細胞轉(zhuǎn)染的注意事項：細胞狀態(tài)這點非常重要，不要急于求成,，一定要讓細胞處于較佳的生長狀態(tài)再做,。有文獻說傳代不要超過17代。細胞復蘇后的3代左右時細胞狀態(tài)較好,，不要用傳了很多代的細胞去做,，細胞的形態(tài)都會發(fā)生變化。大多數(shù)已建立的細胞系都是非整倍體,，原代培養(yǎng)包括了表達不同基因組合的細胞的混合物,。細胞培養(yǎng)在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化,。這會導致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細胞行為的變化,。如果隨時間發(fā)現(xiàn)這種變化，融化一管新鮮的細胞可能會恢復原先的轉(zhuǎn)染活性,。因此,，如果觀察到轉(zhuǎn)染效率降低，可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細胞以恢復較佳結(jié)果?；蛘?，幾種來源于經(jīng)篩選，轉(zhuǎn)染效率較高細胞亞系的細胞系現(xiàn)在有售~再通過融合或細胞內(nèi)吞進入細胞,。上海細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家供應

轉(zhuǎn)染方式：細胞由帶負電荷的磷脂雙分子層構(gòu)成,，這對大分子物質(zhì)來說是個不可透過的屏障，比如DNA和RNA的磷酸骨架,，其也帶負電荷,。為了使核酸穿過細胞膜，研究人員開發(fā)了多種技術(shù),，大致分為三類：化學方法---利用載體分子包被核酸使其呈現(xiàn)中性電荷或正電荷,。生物方法---利用基因工程細菌轉(zhuǎn)染非細菌基因到細胞中。物理方法---在細胞膜表面產(chǎn)生一個瞬時的孔從而導入DNA,。然而,，沒有一種方法適用于所有的細胞和實驗，理想的方法應根據(jù)您的細胞類型和實驗需要進行選擇,，理想的方法應具有高轉(zhuǎn)染效率,，低細胞毒性和對正常生理學的影響較小，并且易于使用和可重復性等特點,。南京正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑進貨價在瞬時轉(zhuǎn)染質(zhì)粒中往往都含有一個報告基,。

細胞轉(zhuǎn)染的注意事項：血清A、DNA-陽離子脂質(zhì)體復合物形成時不能含血清,，因為血清會影響復合物的形成,。B、一般細胞對無血清培養(yǎng)可以耐受幾個小時沒問題,，轉(zhuǎn)染用的培養(yǎng)液可以含血清也可以不加,，但血清一度曾被認為會降低轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中加入血清需要對條件進行優(yōu)化,。C,、對于對血清缺乏比較敏感的細胞，可以使用營養(yǎng)豐富的無血清培養(yǎng)基,，或者在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中使用血清,。對血清缺乏比較敏感的貼壁細胞，建議使用**轉(zhuǎn)染試劑,。有條件的話,，可以用無血清培養(yǎng)基代替PBS洗細胞兩遍，注意洗的時候要輕,，靠邊緣緩緩加入液體,，然后不要吹吸細胞而是轉(zhuǎn)動培養(yǎng)板讓液體滾動在細胞表面,。如果洗的太厲害，細胞又損失一部分,，加了脂質(zhì)體后,，細胞受影響就更大了，死亡細胞會增多

細胞轉(zhuǎn)染常用步驟：1.轉(zhuǎn)染試劑的準備①將400ul去核酸酶水加入管中,，震蕩10秒鐘,，溶解脂狀物。②震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存,，使用前還需震蕩,。2.選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細胞。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基,。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA,，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩,。3.將混合液在室溫放置10―15分鐘,。4.吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次,。5.加入混合液,，將細胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時。6.到時后,，根據(jù)細胞種類決定是否移除混合液,，之后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24－48小時。轉(zhuǎn)染試劑的準備①將400ul去核酸酶水加入管中,，震蕩10秒鐘,，溶解脂狀物,。

細胞電轉(zhuǎn)染實驗的幾點建議：1.電場強度要合適合適的電場強度對于電轉(zhuǎn)染實驗非常重要,，電場強度不能過高，過高會增加細胞的死亡率,；也不能過低,，過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同細胞系具有不同的較佳場強值,，實驗前應測定所轉(zhuǎn)染細胞系的較佳電場強度,。2.細胞狀態(tài)要好用于電轉(zhuǎn)的細胞一般選取處于對數(shù)生長期的細胞（15代以內(nèi)，傳代后2d）,。因為處于對數(shù)生長期的細胞分裂旺盛,，表面結(jié)構(gòu)致密比穩(wěn)定期的細胞差，電轉(zhuǎn)后,，細胞膜的恢復能力強,，而且處于有絲分裂期的細胞更容易接受外源DNA~蛋白表達和培養(yǎng)基的選擇哺乳動物細胞系合成可溶的,。南京正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑進貨價

表達水平與位臵無關(guān)，不會受到周圍染色體元件的影響,。上海細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家供應

如何提高細胞轉(zhuǎn)染實驗效率：優(yōu)化細胞生長狀態(tài)密切觀察您的細胞;確保它們狀態(tài)良好,。在開始轉(zhuǎn)染細胞之前，先制定一個適當?shù)姆N板方案,，使細胞密度從轉(zhuǎn)染開始到結(jié)束都保持較佳狀態(tài),。增加成功幾率—細胞是轉(zhuǎn)染過程中的一個關(guān)鍵元素，它可以是影響結(jié)果的一致性和質(zhì)量的較重要的變量,。此外,，還常用促有絲分裂刺激物(如，細菌轉(zhuǎn)化,，生長因子,，條件培養(yǎng)基，以及滋養(yǎng)細胞)來活化原代培養(yǎng)細胞,。貼壁細胞相比較懸浮細胞—在轉(zhuǎn)染效率方面貼壁細胞和懸浮細胞之間的差異明顯,。天生趨于懸浮的細胞(如HL60，Jurkat)非常難以轉(zhuǎn)染,。相反,，天生為貼壁的細胞(如HEK，CHO)則可適應懸浮生長的條件,。上海細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家供應