細(xì)胞凍存經(jīng)驗(yàn)談:選對(duì)凍存培養(yǎng)基才是王道：研究人員經(jīng)常需要冷凍細(xì)胞并保存，以供后續(xù)實(shí)驗(yàn)或臨床使用,?；具^(guò)程相當(dāng)簡(jiǎn)單：慢慢冷凍細(xì)胞，將凍存管放入液氮中,，并在需要時(shí)快速解凍,。凍存培養(yǎng)基能支持細(xì)胞并防止冰晶形成。不過(guò),，Malfavon的體驗(yàn)告訴我們,，使用不同的凍存培養(yǎng)基，結(jié)果那可是大不同,。一些經(jīng)驗(yàn)老道的研究人員自己制備凍存培養(yǎng)基,。不過(guò)，那些面對(duì)脆弱細(xì)胞（比如原代和多能細(xì)胞）的研究人員,，則更喜歡購(gòu)買標(biāo)準(zhǔn)化的商業(yè)產(chǎn)品,。一些非常敏感的細(xì)胞系也許能從添加物中受益，以避免細(xì)胞在解凍時(shí)凋亡,。血清批次,、品質(zhì)間差異導(dǎo)致凍存液的批次間差異。杭州深圳無(wú)血清細(xì)胞凍存液

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的原則是：慢凍速融,，這樣更加有利于保持細(xì)胞的活力,。凍存細(xì)胞不加任何保護(hù)劑，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生,，從而使細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機(jī)械損傷,，引起細(xì)胞內(nèi)環(huán)境滲透壓，PH,，電解質(zhì)等的改變,，進(jìn)而促使細(xì)胞死亡,。在過(guò)去的幾十年中，科研工作者將培養(yǎng)基,、血清和DMSO按照一定的比例配制成凍存液,，并配合手工使細(xì)胞從4℃，-20℃,，-80℃到液氮中逐步轉(zhuǎn)移使其達(dá)到“慢凍”的效果,。但這種自制的凍存液儲(chǔ)存時(shí)間一般比較短，不能滿足時(shí)間跨度大的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的需求,。且這樣人力和時(shí)間成本大,，人手操作的誤差和血清制品的批間差也給實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來(lái)了不穩(wěn)定性。珠海正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液服務(wù)電話無(wú)血清細(xì)胞凍存液使用方法：選擇凍存處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞有助于提高復(fù)蘇細(xì)胞存活率,。

細(xì)胞凍存,，我們應(yīng)該注意哪些事項(xiàng)：1,、凍存細(xì)胞是為了留種,，所以要選擇高濃度的細(xì)胞量進(jìn)行凍存。正常情況下,，當(dāng)細(xì)胞濃度達(dá)到1*105/ml時(shí)即可凍存,，具體是多少量主要根據(jù)個(gè)人觀察。2,、二甲基亞砜（DMSO)因?yàn)榇┩讣?xì)胞的能力較強(qiáng),，因此作為常用的凍存劑，也可以叫做細(xì)胞保護(hù)劑加入到細(xì)胞懸液中,。網(wǎng)上有些分享說(shuō)道,，如果選用DMSO，整個(gè)細(xì)胞懸液的制作過(guò)程都要在4℃環(huán)境下進(jìn)行,。本人采用過(guò)這種方法凍存過(guò)A549和某一原代細(xì)胞,，發(fā)現(xiàn)A549復(fù)蘇存活率和正常凍存的過(guò)程相比并沒有明顯區(qū)別，而原代細(xì)胞的接種率確實(shí)有所上升,，可能是因?yàn)槭茿549細(xì)胞比較皮實(shí),，這種方法更適用于比較脆弱的細(xì)胞吧。

無(wú)血清細(xì)胞凍存液對(duì)比含血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢(shì)：傳統(tǒng)的細(xì)胞凍存液是使用培養(yǎng)基,、血清和DMSO按照一定的比例混合,，其中DMSO的含量是10%，血清的含量是10%,，統(tǒng)稱為含血清細(xì)胞凍存液,。含血清細(xì)胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,，然后移至-20℃冰箱30分鐘,，再移至-80℃冰箱保存16-18個(gè)小時(shí)（或隔夜）,，較后才移至液氮罐中進(jìn)行長(zhǎng)期的儲(chǔ)存。（其中需要注意的是-20℃條件下不可超過(guò)1個(gè)小時(shí),，以防止冰晶過(guò)大,，造成細(xì)胞大量的死亡。）無(wú)血清凍存液特性：適合無(wú)血清培養(yǎng)細(xì)胞與含血清培養(yǎng)細(xì)胞,。

細(xì)胞凍存液的操作步驟：1.配置含10%DMSO或凡士林,、10～20%小牛血清的凍存細(xì)胞培養(yǎng)液;2.取對(duì)數(shù)成長(zhǎng)期的體細(xì)胞，除去舊細(xì)胞培養(yǎng)液,，用PBS清理,。3.除去PBS，添加適量蛋白酶(遮蓋細(xì)胞培養(yǎng)皿表層)把單面生長(zhǎng)發(fā)育的體細(xì)胞消化吸收出來(lái);4.抽濾1000rpm,，5min;5.除去蛋白酶,，添加適量配置好的凍存細(xì)胞培養(yǎng)液，用塑料吸管輕輕地吹打使體細(xì)胞勻稱,，記數(shù),，調(diào)整凍存液中體細(xì)胞的較后相對(duì)密度為5牙周106/ml～1牙周107/ml;6.將體細(xì)胞分裝進(jìn)凍存管中，每管1～1.5ml;7.在凍存管上標(biāo)出體細(xì)胞的名字,，凍存時(shí)間及作業(yè)者;8.凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序流程為減溫速度-1～-2℃/min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃下列時(shí),，可升至-5℃～-10℃/min;到-100℃時(shí)，則可快速滲入液態(tài)氮中,。無(wú)血清凍存液使用方法：加入適量的細(xì)胞凍存液,，重懸細(xì)胞，調(diào)節(jié)密度至1-5x10*↑/mL,。徐州正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液

無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品性能：凍存液含DMSO,、葡萄糖等各種細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)成分。杭州深圳無(wú)血清細(xì)胞凍存液

無(wú)血清細(xì)胞凍存液：解凍解凍后,，應(yīng)該立即鋪板在預(yù)先包被好的培養(yǎng)皿中,。上述凍存的一管細(xì)胞可以成功的鋪板到6孔板的1-2孔。1.開始之前,，提前準(zhǔn)備好以下材料：試管,，恢復(fù)至室溫的培養(yǎng)基，預(yù)先包被的培養(yǎng)板,，確保整個(gè)解凍復(fù)蘇程序可以在較短的時(shí)間內(nèi)完成,。注意：不要在37°C水浴中加熱培養(yǎng)基。2.在37°C水浴中快速解凍,，持續(xù)溫和的在水中晃動(dòng)凍存管,，直到剩余少量細(xì)胞還處于凍存狀態(tài)。3.水浴中取出凍存管，用70%的酒精或異丙醇擦拭除菌,。4.用2mL的血清移液管把細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到一個(gè)15mL的錐形試管,。注意：用2mL的血清移液管代替1mL的頭可以減少細(xì)胞聚集體的分解。杭州深圳無(wú)血清細(xì)胞凍存液