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外泌體(exosomes)是活細胞經(jīng)過"內(nèi)吞-融合-外排"等一系列調(diào)控過程而形成的膜性囊泡,,來源于晚期核內(nèi)體(也稱為多囊泡體),直徑約為30-150nm,,密度在1.13-1.21g/ml,,天然存在于血液、唾液,、尿液及母乳等體液中,,同時外泌體也存在于組織和細胞間隙中。人體中幾乎所有類型的細胞均能產(chǎn)生外泌體,,人體中大約有1014個外泌體,,大約平均每個細胞產(chǎn)生1000-10000個。外泌體中含有核酸(DNA,、miRNA,、lncRNA、mRNA,、tRF等),、蛋白和脂類,,在細胞間物質(zhì)和信息轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用,,研究表明其在干細胞,、免疫調(diào)控、瘤轉(zhuǎn)移,、血管生成以及生物標(biāo)志物等領(lǐng)域都發(fā)揮著不可替代的作用外泌體的提取分離:PEG-base沉淀法,。南京外泌體提取試劑推薦廠家
在這項新的研究中,經(jīng)過基因修飾的外泌體(被稱作iExosome)能夠運送特異性地靶向KRAS突變基因的小RNA分子,,從而導(dǎo)致胰腺病模式小鼠病情緩解,,增加它們的總存活率。這些研究人員采用了一種被稱作RNA干擾(RNAi)的靶向方法:利用這些天然的納米顆粒(即外泌體)運送小干擾RNA(siRNA)或短發(fā)夾RNA(shRNA)分子來靶向胰腺病細胞中的KRAS突變基因,,從而影響多種胰腺病模型的一些病癥負荷和存活,。他們證實外泌體能夠作為一種高效的RNAi載體發(fā)揮作用,這是因為這些納米大小的囊泡(即外泌體)輕松地在體內(nèi)遷移和進入靶細胞(包括病細胞)中,。南京外泌體提取試劑推薦廠家也可以作為治病手段,,未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床治病。
外泌體的提取,、分離方法:開發(fā)高效,、快速、穩(wěn)定,,并且保持外泌體結(jié)構(gòu)和生物功能完整性的方法,,是目前外泌體應(yīng)用于臨床的基礎(chǔ)和前提。從細胞上清和體液中提取分離外泌體的方法很多,,但是外泌體的純度和產(chǎn)量卻和分離方法息息相關(guān),。通常分離步驟少、產(chǎn)率高,,但是純度會受到影響,。鑒于每種分離方法都有其優(yōu)缺點,實驗可以根據(jù)樣本來源,、下游實驗?zāi)康牡?,選擇合適的外泌體分離方法。2015年,,國際囊泡組織(InternationSocietyforExtracelluarVesicles,ISEV)指出,,簡單依靠一種分離方法得到的外泌體的純度和產(chǎn)量都難滿足實驗的需求。因此,,推薦聯(lián)合使用各種方法,,從而得到高純度和高產(chǎn)量的外泌體。
PS不是你想有,,想有就能有,,迄今為止所發(fā)現(xiàn)的外泌體,并非所有的外膜表面都暴露PS。例如,,細菌來源的外泌體膜表面沒有PS,,因此,本款試劑不能提取這種外泌體?,F(xiàn)在的研究尚未得知是否所有的外泌體上都會露出PS,,但是上述的外泌體標(biāo)記根據(jù)細胞種類不同表現(xiàn)出的信號強弱差大,通過利用本試劑盒PS親和法捕捉,、提取外泌體是較好的方法,。:這個MagCapture?ExosomeIsolationKitPS,1次提取的外泌體量大概是多少,?實驗樣品的種類和體積不同,,提取的外泌體量也不一樣。Wako的操作實例中,,一次提取操作可獲得蛋白量約30μg/mL(BCA法檢測),,粒子數(shù)1~2×1010(NanoSightLM10檢測)(經(jīng)莫能菌素鈉刺激外泌體分泌的K562培養(yǎng)上清5mL濃縮為1mL后,對其進行提?。?。另外,和光驗證了從1mL正常人混合血清提取一次,,可回收約34μg/mL蛋白質(zhì)(BCA法檢測),,約5×109/mL的粒子數(shù)(NanoSightLM10檢測)。本試劑盒終可獲得100μL的洗脫液,。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成,、“運載物”和相應(yīng)功能的精確分子機制剛剛開始研究。
1996年GRaposo等發(fā)現(xiàn)類似于B淋巴細胞的免疫細胞也會分泌抗原呈遞外泌體(antigenpresentingvesicle),,所分泌的外泌體可以直接刺激效應(yīng)CD4+細胞的抗一些病癥反應(yīng),。2007年HValadi等進一步發(fā)現(xiàn)細胞之間可以通過外泌體中RNA交換遺傳物質(zhì)。隨著有關(guān)外泌體研究越來越多,,研究者發(fā)現(xiàn)它普遍參與了機體免疫應(yīng)答,、抗原呈遞、細胞分化,、一些病癥生長于侵襲等各種生物過程中,。目前的主流觀點認為,外泌體的產(chǎn)生過程為:細胞膜內(nèi)陷,,形成內(nèi)體(endosome),,再形成多泡體(multivesicularbodies,MVB),,較后分泌到胞外成為外泌體,。外泌體中攜帶有母細胞的多種蛋白質(zhì),、脂類、DNA和RNA等重要信息,。外泌體較早見于1981年,,EGTrams等在體外培養(yǎng)的綿羊紅細胞上清液中發(fā)現(xiàn)了有膜結(jié)構(gòu)的小囊泡,并命名為exosome,。對于外泌體的作用,,當(dāng)時推測為細胞排泄廢物的一種方式。形成了一種全新的細胞間信息傳遞系統(tǒng),,影響細胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進程密切相關(guān)。金華正規(guī)外泌體提取試劑平均價格
外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,,不利于下游實驗,,難以普遍普及。南京外泌體提取試劑推薦廠家
外泌體(Exosomes)是細胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,,EVs),,其大小為30-150nm,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),,含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸,、蛋白和脂質(zhì)等),參與細胞間的分子傳遞,。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,,包括血液、唾液,、尿液,、乳汁等,同時也存在于組織樣本中,,如腦組織,、肌肉組織、脂肪組織等,。腦組織分離方法簡述:將腦組織剪成薄片,,放入離心管中加上消化液進行消化,經(jīng)水浴,、反復(fù)輕輕上下顛倒,,再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,,混勻,,置于冰上。再進行一系列的差速超速離心過程,,包括除雜,、濾膜過濾,、超離等。較后用PBS重懸外泌體,,用重懸后的外泌體進行下面的透射電鏡(TEM),、納米粒徑追蹤分子(NTA)和markerWB鑒定。來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中南京外泌體提取試劑推薦廠家