鼠尾膠原：鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基和一種天然的黏附劑,。實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料：大鼠尾巴,、剪刀,、鑷子、止血鉗,、彎頭吸管,、平皿、三角燒瓶,、燒杯、量筒,、天平,、生理鹽水、75%酒精,、0.1%醋酸溶液,、蓋玻片、培養(yǎng)瓶,、鉆石筆,、鼠尾膠原。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1,、制備鼠尾膠原（兩個同學(xué)一組操作）,。2、切割小玻片,。3,、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi)。制備鼠尾膠原：1,、取大鼠尾巴洗凈,，75%酒精浸泡5分鐘；2,、手持尾巴,，用止血鉗夾住鼠尾的，折斷尾骨后拉出尾腱,；3,、將尾腱剪斷置于平皿中，生理鹽水浸泡,；4,、重復(fù)步驟2、3,，直至尾腱量夠用,；5、吸去生理鹽水,，將尾腱稱重（0.5-1克）,；6,、將尾腱置于平皿內(nèi)剪碎，轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中,；7,、按每克尾腱50ml的比例，加入0.1%醋酸溶液,；8,、搖晃，使尾腱分散于醋酸溶液中,，4℃放置一星期,；9、離心,，4000轉(zhuǎn)/分,，10-15分鐘；10,、吸取上清,，分裝成小瓶，4℃保存,。前庭毛細(xì)胞貼附于培養(yǎng)皿底壁,，易于封接和長時間（約8h)的觀察和記錄。太原鼠尾膠原廠家直銷

鼠尾膠原蛋白耗子尾汁還能變得更加,，一種被稱作鼠尾膠原蛋白的“珍貴”液體就來自大鼠的尾巴,，制作過程需要經(jīng)歷醋酸抽提、氯化鈉沉淀和磷酸氫二鈉沉淀等步驟,，才能從鼠尾中獲得珍貴的膠原蛋白,。這種膠原蛋白在37℃的條件下會形成3股螺旋結(jié)構(gòu)，可以用來當(dāng)作細(xì)胞培養(yǎng)的基質(zhì),。細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，細(xì)胞需要貼附在培養(yǎng)皿表面（懸浮培養(yǎng)細(xì)胞除外）才能完成生長過程，而有一些細(xì)胞卻總是不太給力,，自己完成不了貼壁過程或者貼壁困難,，這個時候鼠尾膠原蛋白就能承擔(dān)起讓細(xì)胞更容易貼壁的作用。這一步也被稱作涂層（coating）,，給培養(yǎng)皿涂上了一層膠原蛋白后,，細(xì)胞就能更好地貼附上去，除了培養(yǎng)皿,，一些需要使用海藻碳酸鈣微球培養(yǎng)得細(xì)胞,，同樣也可以用鼠尾膠原蛋白協(xié)助細(xì)胞貼壁生長。鼠尾膠原使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對初步處理的鼠尾腱進(jìn)行酶解。

I型鼠尾膠原是借鑒NavneetaRajan,JasonHabermehl法,，經(jīng)過乙酸抽提,、離心、滅菌,、透析等步驟制備得到的高純度,、高活性膠原蛋白，屬于醫(yī)藥級別產(chǎn)品,，可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿（單分子層包被）,，適合多種類型細(xì)胞的貼壁如肝臟細(xì)胞、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,、胚胎細(xì)胞,、肌細(xì)胞、肺細(xì)胞,、神經(jīng)鞘細(xì)胞等。I型膠原蛋白包被細(xì)胞培養(yǎng)板,，規(guī)格為6/24孔板,，表面經(jīng)I型膠原蛋白包被，可以很好的降低蛋白質(zhì)的吸附,。使用這種細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)細(xì)胞,，可以獲得良好的細(xì)胞貼壁率，細(xì)胞增殖速度快,，形態(tài)均一,，細(xì)胞培養(yǎng)成功率高。

鼠尾Ⅰ型膠原：組裝液的配置：1.50mmol/L甘氨酸+200mmol/L氯化鉀100mL,，用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)酸堿度至9.2,。2.膠原纖維的重構(gòu)吸取膠原10μL至小培養(yǎng)皿中，倒入0.5mL自組裝液,，室溫放置20min,。予自組裝液自組裝24h。吸取0.05%戊二醛2mL至小培養(yǎng)皿中,，將自組裝24h的膠原浸泡在戊二醛中,。然后將膠原經(jīng)去離子水、50%乙醇,、100%乙醇依次漂洗后進(jìn)行TEM觀察,。3.生物礦化形成仿生骨材料靜滴配置鈣磷礦化液將25mL鈣液(10mmol/L二水氯化鈣+150mmol/L氯化鈉+50mmol/L三羥甲基氨基甲烷+0.02%三氮化鈉)倒入燒杯中，滴入聚丙烯(PAA)至濃度350μg/mL,；滴加1mol/L的氯化氫,，調(diào)節(jié)酸堿度至7.4，然后緩慢滴入25mL磷液(6mmol/L磷酸氫二鈉)，約16滴/min,。生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝，保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境,。

鼠尾膠原實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用,。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的效果,。結(jié)果：自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞,，細(xì)胞角蛋白18表達(dá)陽性，免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的分泌上皮細(xì)胞特征,。結(jié)論：成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法,，并且制作簡便,成本低廉。膠原蛋白是脊椎動物和無脊椎動物支持結(jié)構(gòu)的主要組成,。武漢正規(guī)鼠尾膠原推薦廠家

將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,，制備成濃度為0.1%的溶液。太原鼠尾膠原廠家直銷

鼠尾膠原包被培養(yǎng)板：胎干細(xì)胞在體外可誘導(dǎo)分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞,進(jìn)而形成血管,因而成為血管組織工程理想的種子細(xì)胞來源之一,。目的:探討建立定向誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的方法,。方法:在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層上培養(yǎng)人胚胎干細(xì)胞H1,將H1細(xì)胞團(tuán)塊轉(zhuǎn)移到鼠尾膠原包被的培養(yǎng)板,貼壁24-48h后,培養(yǎng)基換為含不同輔助因子和內(nèi)皮細(xì)胞生長添加劑的EGM-2內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基。結(jié)果與結(jié)論:①在EGM-2內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基誘導(dǎo)下,細(xì)胞逐步表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)記基因VEGFR-2,、PECAM1,、vWF、CD34,、VE-cadherin,、GATA-2。②分化細(xì)胞表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)記VE-cadherin,、CD31,。③分化細(xì)胞具有吞噬低密度脂蛋白功能。說明將人胚胎干細(xì)胞接種在鼠尾膠原包被培養(yǎng)板上,通過EGM-2內(nèi)皮培養(yǎng)體系誘導(dǎo),可直接分化為功能性血管內(nèi)皮細(xì)胞,。為研究胞外基質(zhì)對誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的作用以及相關(guān)信號分子機(jī)制打下了基礎(chǔ),。太原鼠尾膠原廠家直銷