細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)簡介：實(shí)驗(yàn)材料與器材：1,、材料293T細(xì)胞,、MyoD表達(dá)質(zhì)粒和EGFP表達(dá)質(zhì)粒、DMEM培養(yǎng)基,、鏈霉素/青霉素(雙抗),、FCS(小牛血清),、PBS(磷酸鹽緩沖溶液)、胰酶/EDTA消化液,、轉(zhuǎn)染試劑(TransFast)2,、器材20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip頭酒精燈、廢液缸,、血球計(jì)數(shù)板,、渦旋振蕩器、恒溫水浴箱,、臺(tái)式離心機(jī),、35mm培養(yǎng)皿、轉(zhuǎn)染管,、15ml離心管,、觀察用倒置顯微鏡熒光顯微鏡和CCD。利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法較重要的就是防止其毒性,，因此脂質(zhì)體與質(zhì)粒的比例,，細(xì)胞密度以及轉(zhuǎn)染的時(shí)間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要問題,，通過實(shí)驗(yàn)摸索的合適轉(zhuǎn)染條件對(duì)于效率的提高有巨大的作用。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中,。上海濟(jì)南細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù),。分為物理介導(dǎo)方法：電穿孔法、顯微注射和基因,；化學(xué)介導(dǎo)方法：如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法,、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù),；生物介導(dǎo)方法：有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,，和現(xiàn)在比較多見的各種細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法,，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高,、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),，是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法,，同時(shí)具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢(shì),。但是細(xì)菌轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜，常常對(duì)細(xì)胞類型有很強(qiáng)的選擇性,，在一般實(shí)驗(yàn)室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法,，則各有其特點(diǎn),。需要指出的一點(diǎn),，無論采用哪種轉(zhuǎn)染技術(shù),，要獲得較優(yōu)的轉(zhuǎn)染結(jié)果,，可能都需要對(duì)轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行優(yōu)化,。影響轉(zhuǎn)染效率的因素很多,，從細(xì)胞類型,、細(xì)胞培養(yǎng)條件和細(xì)胞生長狀態(tài)到轉(zhuǎn)染方法的操作細(xì)節(jié)。上海濟(jì)南細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染是將外源遺傳物質(zhì)導(dǎo)入真核細(xì)胞的過程，是細(xì)胞和分子生物學(xué)研究的重要工具,。

細(xì)胞電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的幾點(diǎn)建議：1.電場(chǎng)強(qiáng)度要合適合適的電場(chǎng)強(qiáng)度對(duì)于電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)非常重要，電場(chǎng)強(qiáng)度不能過高,，過高會(huì)增加細(xì)胞的死亡率；也不能過低,，過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔,。不同細(xì)胞系具有不同的較佳場(chǎng)強(qiáng)值,，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)測(cè)定所轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的較佳電場(chǎng)強(qiáng)度,。2.細(xì)胞狀態(tài)要好用于電轉(zhuǎn)的細(xì)胞一般選取處于對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞（15代以內(nèi),，傳代后2d）。因?yàn)樘幱趯?duì)數(shù)生長期的細(xì)胞分裂旺盛,，表面結(jié)構(gòu)致密比穩(wěn)定期的細(xì)胞差，電轉(zhuǎn)后,，細(xì)胞膜的恢復(fù)能力強(qiáng),，而且處于有絲分裂期的細(xì)胞更容易接受外源DNA~

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：細(xì)胞狀態(tài)這點(diǎn)非常重要，不要急于求成,，一定要讓細(xì)胞處于較佳的生長狀態(tài)再做,。有文獻(xiàn)說傳代不要超過17代。細(xì)胞復(fù)蘇后的3代左右時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較好,，不要用傳了很多代的細(xì)胞去做,，細(xì)胞的形態(tài)都會(huì)發(fā)生變化。大多數(shù)已建立的細(xì)胞系都是非整倍體,，原代培養(yǎng)包括了表達(dá)不同基因組合的細(xì)胞的混合物,。細(xì)胞培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室中保存數(shù)月和數(shù)年后會(huì)經(jīng)歷突變，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化,。這會(huì)導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化,。如果隨時(shí)間發(fā)現(xiàn)這種變化，融化一管新鮮的細(xì)胞可能會(huì)恢復(fù)原先的轉(zhuǎn)染活性,。因此,，如果觀察到轉(zhuǎn)染效率降低，可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細(xì)胞以恢復(fù)較佳結(jié)果,?；蛘?，幾種來源于經(jīng)篩選,，轉(zhuǎn)染效率較高細(xì)胞亞系的細(xì)胞系現(xiàn)在有售~一般的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染 方法多采用脂質(zhì)體法,。

細(xì)胞電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的幾點(diǎn)建議：1.電場(chǎng)強(qiáng)度要合適合適的電場(chǎng)強(qiáng)度對(duì)于電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)非常重要,，電場(chǎng)強(qiáng)度不能過高,，過高會(huì)增加細(xì)胞的死亡率,；也不能過低,，過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔,。不同細(xì)胞系具有不同的較佳場(chǎng)強(qiáng)值,，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)測(cè)定所轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的較佳電場(chǎng)強(qiáng)度,。2.細(xì)胞狀態(tài)要好用于電轉(zhuǎn)的細(xì)胞一般選取處于對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞（15代以內(nèi)，傳代后2d）,。因?yàn)樘幱趯?duì)數(shù)生長期的細(xì)胞分裂旺盛，表面結(jié)構(gòu)致密比穩(wěn)定期的細(xì)胞差,，電轉(zhuǎn)后,，細(xì)胞膜的恢復(fù)能力強(qiáng),，而且處于有絲分裂期的細(xì)胞更容易接受外源DNA.再通過融合或細(xì)胞內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞,。貴陽細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)貨價(jià)

是目前實(shí)驗(yàn)室較方便的轉(zhuǎn)染方法之一,，其轉(zhuǎn)染率較高，優(yōu)于磷酸鈣法,。上海濟(jì)南細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑

如何有效提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)效率：1.選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同，但細(xì)胞系的選擇通常是根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要,，因此在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和細(xì)胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。每種轉(zhuǎn)染試劑都會(huì)提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株列表和文獻(xiàn),，通過這些資料可選擇較適合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的轉(zhuǎn)染試劑。當(dāng)然,，較適合的是高效,、低毒,、方便、廉價(jià)的轉(zhuǎn)染試劑,。2.保持較佳的細(xì)胞狀態(tài)一般低的細(xì)胞代數(shù)（<50）能確?；蛐筒蛔?。較適合轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是經(jīng)過幾次傳代后達(dá)到指數(shù)生長期的細(xì)胞,，細(xì)胞生長旺盛,，較容易轉(zhuǎn)染,。細(xì)胞培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室中保存數(shù)月和數(shù)年后會(huì)經(jīng)歷突變，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化,。這會(huì)導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化。也就是說同一種系的細(xì)胞株,，在各實(shí)驗(yàn)室不同培養(yǎng)條件下,，其生物學(xué)性狀發(fā)生不同程度的改變，導(dǎo)致其轉(zhuǎn)染特性也發(fā)生變化,。因此,，如果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率降低，可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細(xì)胞以恢復(fù)較佳結(jié)果,。上海濟(jì)南細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑