外泌體與肺病預(yù)后：外泌體mirRNA和蛋白質(zhì)被認(rèn)為是NSCLC的預(yù)后因子,。Dejima等在研究NSCLC患者預(yù)后的生物標(biāo)志物時(shí)發(fā)現(xiàn)，外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升,。此外,，還有研究表明，低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復(fù)發(fā)率,。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時(shí)發(fā)現(xiàn),，NY-ESO-1是其中對(duì)低生存率有顯著影響的標(biāo)志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統(tǒng)分析了28位NSCLC患者體內(nèi)的365種miRNA,，其中l(wèi)et-7f,、miR-30e-3p和miR-20b表達(dá)均下調(diào)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，let-7f和miR-30e-3p水平可以區(qū)分早期和晚期NSCLC患者,，高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預(yù)后密切相關(guān),。首先在無(wú)菌條件下提取人體體液，并用PBS緩沖液進(jìn)行稀釋,。南京正規(guī)外泌體提取試劑推薦廠家

外泌體提?。撼叽缗抛枭V。尺寸排阻色譜（Size-exclusionchromatography,，SEC）是基于大小而非分子量實(shí)現(xiàn)分離大分子,。該技術(shù)應(yīng)用填充多孔聚合物微球的柱子，分子根據(jù)其直徑通過(guò)微球,，半徑小的分子需要更長(zhǎng)的時(shí)間才能通過(guò)色譜柱的孔隙遷移，而大分子則從色譜柱中更早地洗脫,。尺寸排阻色譜可以精確分離大小分子,。此外，可以將不同的洗脫溶液應(yīng)用于該方法,。與離心方法相比,，色譜分離已被證明具有更多優(yōu)勢(shì)，因?yàn)橥ㄟ^(guò)色譜分離的外泌體不受剪切力的影響,，這可能會(huì)改變囊泡的結(jié)構(gòu),。目前，SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中外泌體的技術(shù),。不過(guò),，該方法耗時(shí)較長(zhǎng)，不適合大量樣本處理,。南京正規(guī)外泌體提取試劑推薦廠家在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊,、細(xì)胞遷移、促血管新生和抗一些病癥免疫等生理過(guò)程,，與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān),。

專(zhuān)利申請(qǐng)利用分離培養(yǎng)人尿液來(lái)源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基來(lái)進(jìn)行體外培養(yǎng)，直接把外泌體從尿液中沉降下來(lái),，無(wú)須分離培養(yǎng)人尿液來(lái)源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基,。人尿液來(lái)源細(xì)胞的外泌體的獲取方法，是首先分離培養(yǎng)人尿液來(lái)源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基,，將人尿液來(lái)源細(xì)胞的培養(yǎng)基通過(guò)0.22微米濾膜過(guò)濾,，以去除大的細(xì)胞殘片以及其它雜質(zhì)；然后離心除去細(xì)胞器,，留取上清,；再使用可截留100KD分子量的膜，通過(guò)離心截留上清中的外泌體，截留完成后,，使用PBS對(duì)膜進(jìn)行洗脫即得到外泌體濃縮液,。

當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時(shí)，外泌體可通過(guò)其攜帶的蛋白質(zhì),、核酸,、脂類(lèi)等來(lái)調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過(guò)以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合,，進(jìn)而啟動(dòng)靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路,。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合,，從而啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。有報(bào)道稱一些外泌體膜上蛋白在其來(lái)源細(xì)胞膜上未能檢測(cè)出,。三是外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合,，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA,。人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體,，包括內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞,、血小板,、平滑肌細(xì)胞等。外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,，不利于下游實(shí)驗(yàn),，難以普遍普及。

外泌體的提取,、分離方法：免疫親和層析法,。免疫親和層析法是利用生物體內(nèi)存在的抗原、抗體之間高度特異性的親和力進(jìn)行分離的方法,，主要用于生物大分子的分離,、純化。將其應(yīng)用于外泌體的分離主要是借助外泌體表面的特異性抗體,，如TSG101或四跨膜蛋白,。此方法的原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合，只有囊泡表面有特異性的抗體才可以被識(shí)別,，這使得提取的外泌體純度高,，但是產(chǎn)量低。Zarovni等分別用超速離心,、密度梯度離心和免疫層析法,，從血漿和細(xì)胞上清中提取外泌體蛋白，結(jié)果表明，免疫親和層析法得到的外泌體表面存在多種標(biāo)記蛋白(Alix,、CD9,、CD63)，同時(shí),，ELISA和PCR結(jié)果也證明了該方法的可行性,。外泌體在免疫中抗原呈遞、一些病癥的生長(zhǎng)與遷移,、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用,。南京正規(guī)外泌體提取試劑推薦廠家

聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀。南京正規(guī)外泌體提取試劑推薦廠家

腦組織分離方法簡(jiǎn)述：將腦組織剪成薄片,，放入離心管中加上消化液進(jìn)行消化,，經(jīng)水浴、反復(fù)輕輕上下顛倒,，再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束,。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中，混勻,，置于冰上。再進(jìn)行一系列的差速超速離心過(guò)程,，包括除雜,、濾膜過(guò)濾、超離等,。較后用PBS重懸外泌體,，用重懸后的外泌體進(jìn)行下面的透射電鏡（TEM）、納米粒徑追蹤分子（NTA）和markerWB鑒定,。外泌體（Exosomes）是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡（ExtracellularVesicles,，EVs），其大小為30-150nm,，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等）,，參與細(xì)胞間的分子傳遞,。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，包括血液,、唾液,、尿液、,、乳汁等,，同時(shí)也存在于組織樣本中，如腦組織、肌肉組織,、脂肪組織等,。南京正規(guī)外泌體提取試劑推薦廠家