細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：細(xì)胞狀態(tài)這點(diǎn)非常重要，不要急于求成,，一定要讓細(xì)胞處于較佳的生長(zhǎng)狀態(tài)再做,。有文獻(xiàn)說(shuō)傳代不要超過(guò)17代。細(xì)胞復(fù)蘇后的3代左右時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較好,，不要用傳了很多代的細(xì)胞去做,，細(xì)胞的形態(tài)都會(huì)發(fā)生變化。大多數(shù)已建立的細(xì)胞系都是非整倍體,，原代培養(yǎng)包括了表達(dá)不同基因組合的細(xì)胞的混合物,。細(xì)胞培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室中保存數(shù)月和數(shù)年后會(huì)經(jīng)歷突變，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化,。這會(huì)導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化,。如果隨時(shí)間發(fā)現(xiàn)這種變化，融化一管新鮮的細(xì)胞可能會(huì)恢復(fù)原先的轉(zhuǎn)染活性,。因此,，如果觀察到轉(zhuǎn)染效率降低，可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細(xì)胞以恢復(fù)較佳結(jié)果,?；蛘撸瑤追N來(lái)源于經(jīng)篩選,，轉(zhuǎn)染效率較高細(xì)胞亞系的細(xì)胞系現(xiàn)在有售轉(zhuǎn)染試劑與細(xì)胞不匹配細(xì)胞轉(zhuǎn)染較適合的不是原代細(xì)胞,。金華正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑

細(xì)胞電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的幾點(diǎn)建議：1.電場(chǎng)強(qiáng)度要合適合適的電場(chǎng)強(qiáng)度對(duì)于電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)非常重要，電場(chǎng)強(qiáng)度不能過(guò)高,，過(guò)高會(huì)增加細(xì)胞的死亡率,；也不能過(guò)低，過(guò)低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔,。不同細(xì)胞系具有不同的較佳場(chǎng)強(qiáng)值,，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)測(cè)定所轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的較佳電場(chǎng)強(qiáng)度。2.細(xì)胞狀態(tài)要好用于電轉(zhuǎn)的細(xì)胞一般選取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞（15代以內(nèi),，傳代后2d）,。因?yàn)樘幱趯?duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞分裂旺盛，表面結(jié)構(gòu)致密比穩(wěn)定期的細(xì)胞差,，電轉(zhuǎn)后,，細(xì)胞膜的恢復(fù)能力強(qiáng)，而且處于有絲分裂期的細(xì)胞更容易接受外源DNA.濟(jì)南正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家批發(fā)價(jià)其可降解性對(duì)體內(nèi)應(yīng)用也具有重要的意義,。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的篩選：生長(zhǎng)的細(xì)胞比不分裂的細(xì)胞更快的受到GENETICIN物品的影響,。轉(zhuǎn)染后,，在開始篩選前等待48-72小時(shí)，使細(xì)胞表達(dá)足夠量的抗性酶,，保證在開始篩選時(shí)可以自我保護(hù),。轉(zhuǎn)染后48-72小時(shí)倒掉培養(yǎng)基，加入含有GENETICIN物品的培養(yǎng)基,，物品的濃度根據(jù)劑量反應(yīng)曲線確定,，足夠殺死未轉(zhuǎn)染細(xì)胞。因?yàn)樵S多因子影響到篩選所需的GENETICIN物品的較佳濃度,，包括細(xì)胞類型,，培養(yǎng)基和血清濃度等，所以有必要對(duì)每種細(xì)胞作一個(gè)劑量反應(yīng)曲線,，確定較佳濃度,。篩選較多可能需要一周時(shí)間，因?yàn)樵谥滤绖┝康腉ENETICIN物品存在條件下,，細(xì)胞會(huì)分裂1-2次,。在次培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)使用較低劑量的物品，一般是篩選劑量的一半,。篩選后的細(xì)胞一般是離散的克隆,，根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌梢苑謩e純化（克?。?，收集進(jìn)行大量培養(yǎng)或染色并進(jìn)行抗性克隆的計(jì)數(shù)。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染簡(jiǎn)介：轉(zhuǎn)染,，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù),。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法,。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑,。電穿孔法,、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^(guò)物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例；化學(xué)介導(dǎo)方法很多,，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法,、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽(yáng)離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù),；生物介導(dǎo)方法,，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見的各種細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法,，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高,、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),，是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法,，同時(shí)具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢(shì)。形成DNA脂復(fù)合物,，也能被表面帶負(fù)電的細(xì)胞膜吸附,。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染常用步驟：1.轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備①將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘,，溶解脂狀物,。②震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存，使用前還需震蕩,。2.選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量)來(lái)轉(zhuǎn)染細(xì)胞,。在一個(gè)轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無(wú)血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA,，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑,，再次震蕩。3.將混合液在室溫放置10―15分鐘,。4.吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,，用PBS或者無(wú)血清培養(yǎng)基清洗一次。5.加入混合液,，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個(gè)小時(shí),。6.到時(shí)后，根據(jù)細(xì)胞種類決定是否移除混合液,，之后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24－48小時(shí)表達(dá)水平與位臵無(wú)關(guān),，不會(huì)受到周圍染色體元件的影響。成都正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家批發(fā)價(jià)

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法陽(yáng)離子脂質(zhì)體表面帶正電荷,。金華正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑

如何有效提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)效率：1.選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同,，但細(xì)胞系的選擇通常是根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要，因此在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和細(xì)胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑,。每種轉(zhuǎn)染試劑都會(huì)提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株列表和文獻(xiàn),，通過(guò)這些資料可選擇較適合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的轉(zhuǎn)染試劑。當(dāng)然,，較適合的是高效,、低毒、方便,、廉價(jià)的轉(zhuǎn)染試劑,。2.保持較佳的細(xì)胞狀態(tài)一般低的細(xì)胞代數(shù)（<50）能確保基因型不變,。較適合轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是經(jīng)過(guò)幾次傳代后達(dá)到指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,，細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛,，較容易轉(zhuǎn)染。細(xì)胞培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室中保存數(shù)月和數(shù)年后會(huì)經(jīng)歷突變,，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化,。這會(huì)導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化。也就是說(shuō)同一種系的細(xì)胞株,，在各實(shí)驗(yàn)室不同培養(yǎng)條件下,，其生物學(xué)性狀發(fā)生不同程度的改變，導(dǎo)致其轉(zhuǎn)染特性也發(fā)生變化,。因此,，如果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率降低，可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細(xì)胞以恢復(fù)較佳結(jié)果,。金華正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑