細胞轉(zhuǎn)染的常用方法：人工脂質(zhì)體法原理：帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復(fù)合物,，進而可被細胞內(nèi)吞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染/瞬時性轉(zhuǎn)染,。這種方法幾乎適用于所有細胞，轉(zhuǎn)染效率高,、重復(fù)型好,，但轉(zhuǎn)染時需要去除血清，轉(zhuǎn)染效果隨細胞類型變化大,。實驗步驟：在單獨試管中分別稀釋核酸及轉(zhuǎn)染試劑→脂質(zhì)體與核酸的磷酸骨架結(jié)合,，形成復(fù)合物→脂質(zhì)體上的正電荷有助于復(fù)合物與細胞膜結(jié)合→復(fù)合物通過內(nèi)吞作用進入胞漿→分析細胞瞬時基因表達或沉默情況。較適合轉(zhuǎn)染的細胞是經(jīng)過幾次傳代后達到對數(shù)生長期的細胞,。青島細胞高效轉(zhuǎn)染試劑

DNA細胞轉(zhuǎn)染步驟：1.提前現(xiàn)在細胞鋪板提前現(xiàn)在將細胞種植在24孔板中,，以轉(zhuǎn)染時細胞密度在60％左右為宜。2.轉(zhuǎn)染過程⑴將0.8μg的DNA用25μl無血清稀釋液稀釋,，充分混勻，制成DNA稀釋液,。注意：無血清稀釋液建議采用OPTI-MEM,、無血清DMEM或1640,。⑵將2μlEntransterTM-H4000用25μl無血清稀釋液體稀釋，充分混勻,，制成EntransterTM-H4000稀釋液。室溫靜置5分鐘,。⑶將EntransterTM-H4000稀釋液分別加入到DNA稀釋液中,，充分混勻（可用振蕩器振蕩或用加樣器吹吸10次以上）,，室溫靜置15分鐘。轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備完成,。⑷將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入到含細胞和完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器上，輕柔混勻,。注意：①對本試劑，采用含血清的全培養(yǎng)基有助于提升轉(zhuǎn)染效率,。②完全培養(yǎng)基可加物品,。長沙細胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家好轉(zhuǎn)染 ，是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術(shù),。

細胞轉(zhuǎn)染的注意事項：血清A,、DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物形成時不能含血清,，因為血清會影響復(fù)合物的形成,。B,、一般細胞對無血清培養(yǎng)可以耐受幾個小時沒問題,，轉(zhuǎn)染用的培養(yǎng)液可以含血清也可以不加,，但血清一度曾被認為會降低轉(zhuǎn)染效率,，轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中加入血清需要對條件進行優(yōu)化,。C,、對于對血清缺乏比較敏感的細胞,，可以使用營養(yǎng)豐富的無血清培養(yǎng)基,，或者在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中使用血清,。對血清缺乏比較敏感的貼壁細胞,，建議使用**轉(zhuǎn)染試劑。有條件的話,，可以用無血清培養(yǎng)基代替PBS洗細胞兩遍,，注意洗的時候要輕，靠邊緣緩緩加入液體,，然后不要吹吸細胞而是轉(zhuǎn)動培養(yǎng)板讓液體滾動在細胞表面,。如果洗的太厲害,，細胞又損失一部分,，加了脂質(zhì)體后,，細胞受影響就更大了,，死亡細胞會增多

細胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.準(zhǔn)備不足做脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的時候,，在開展正式實驗前要多做預(yù)試驗，優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件,。優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件包括：脂質(zhì)體的用量、DNA密度,、細胞密度、脂質(zhì)體和DNA混合孵育時間等等,。2.電壓過大做電轉(zhuǎn)的時候，如果電壓太大,，往往會發(fā)生細胞大量死亡的情況,。不同的細胞,，需要的電壓是不一樣的。這就要求我們多做預(yù)實驗,，多摸索條件,。對于大多數(shù)細胞來說,，其較佳電壓位于250-1250v/cm。另外,，就是進行轉(zhuǎn)染的細胞應(yīng)該處于對數(shù)生長期,。處于對數(shù)生長期的細胞的抗損傷能力是較強的。細胞濃度應(yīng)該處于5x106到1x107／mL之間,。每次轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒應(yīng)該控制在4-6μg，如果﹥10μg,，轉(zhuǎn)染效率也較大降低。電擊后,，應(yīng)該將DNA和細胞混合液在室溫下放置10分鐘，使細胞恢復(fù)損傷,。瞬時轉(zhuǎn)染后，可在48h-72h細胞長滿之后,，提取細胞蛋白或者RNA。

轉(zhuǎn)染方式：細胞由帶負電荷的磷脂雙分子層構(gòu)成,，這對大分子物質(zhì)來說是個不可透過的屏障,，比如DNA和RNA的磷酸骨架,，其也帶負電荷,。為了使核酸穿過細胞膜,，研究人員開發(fā)了多種技術(shù),，大致分為三類：化學(xué)方法---利用載體分子包被核酸使其呈現(xiàn)中性電荷或正電荷,。生物方法---利用基因工程細菌轉(zhuǎn)染非細菌基因到細胞中。物理方法---在細胞膜表面產(chǎn)生一個瞬時的孔從而導(dǎo)入DNA,。然而,，沒有一種方法適用于所有的細胞和實驗，理想的方法應(yīng)根據(jù)您的細胞類型和實驗需要進行選擇,，理想的方法應(yīng)具有高轉(zhuǎn)染效率,，低細胞毒性和對正常生理學(xué)的影響較小,，并且易于使用和可重復(fù)性等特點,。大部分細胞可以在無血清培養(yǎng)基中幾個小時內(nèi)保持健康,。蘇州細胞高效轉(zhuǎn)染試劑供應(yīng)商

在轉(zhuǎn)染過程中是可以使用血清的,。青島細胞高效轉(zhuǎn)染試劑

影響轉(zhuǎn)染試驗的因素：細胞狀態(tài)變化：（1）轉(zhuǎn)染試劑與細胞不匹配細胞轉(zhuǎn)染較適合的不是原代細胞,，也不是傳代很多次的細胞,。這是因為細胞培養(yǎng)在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變,，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化,。這會導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細胞行為的變化。較適合轉(zhuǎn)染的細胞是經(jīng)過幾次傳代后達到對數(shù)生長期的細胞,，細胞生長旺盛,，較容易轉(zhuǎn)染。（2）把握時機沒錯,！轉(zhuǎn)染也有適當(dāng)?shù)臅r機，相比較非分裂細胞——分裂細胞往往要比靜止細胞更易于攝取并表達外源DNA,。因此對大多數(shù)轉(zhuǎn)染操作而言,，細胞都在轉(zhuǎn)染當(dāng)天或前現(xiàn)在種板。同樣重要的是細胞在種板進行轉(zhuǎn)染時不應(yīng)處于過度生長的狀態(tài),，如細胞數(shù)量過多,，互相疊加，營養(yǎng)物質(zhì)耗竭,，代謝廢物積聚,，轉(zhuǎn)染率低下也是很正常的！青島細胞高效轉(zhuǎn)染試劑