)后直接用0.22μm過濾器過濾除菌,，過濾掉粒徑為220nm以上的物質(zhì)，進一步得到含顆粒粒徑小于220nm的濃縮液,，因超濾濃縮處理和第三離心處理使得液體量濃縮,，這樣過濾除菌效率得到較大提高，較后將濃縮液進行超速離心的第四離心處理分離提取到外泌體,。該外泌體的提取方法,，既結(jié)合了差速離心，又結(jié)合了超濾和超速離心,，通過該提取流程,，較終可高效地從人脂肪來源間充質(zhì)干細培養(yǎng)上清液中提取到高濃度、高純度的外泌體,，具有操作簡單,、成本低，適合產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的特點,。外泌體的分離純化一直是科研工作者關注的問題,，獲得高純度的外泌體對后續(xù)的研究至關重要。

外泌體：已經(jīng)有研究報道了各種Hh的胞外轉(zhuǎn)運機制,，但實際用于體內(nèi)Hh分泌和轉(zhuǎn)運的途徑尚不清楚,。該研究顯示Hh在果蠅翅膀成蟲盤的分泌依賴于運輸所需的內(nèi)體分選復合物（ESCRT）,。在體內(nèi)，產(chǎn)生Hh的細胞中ESCRT活性的降低導致外部細胞表面保留Hh,。此外,，產(chǎn)生Hh的細胞中的ESCRT活性對于長距離信號傳導是必需的。證據(jù)表明Hh和ESCRT蛋白質(zhì)的庫在體內(nèi)一起分泌到細胞外空間中,，并且隨后可以在受體細胞的表面一起被檢測到,。這些發(fā)現(xiàn)揭示了ESCRT蛋白質(zhì)在控制形態(tài)發(fā)生活性中的新功能，揭示了一種新的機制,，通過細胞外囊泡在組織中轉(zhuǎn)運分泌的Hh,，這是長距離靶向誘導所必需的。外泌體的提取有超速離心,、試劑盒,、超濾法、蔗糖密度梯度離心等,，然而各種方法均有其利弊,。重慶外泌體提取試劑進貨價

近幾年來，市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,。廣州外泌體提取試劑單價

外泌體鑒定：外泌體分離之后,，需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標志物,，多角度進行鑒定,。l透射電鏡鑒定法：簡稱TEM，適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構觀察,，即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形,。l納米顆粒追蹤分析法：簡稱NTA，該方法能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測速度快,，檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標志物檢測：外泌體標志蛋白包括四跨膜蛋白家族,，如CD9,、CD63和CD81；細胞質(zhì)蛋白,，如肌動蛋白（Actin）和鈣磷脂結(jié)合蛋白（Annexins）,；使用可截留100KD分子量的膜，通過離心截留上清中的外泌體,，截留完成后廣州外泌體提取試劑單價